1、2022-11-62022-11-62022-11-6第三章第三章第三章第三章第三章第三章高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱分析分析分析分析分析分析3.1 3.1 3.1 高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱仪仪仪仪仪仪3.13.13.1高效液相色谱法（高效液相色谱法（高效液相色谱法（高效液相色谱法（高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLCHPLC）特点）特点）特点）特点）特点）特点 高效液相色谱是一种以高效液相色谱是一种以高效液相色谱是一种以高效液相色谱是一种以高效液相色谱是一种以高效液相色谱是一种以高压输出的
2、液体高压输出的液体高压输出的液体高压输出的液体高压输出的液体高压输出的液体为流动相的色谱技术，在技为流动相的色谱技术，在技为流动相的色谱技术，在技为流动相的色谱技术，在技为流动相的色谱技术，在技为流动相的色谱技术，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器。术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器。术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器。术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器。术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器。术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器。同气相色谱法（同气相色谱法（同气相色谱法（同气相色谱法（同气相色谱法（同气相色谱法（GCGCGCGCGCG
3、C）相比，高效液相色谱法（）相比，高效液相色谱法（）相比，高效液相色谱法（）相比，高效液相色谱法（）相比，高效液相色谱法（）相比，高效液相色谱法（HPLCHPLCHPLCHPLCHPLCHPLC）具有以下特点：）具有以下特点：）具有以下特点：）具有以下特点：）具有以下特点：）具有以下特点：GC GC GC GC GC GC只能分析只能分析只能分析只能分析只能分析只能分析气体和沸点较低气体和沸点较低气体和沸点较低气体和沸点较低气体和沸点较低气体和沸点较低的化合物；对于那些的化合物；对于那些的化合物；对于那些的化合物；对于那些的化合物；对于那些的化合物；对于那些沸点高、热稳定性差沸点高、热稳定性差
4、沸点高、热稳定性差沸点高、热稳定性差沸点高、热稳定性差沸点高、热稳定性差、摩尔质量大、摩尔质量大、摩尔质量大、摩尔质量大、摩尔质量大、摩尔质量大的有机物，目前主要采用的有机物，目前主要采用的有机物，目前主要采用的有机物，目前主要采用的有机物，目前主要采用的有机物，目前主要采用HPLCHPLCHPLCHPLCHPLCHPLC进行分析。进行分析。进行分析。进行分析。进行分析。进行分析。GC GC GC GC GC GC的流动相是惰性气体，仅起运载作用；的流动相是惰性气体，仅起运载作用；的流动相是惰性气体，仅起运载作用；的流动相是惰性气体，仅起运载作用；的流动相是惰性气体，仅起运载作用；的流动相是惰
5、性气体，仅起运载作用；HPLCHPLCHPLCHPLCHPLCHPLC的流动相可选择不同极的流动相可选择不同极的流动相可选择不同极的流动相可选择不同极的流动相可选择不同极的流动相可选择不同极性的液体，对组分有一定的亲和力，可通过改变固定相和流动相提高性的液体，对组分有一定的亲和力，可通过改变固定相和流动相提高性的液体，对组分有一定的亲和力，可通过改变固定相和流动相提高性的液体，对组分有一定的亲和力，可通过改变固定相和流动相提高性的液体，对组分有一定的亲和力，可通过改变固定相和流动相提高性的液体，对组分有一定的亲和力，可通过改变固定相和流动相提高HPLCHPLCHPLCHPLCHPLCHPLC的
6、分离效率。的分离效率。的分离效率。的分离效率。的分离效率。的分离效率。GC GC GC GC GC GC一般在一般在一般在一般在一般在一般在较高温度较高温度较高温度较高温度较高温度较高温度下进行分离和测定，其应用范围收到了很大的限制下进行分离和测定，其应用范围收到了很大的限制下进行分离和测定，其应用范围收到了很大的限制下进行分离和测定，其应用范围收到了很大的限制下进行分离和测定，其应用范围收到了很大的限制下进行分离和测定，其应用范围收到了很大的限制；HPLCHPLCHPLCHPLCHPLCHPLC一般在一般在一般在一般在一般在一般在室温室温室温室温室温室温下进行分析，不受下进行分析，不受下进行
7、分析，不受下进行分析，不受下进行分析，不受下进行分析，不受样品挥发性和高温下稳定性样品挥发性和高温下稳定性样品挥发性和高温下稳定性样品挥发性和高温下稳定性样品挥发性和高温下稳定性样品挥发性和高温下稳定性的限制的限制的限制的限制的限制的限制注意：注意：注意：注意：注意：注意：GCGCGCGCGCGC更快、更灵敏、更方便，而且耗费低，因此能用更快、更灵敏、更方便，而且耗费低，因此能用更快、更灵敏、更方便，而且耗费低，因此能用更快、更灵敏、更方便，而且耗费低，因此能用更快、更灵敏、更方便，而且耗费低，因此能用更快、更灵敏、更方便，而且耗费低，因此能用GCGCGCGCGCGC分析的样品分析的样品分析的
8、样品分析的样品分析的样品分析的样品一般不用一般不用一般不用一般不用一般不用一般不用HPLCHPLCHPLCHPLCHPLCHPLC。3.23.23.2高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪 高效液相色谱仪是由高效液相色谱仪是由高效液相色谱仪是由高效液相色谱仪是由高效液相色谱仪是由高效液相色谱仪是由高压输液系统、进样系统、分离系统、和检测高压输液系统、进样系统、分离系统、和检测高压输液系统、进样系统、分离系统、和检测高压输液系统、进样系统、分离系统、和检测高压输液系统、进样系统、分离系统、和检测高压输液系统、进样系统、分离系统、和检测系统、数据记录与
9、处理系统系统、数据记录与处理系统系统、数据记录与处理系统系统、数据记录与处理系统系统、数据记录与处理系统系统、数据记录与处理系统等五个主要部分构成，此外还配有辅助装置等五个主要部分构成，此外还配有辅助装置等五个主要部分构成，此外还配有辅助装置等五个主要部分构成，此外还配有辅助装置等五个主要部分构成，此外还配有辅助装置等五个主要部分构成，此外还配有辅助装置，如脱气机、梯度洗脱、自动进样等。其结构示意图如下：，如脱气机、梯度洗脱、自动进样等。其结构示意图如下：，如脱气机、梯度洗脱、自动进样等。其结构示意图如下：，如脱气机、梯度洗脱、自动进样等。其结构示意图如下：，如脱气机、梯度洗脱、自动进样等。其
10、结构示意图如下：，如脱气机、梯度洗脱、自动进样等。其结构示意图如下：高效液相色谱仪的结构和工作流程高效液相色谱仪的结构和工作流程高效液相色谱仪的结构和工作流程高效液相色谱仪的结构和工作流程高效液相色谱仪的结构和工作流程高效液相色谱仪的结构和工作流程工作流程：工作流程：工作流程：工作流程：工作流程：工作流程：高压泵将贮液瓶中的溶剂送入色谱柱中，然后从检测器的出高压泵将贮液瓶中的溶剂送入色谱柱中，然后从检测器的出高压泵将贮液瓶中的溶剂送入色谱柱中，然后从检测器的出高压泵将贮液瓶中的溶剂送入色谱柱中，然后从检测器的出高压泵将贮液瓶中的溶剂送入色谱柱中，然后从检测器的出高压泵将贮液瓶中的溶剂送入色谱柱
11、中，然后从检测器的出口流出，当待测样品从注射器注入时，流经进样器的流动相将其带入色口流出，当待测样品从注射器注入时，流经进样器的流动相将其带入色口流出，当待测样品从注射器注入时，流经进样器的流动相将其带入色口流出，当待测样品从注射器注入时，流经进样器的流动相将其带入色口流出，当待测样品从注射器注入时，流经进样器的流动相将其带入色口流出，当待测样品从注射器注入时，流经进样器的流动相将其带入色谱柱中进行分离，然后依次进入检测器，由记录仪将检测器送出的信号谱柱中进行分离，然后依次进入检测器，由记录仪将检测器送出的信号谱柱中进行分离，然后依次进入检测器，由记录仪将检测器送出的信号谱柱中进行分离，然后依
12、次进入检测器，由记录仪将检测器送出的信号谱柱中进行分离，然后依次进入检测器，由记录仪将检测器送出的信号谱柱中进行分离，然后依次进入检测器，由记录仪将检测器送出的信号记录下来得到色谱图。记录下来得到色谱图。记录下来得到色谱图。记录下来得到色谱图。记录下来得到色谱图。记录下来得到色谱图。一、高压输液系统一、高压输液系统一、高压输液系统一、高压输液系统一、高压输液系统一、高压输液系统由于由于由于由于由于由于HPLCHPLCHPLCHPLCHPLCHPLC所用的固定相颗粒极细，因此对流动相的阻力很大，为使流动所用的固定相颗粒极细，因此对流动相的阻力很大，为使流动所用的固定相颗粒极细，因此对流动相的阻力
13、很大，为使流动所用的固定相颗粒极细，因此对流动相的阻力很大，为使流动所用的固定相颗粒极细，因此对流动相的阻力很大，为使流动所用的固定相颗粒极细，因此对流动相的阻力很大，为使流动相有较大的流速，必须配备高压输液系统。相有较大的流速，必须配备高压输液系统。相有较大的流速，必须配备高压输液系统。相有较大的流速，必须配备高压输液系统。相有较大的流速，必须配备高压输液系统。相有较大的流速，必须配备高压输液系统。高压输液系统一般由高压输液系统一般由高压输液系统一般由高压输液系统一般由高压输液系统一般由高压输液系统一般由贮液器、高压泵、脱气机、梯度洗脱贮液器、高压泵、脱气机、梯度洗脱贮液器、高压泵、脱气机、
14、梯度洗脱贮液器、高压泵、脱气机、梯度洗脱贮液器、高压泵、脱气机、梯度洗脱贮液器、高压泵、脱气机、梯度洗脱等装置组成。等装置组成。等装置组成。等装置组成。等装置组成。等装置组成。1 1 1、溶剂脱气装置（脱气机）、溶剂脱气装置（脱气机）、溶剂脱气装置（脱气机）、溶剂脱气装置（脱气机）、溶剂脱气装置（脱气机）、溶剂脱气装置（脱气机）脱气装置的作用目的是：脱气装置的作用目的是：脱气装置的作用目的是：脱气装置的作用目的是：脱气装置的作用目的是：脱气装置的作用目的是：为了防止流动相从高压柱流出时，释放出的气为了防止流动相从高压柱流出时，释放出的气为了防止流动相从高压柱流出时，释放出的气为了防止流动相从高
15、压柱流出时，释放出的气为了防止流动相从高压柱流出时，释放出的气为了防止流动相从高压柱流出时，释放出的气泡（溶解在溶剂中的泡（溶解在溶剂中的泡（溶解在溶剂中的泡（溶解在溶剂中的泡（溶解在溶剂中的泡（溶解在溶剂中的N N N N N N2 2 2 2 2 2、O O O O O O2 2 2 2 2 2等）进入检测器而使噪声剧增，甚至不能检等）进入检测器而使噪声剧增，甚至不能检等）进入检测器而使噪声剧增，甚至不能检等）进入检测器而使噪声剧增，甚至不能检等）进入检测器而使噪声剧增，甚至不能检等）进入检测器而使噪声剧增，甚至不能检测。测。测。测。测。测。溶剂脱气方式有氦气鼓泡、超声波脱气、真空脱气等。
16、溶剂脱气方式有氦气鼓泡、超声波脱气、真空脱气等。溶剂脱气方式有氦气鼓泡、超声波脱气、真空脱气等。溶剂脱气方式有氦气鼓泡、超声波脱气、真空脱气等。溶剂脱气方式有氦气鼓泡、超声波脱气、真空脱气等。溶剂脱气方式有氦气鼓泡、超声波脱气、真空脱气等。2 2 2、高压泵、高压泵、高压泵、高压泵、高压泵、高压泵高压泵的作用：高压泵的作用：高压泵的作用：高压泵的作用：高压泵的作用：高压泵的作用：保证输出的流动相具有恒定的流速。保证输出的流动相具有恒定的流速。保证输出的流动相具有恒定的流速。保证输出的流动相具有恒定的流速。保证输出的流动相具有恒定的流速。保证输出的流动相具有恒定的流速。高压泵输出流动相的压力，一
17、般为高压泵输出流动相的压力，一般为高压泵输出流动相的压力，一般为高压泵输出流动相的压力，一般为高压泵输出流动相的压力，一般为高压泵输出流动相的压力，一般为1501501501501501501010101010105 5 5 5 5 53503503503503503501010101010105 5 5 5 5 5PaPaPaPaPaPa，高压泵应无，高压泵应无，高压泵应无，高压泵应无，高压泵应无，高压泵应无脉动或脉动极小。脉动或脉动极小。脉动或脉动极小。脉动或脉动极小。脉动或脉动极小。脉动或脉动极小。3 3 3、梯度洗脱、梯度洗脱、梯度洗脱、梯度洗脱、梯度洗脱、梯度洗脱梯度洗脱：梯度洗脱：
18、梯度洗脱：梯度洗脱：梯度洗脱：梯度洗脱：流动相中含有两种或更多不同极性的溶剂，在分离过程流动相中含有两种或更多不同极性的溶剂，在分离过程流动相中含有两种或更多不同极性的溶剂，在分离过程流动相中含有两种或更多不同极性的溶剂，在分离过程流动相中含有两种或更多不同极性的溶剂，在分离过程流动相中含有两种或更多不同极性的溶剂，在分离过程中按一定的程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中按一定的程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中按一定的程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中按一定的程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中按一定的程序连续改变流动相中溶剂的配比
19、和极性，通过流动相中按一定的程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中极性的变化来改变被分离组分的容量因子中极性的变化来改变被分离组分的容量因子中极性的变化来改变被分离组分的容量因子中极性的变化来改变被分离组分的容量因子中极性的变化来改变被分离组分的容量因子中极性的变化来改变被分离组分的容量因子k k k k k k和选择性因子和选择性因子和选择性因子和选择性因子和选择性因子和选择性因子a a a a a a，以提，以提，以提，以提，以提，以提高分离效果。高分离效果。高分离效果。高分离效果。高分离效果。高分离效果。为什么要进行梯度洗脱？为什么要进行梯度洗脱？为什么要进行梯度洗脱？为什么
20、要进行梯度洗脱？为什么要进行梯度洗脱？为什么要进行梯度洗脱？在进行多组分的复杂样品分离时，经常会在进行多组分的复杂样品分离时，经常会在进行多组分的复杂样品分离时，经常会在进行多组分的复杂样品分离时，经常会在进行多组分的复杂样品分离时，经常会在进行多组分的复杂样品分离时，经常会碰到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分分离度太大，碰到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分分离度太大，碰到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分分离度太大，碰到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分分离度太大，碰到前面的一些成分分离不完全，而后面的一些成分分离度太大，碰到前面的一些成分分离不完全，而后
21、面的一些成分分离度太大，且出峰时间很晚、峰形较差。且出峰时间很晚、峰形较差。且出峰时间很晚、峰形较差。且出峰时间很晚、峰形较差。且出峰时间很晚、峰形较差。且出峰时间很晚、峰形较差。为使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并达到分为使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并达到分为使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并达到分为使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并达到分为使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并达到分为使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并达到分离且有良好的峰形，往往要用到梯度洗脱技术。离且有良好的峰形，往往要用到梯
22、度洗脱技术。离且有良好的峰形，往往要用到梯度洗脱技术。离且有良好的峰形，往往要用到梯度洗脱技术。离且有良好的峰形，往往要用到梯度洗脱技术。离且有良好的峰形，往往要用到梯度洗脱技术。其作用相当于气相色谱中的程序升温。其作用相当于气相色谱中的程序升温。其作用相当于气相色谱中的程序升温。其作用相当于气相色谱中的程序升温。其作用相当于气相色谱中的程序升温。其作用相当于气相色谱中的程序升温。根据溶剂的混合方式，可分为根据溶剂的混合方式，可分为根据溶剂的混合方式，可分为根据溶剂的混合方式，可分为根据溶剂的混合方式，可分为根据溶剂的混合方式，可分为低压梯度和高压梯度低压梯度和高压梯度低压梯度和高压梯度低压梯
23、度和高压梯度低压梯度和高压梯度低压梯度和高压梯度。低压梯度：低压梯度：低压梯度：低压梯度：低压梯度：低压梯度：在常压下预先按一定的程序将溶剂用比例阀混合在常压下预先按一定的程序将溶剂用比例阀混合在常压下预先按一定的程序将溶剂用比例阀混合在常压下预先按一定的程序将溶剂用比例阀混合在常压下预先按一定的程序将溶剂用比例阀混合在常压下预先按一定的程序将溶剂用比例阀混合后再用泵输入色谱柱，也称为外梯度。后再用泵输入色谱柱，也称为外梯度。后再用泵输入色谱柱，也称为外梯度。后再用泵输入色谱柱，也称为外梯度。后再用泵输入色谱柱，也称为外梯度。后再用泵输入色谱柱，也称为外梯度。优点：只需要一个单元泵，成本低，使
24、用方便。优点：只需要一个单元泵，成本低，使用方便。优点：只需要一个单元泵，成本低，使用方便。优点：只需要一个单元泵，成本低，使用方便。优点：只需要一个单元泵，成本低，使用方便。优点：只需要一个单元泵，成本低，使用方便。高压梯度：高压梯度：高压梯度：高压梯度：高压梯度：高压梯度：将溶剂分别用高压泵增压后输入色谱系统的梯度将溶剂分别用高压泵增压后输入色谱系统的梯度将溶剂分别用高压泵增压后输入色谱系统的梯度将溶剂分别用高压泵增压后输入色谱系统的梯度将溶剂分别用高压泵增压后输入色谱系统的梯度将溶剂分别用高压泵增压后输入色谱系统的梯度混合室，加以混合后送入色谱柱，又称为内梯度。混合室，加以混合后送入色谱
25、柱，又称为内梯度。混合室，加以混合后送入色谱柱，又称为内梯度。混合室，加以混合后送入色谱柱，又称为内梯度。混合室，加以混合后送入色谱柱，又称为内梯度。混合室，加以混合后送入色谱柱，又称为内梯度。优点：通过梯度程序控制器控制每台单元泵的输出，就能获优点：通过梯度程序控制器控制每台单元泵的输出，就能获优点：通过梯度程序控制器控制每台单元泵的输出，就能获优点：通过梯度程序控制器控制每台单元泵的输出，就能获优点：通过梯度程序控制器控制每台单元泵的输出，就能获优点：通过梯度程序控制器控制每台单元泵的输出，就能获得任意形式的梯度曲线，而且精度高。得任意形式的梯度曲线，而且精度高。得任意形式的梯度曲线，而且
26、精度高。得任意形式的梯度曲线，而且精度高。得任意形式的梯度曲线，而且精度高。得任意形式的梯度曲线，而且精度高。缺点：需要两台或多台泵，成本高。缺点：需要两台或多台泵，成本高。缺点：需要两台或多台泵，成本高。缺点：需要两台或多台泵，成本高。缺点：需要两台或多台泵，成本高。缺点：需要两台或多台泵，成本高。进样口进样口进样口进样口进样口进样口检测器检测器检测器检测器检测器检测器色谱图色谱图色谱图色谱图色谱图色谱图色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱溶剂溶剂溶剂溶剂溶剂溶剂高压泵高压泵高压泵高压泵高压泵高压泵混合器混合器混合器混合器混合器混合器二元泵高压洗脱系统二元泵高压洗脱系统二元泵高压洗脱系统二元
27、泵高压洗脱系统二元泵高压洗脱系统二元泵高压洗脱系统2022-11-62022-11-62022-11-6由一个单元泵和比例阀组成的四元梯度洗脱系统由一个单元泵和比例阀组成的四元梯度洗脱系统由一个单元泵和比例阀组成的四元梯度洗脱系统由一个单元泵和比例阀组成的四元梯度洗脱系统由一个单元泵和比例阀组成的四元梯度洗脱系统由一个单元泵和比例阀组成的四元梯度洗脱系统2022-11-62022-11-62022-11-6二、进样系统二、进样系统二、进样系统二、进样系统二、进样系统二、进样系统柱外展宽：柱外展宽：柱外展宽：柱外展宽：柱外展宽：柱外展宽：指色谱柱外的因素引起的峰展宽，主要包括指色谱柱外的因素引起
28、的峰展宽，主要包括指色谱柱外的因素引起的峰展宽，主要包括指色谱柱外的因素引起的峰展宽，主要包括指色谱柱外的因素引起的峰展宽，主要包括指色谱柱外的因素引起的峰展宽，主要包括进样进样进样进样进样进样系统系统系统系统系统系统、连接管道连接管道连接管道连接管道连接管道连接管道及及及及及及检测器检测器检测器检测器检测器检测器中存在的中存在的中存在的中存在的中存在的中存在的死体积死体积死体积死体积死体积死体积引起的峰展宽。引起的峰展宽。引起的峰展宽。引起的峰展宽。引起的峰展宽。引起的峰展宽。柱外展宽可分为柱前展宽和柱后展宽。柱外展宽可分为柱前展宽和柱后展宽。柱外展宽可分为柱前展宽和柱后展宽。柱外展宽可分为
29、柱前展宽和柱后展宽。柱外展宽可分为柱前展宽和柱后展宽。柱外展宽可分为柱前展宽和柱后展宽。进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此对进样系统要求进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此对进样系统要求进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此对进样系统要求进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此对进样系统要求进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此对进样系统要求进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此对进样系统要求比较严格。比较严格。比较严格。比较严格。比较严格。比较严格。进样要求：将试样进样要求：将试样进样要求：将试样进样要求：将试样进样要求：将试样进样要求：将试样“浓缩浓缩浓缩浓缩浓缩浓缩”地瞬时注入地瞬时
30、注入地瞬时注入地瞬时注入地瞬时注入地瞬时注入色谱柱上端柱担体的色谱柱上端柱担体的色谱柱上端柱担体的色谱柱上端柱担体的色谱柱上端柱担体的色谱柱上端柱担体的中心中心中心中心中心中心成一个小点。如果注入柱担体前的流动相中，通常会使成一个小点。如果注入柱担体前的流动相中，通常会使成一个小点。如果注入柱担体前的流动相中，通常会使成一个小点。如果注入柱担体前的流动相中，通常会使成一个小点。如果注入柱担体前的流动相中，通常会使成一个小点。如果注入柱担体前的流动相中，通常会使溶质以扩散形式进入柱顶，会导致试样组分分离效能的降低溶质以扩散形式进入柱顶，会导致试样组分分离效能的降低溶质以扩散形式进入柱顶，会导致试
31、样组分分离效能的降低溶质以扩散形式进入柱顶，会导致试样组分分离效能的降低溶质以扩散形式进入柱顶，会导致试样组分分离效能的降低溶质以扩散形式进入柱顶，会导致试样组分分离效能的降低进样装置一般有进样装置一般有进样装置一般有进样装置一般有进样装置一般有进样装置一般有隔膜隔膜隔膜隔膜隔膜隔膜注注注注注注射器进样射器进样射器进样射器进样射器进样射器进样、停流进样停流进样停流进样停流进样停流进样停流进样、高压定量进样高压定量进样高压定量进样高压定量进样高压定量进样高压定量进样阀阀阀阀阀阀和和和和和和自动进样器进样自动进样器进样自动进样器进样自动进样器进样自动进样器进样自动进样器进样。2022-11-620
32、22-11-62022-11-61 1 1、隔膜注射器进样、隔膜注射器进样、隔膜注射器进样、隔膜注射器进样、隔膜注射器进样、隔膜注射器进样与气相色谱类似。与气相色谱类似。与气相色谱类似。与气相色谱类似。与气相色谱类似。与气相色谱类似。在色谱柱顶端装一耐压弹性隔膜，进样时用微量注射器刺穿在色谱柱顶端装一耐压弹性隔膜，进样时用微量注射器刺穿在色谱柱顶端装一耐压弹性隔膜，进样时用微量注射器刺穿在色谱柱顶端装一耐压弹性隔膜，进样时用微量注射器刺穿在色谱柱顶端装一耐压弹性隔膜，进样时用微量注射器刺穿在色谱柱顶端装一耐压弹性隔膜，进样时用微量注射器刺穿隔膜将样品注入色谱柱。隔膜将样品注入色谱柱。隔膜将样品
33、注入色谱柱。隔膜将样品注入色谱柱。隔膜将样品注入色谱柱。隔膜将样品注入色谱柱。优点：装置简单、价廉、死体积小；优点：装置简单、价廉、死体积小；优点：装置简单、价廉、死体积小；优点：装置简单、价廉、死体积小；优点：装置简单、价廉、死体积小；优点：装置简单、价廉、死体积小；缺点：允许进样量小，重现性差；不能承受高压，当压力超缺点：允许进样量小，重现性差；不能承受高压，当压力超缺点：允许进样量小，重现性差；不能承受高压，当压力超缺点：允许进样量小，重现性差；不能承受高压，当压力超缺点：允许进样量小，重现性差；不能承受高压，当压力超缺点：允许进样量小，重现性差；不能承受高压，当压力超过过过过过过150
34、1501501501501501010101010105 5 5 5 5 5PaPaPaPaPaPa后，由于密封垫的泄漏，带压进样实际上成为后，由于密封垫的泄漏，带压进样实际上成为后，由于密封垫的泄漏，带压进样实际上成为后，由于密封垫的泄漏，带压进样实际上成为后，由于密封垫的泄漏，带压进样实际上成为后，由于密封垫的泄漏，带压进样实际上成为不可能。不可能。不可能。不可能。不可能。不可能。2022-11-62022-11-62022-11-62 2 2、停流进样、停流进样、停流进样、停流进样、停流进样、停流进样方法：方法：方法：方法：方法：方法：打开流动相泄流阀，使柱前压力下降为零，打开流动相泄流
35、阀，使柱前压力下降为零，打开流动相泄流阀，使柱前压力下降为零，打开流动相泄流阀，使柱前压力下降为零，打开流动相泄流阀，使柱前压力下降为零，打开流动相泄流阀，使柱前压力下降为零，注射器进注射器进注射器进注射器进注射器进注射器进样（同隔膜注射器进样法）后，关闭阀门使流动相压力恢复样（同隔膜注射器进样法）后，关闭阀门使流动相压力恢复样（同隔膜注射器进样法）后，关闭阀门使流动相压力恢复样（同隔膜注射器进样法）后，关闭阀门使流动相压力恢复样（同隔膜注射器进样法）后，关闭阀门使流动相压力恢复样（同隔膜注射器进样法）后，关闭阀门使流动相压力恢复，把试样带入色谱柱。，把试样带入色谱柱。，把试样带入色谱柱。，把
36、试样带入色谱柱。，把试样带入色谱柱。，把试样带入色谱柱。优点：优点：优点：优点：优点：优点：停流后再进样，以防止泄漏，可用于高压。停流后再进样，以防止泄漏，可用于高压。停流后再进样，以防止泄漏，可用于高压。停流后再进样，以防止泄漏，可用于高压。停流后再进样，以防止泄漏，可用于高压。停流后再进样，以防止泄漏，可用于高压。缺点：缺点：缺点：缺点：缺点：缺点：停流进样方式无法取得精确的保留时间，峰形的重现停流进样方式无法取得精确的保留时间，峰形的重现停流进样方式无法取得精确的保留时间，峰形的重现停流进样方式无法取得精确的保留时间，峰形的重现停流进样方式无法取得精确的保留时间，峰形的重现停流进样方式无
37、法取得精确的保留时间，峰形的重现性亦较差。性亦较差。性亦较差。性亦较差。性亦较差。性亦较差。2022-11-62022-11-62022-11-63 3 3、高压定量进样阀（六通阀进样）、高压定量进样阀（六通阀进样）、高压定量进样阀（六通阀进样）、高压定量进样阀（六通阀进样）、高压定量进样阀（六通阀进样）、高压定量进样阀（六通阀进样）六通阀进样六通阀进样六通阀进样六通阀进样六通阀进样六通阀进样是目前最常用的手动进样方式。是目前最常用的手动进样方式。是目前最常用的手动进样方式。是目前最常用的手动进样方式。是目前最常用的手动进样方式。是目前最常用的手动进样方式。2022-11-62022-11-6
38、2022-11-6特点：特点：特点：特点：特点：特点：注射器要取比定量管容积大注射器要取比定量管容积大注射器要取比定量管容积大注射器要取比定量管容积大注射器要取比定量管容积大注射器要取比定量管容积大3 3 3 3 3 3 5 5 5 5 5 5倍倍倍倍倍倍的试样溶液，多余的试样通的试样溶液，多余的试样通的试样溶液，多余的试样通的试样溶液，多余的试样通的试样溶液，多余的试样通的试样溶液，多余的试样通过连接过连接过连接过连接过连接过连接6 6 6 6 6 6的管道溢出。的管道溢出。的管道溢出。的管道溢出。的管道溢出。的管道溢出。由于进样可由由于进样可由由于进样可由由于进样可由由于进样可由由于进样可
39、由定量管的体积定量管的体积定量管的体积定量管的体积定量管的体积定量管的体积严格控制，因此进样准确，重复性严格控制，因此进样准确，重复性严格控制，因此进样准确，重复性严格控制，因此进样准确，重复性严格控制，因此进样准确，重复性严格控制，因此进样准确，重复性好，适用于定量分析，更换好，适用于定量分析，更换好，适用于定量分析，更换好，适用于定量分析，更换好，适用于定量分析，更换好，适用于定量分析，更换不同体积的定量管不同体积的定量管不同体积的定量管不同体积的定量管不同体积的定量管不同体积的定量管，可调整进样量。，可调整进样量。，可调整进样量。，可调整进样量。，可调整进样量。，可调整进样量。也可采用较
40、大体积的进样管进少量试样，进样量由注射器控制也可采用较大体积的进样管进少量试样，进样量由注射器控制也可采用较大体积的进样管进少量试样，进样量由注射器控制也可采用较大体积的进样管进少量试样，进样量由注射器控制也可采用较大体积的进样管进少量试样，进样量由注射器控制也可采用较大体积的进样管进少量试样，进样量由注射器控制。注意：注意：注意：注意：注意：注意：六通阀的内部管道很细，样品液中绝不应带有固体微粒，六通阀的内部管道很细，样品液中绝不应带有固体微粒，六通阀的内部管道很细，样品液中绝不应带有固体微粒，六通阀的内部管道很细，样品液中绝不应带有固体微粒，六通阀的内部管道很细，样品液中绝不应带有固体微粒
41、，六通阀的内部管道很细，样品液中绝不应带有固体微粒，以免堵塞通道；另外，样品液的浓度也不宜太高，以防止其在进以免堵塞通道；另外，样品液的浓度也不宜太高，以防止其在进以免堵塞通道；另外，样品液的浓度也不宜太高，以防止其在进以免堵塞通道；另外，样品液的浓度也不宜太高，以防止其在进以免堵塞通道；另外，样品液的浓度也不宜太高，以防止其在进以免堵塞通道；另外，样品液的浓度也不宜太高，以防止其在进样阀内结晶析出。样阀内结晶析出。样阀内结晶析出。样阀内结晶析出。样阀内结晶析出。样阀内结晶析出。应经常清洗进样阀的通道：应经常清洗进样阀的通道：应经常清洗进样阀的通道：应经常清洗进样阀的通道：应经常清洗进样阀的通
42、道：应经常清洗进样阀的通道：阀的扳手放在阀的扳手放在阀的扳手放在阀的扳手放在阀的扳手放在阀的扳手放在进样进样进样进样进样进样位置，使冲洗液从位置，使冲洗液从位置，使冲洗液从位置，使冲洗液从位置，使冲洗液从位置，使冲洗液从废液口废液口废液口废液口废液口废液口5 5 5 5 5 5流出。流出。流出。流出。流出。流出。2022-11-62022-11-62022-11-64 4 4、自动进样器进样、自动进样器进样、自动进样器进样、自动进样器进样、自动进样器进样、自动进样器进样由计算机自动控制定量阀，按预先编制好的程序进样，可自由计算机自动控制定量阀，按预先编制好的程序进样，可自由计算机自动控制定量阀
43、，按预先编制好的程序进样，可自由计算机自动控制定量阀，按预先编制好的程序进样，可自由计算机自动控制定量阀，按预先编制好的程序进样，可自由计算机自动控制定量阀，按预先编制好的程序进样，可自动完成几十或上百个样品的分析。动完成几十或上百个样品的分析。动完成几十或上百个样品的分析。动完成几十或上百个样品的分析。动完成几十或上百个样品的分析。动完成几十或上百个样品的分析。在进行大量样品的分析时，使用自动进样器操作可节省大量在进行大量样品的分析时，使用自动进样器操作可节省大量在进行大量样品的分析时，使用自动进样器操作可节省大量在进行大量样品的分析时，使用自动进样器操作可节省大量在进行大量样品的分析时，使
44、用自动进样器操作可节省大量在进行大量样品的分析时，使用自动进样器操作可节省大量的人力和时间，但此装置成本高。的人力和时间，但此装置成本高。的人力和时间，但此装置成本高。的人力和时间，但此装置成本高。的人力和时间，但此装置成本高。的人力和时间，但此装置成本高。2022-11-62022-11-62022-11-6三、分离系统三、分离系统三、分离系统三、分离系统三、分离系统三、分离系统色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱包括柱管和固定相两部分。色谱柱包括柱管和固定相两部分。色谱柱包括柱管和固定相两部分。色谱柱包括柱管和固定相两部分。色谱柱包括柱管和固定相两部分。色谱柱包括柱管和固定相两部分。
45、常用的标准柱型是内径为常用的标准柱型是内径为常用的标准柱型是内径为常用的标准柱型是内径为常用的标准柱型是内径为常用的标准柱型是内径为4.6mm4.6mm4.6mm4.6mm4.6mm4.6mm或或或或或或3.9mm3.9mm3.9mm3.9mm3.9mm3.9mm，长度为，长度为，长度为，长度为，长度为，长度为151515151515 30cm30cm30cm30cm30cm30cm的直型不锈钢柱，填料颗粒度的直型不锈钢柱，填料颗粒度的直型不锈钢柱，填料颗粒度的直型不锈钢柱，填料颗粒度的直型不锈钢柱，填料颗粒度的直型不锈钢柱，填料颗粒度5 5 5 5 5 5 101010101010m m m
46、 m m mm m m m m m。一个重要的发展趋势是减小填料颗粒度（一个重要的发展趋势是减小填料颗粒度（一个重要的发展趋势是减小填料颗粒度（一个重要的发展趋势是减小填料颗粒度（一个重要的发展趋势是减小填料颗粒度（一个重要的发展趋势是减小填料颗粒度（3 3 3555m m m m m mmmm），以采），以采），以采），以采），以采），以采用更短的柱（数厘米），加快分析速度。用更短的柱（数厘米），加快分析速度。用更短的柱（数厘米），加快分析速度。用更短的柱（数厘米），加快分析速度。用更短的柱（数厘米），加快分析速度。用更短的柱（数厘米），加快分析速度。2022-11-62022-11-620
47、22-11-6液相色谱柱的分离效能，主要取决于液相色谱柱的分离效能，主要取决于液相色谱柱的分离效能，主要取决于液相色谱柱的分离效能，主要取决于液相色谱柱的分离效能，主要取决于液相色谱柱的分离效能，主要取决于柱填料的性能柱填料的性能柱填料的性能柱填料的性能柱填料的性能柱填料的性能和和和和和和柱床的柱床的柱床的柱床的柱床的柱床的结构（柱子的装填）结构（柱子的装填）结构（柱子的装填）结构（柱子的装填）结构（柱子的装填）结构（柱子的装填）柱子的装填对柱效能影响很大，装柱方法有柱子的装填对柱效能影响很大，装柱方法有柱子的装填对柱效能影响很大，装柱方法有柱子的装填对柱效能影响很大，装柱方法有柱子的装填对柱
48、效能影响很大，装柱方法有柱子的装填对柱效能影响很大，装柱方法有干法干法干法干法干法干法和和和和和和湿法湿法湿法湿法湿法湿法两种两种两种两种两种两种。干法：干法：干法：干法：干法：干法：填料粒度大于填料粒度大于填料粒度大于填料粒度大于填料粒度大于填料粒度大于202020m m m m m mmmm（和气相色谱法装料方法相同）（和气相色谱法装料方法相同）（和气相色谱法装料方法相同）（和气相色谱法装料方法相同）（和气相色谱法装料方法相同）（和气相色谱法装料方法相同）湿法（匀浆法）湿法（匀浆法）湿法（匀浆法）湿法（匀浆法）湿法（匀浆法）湿法（匀浆法）：通常采用匀浆法填充：通常采用匀浆法填充：通常采用匀
49、浆法填充：通常采用匀浆法填充：通常采用匀浆法填充：通常采用匀浆法填充HPLCHPLCHPLC色谱柱，先色谱柱，先色谱柱，先色谱柱，先色谱柱，先色谱柱，先将填料配成悬浮液，在高压泵的作用下，快速将其压入装有将填料配成悬浮液，在高压泵的作用下，快速将其压入装有将填料配成悬浮液，在高压泵的作用下，快速将其压入装有将填料配成悬浮液，在高压泵的作用下，快速将其压入装有将填料配成悬浮液，在高压泵的作用下，快速将其压入装有将填料配成悬浮液，在高压泵的作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。洗脱液的色谱柱内，经冲
50、洗后，即可备用。洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。2022-11-62022-11-62022-11-6注意：注意：注意：注意：注意：注意：色谱柱装填料之前是没有方向的，但色谱柱装填料之前是没有方向的，但色谱柱装填料之前是没有方向的，但色谱柱装填料之前是没有方向的，但色谱柱装填料之前是没有方向的，但色谱柱装填料之前是没有方向的，但装填好固定相后装填好固定相后装填好固定相后装填好固定相后装填好固定相后装填好固定相后柱子是有方向的柱子是有方向的柱子是有方向的柱子是有方向的柱子是有方向的柱子是有方向的。使用时，应使。使用时，应使。使用时，应使。使用时，应使。
