1、免疫学检测免疫学治疗免疫学预防免疫学检测v 抗原或抗体检测v 淋巴细胞测定v 免疫学检测方法的应用抗原或抗体抗原或抗体检测检测v 原理原理v 检测检测类型与方法类型与方法原理原理 适宜条件抗原 抗体 可见反应（肉眼可见）凝集、沉淀等现象特性：特异性：亲和力：一个Fab与表位间的结合 亲合力：一个Ab分子与整个Ag的结合 可见性：条件：适宜的PH、温度、离子强度、抗原与抗体的比例 抗 原 抗 体 复 合 物 的 形 成抗原多于抗体 抗原与抗体数量相当抗原少于抗体2：1 1：1 1：2 Ag 小鼠 抗体（小鼠Ig):第一抗体 （一抗）家兔 抗体(兔抗鼠Ig)：第二抗体 （二抗）检测类型与检测类型与
2、方法方法v 凝集凝集反应反应 v 沉淀沉淀反应反应v 免疫标记免疫标记技术技术凝集凝集反应反应v 定义：颗粒性抗原（RBC、细菌等）与 相应的抗体结合后形成肉眼可见 的凝集现象。v 类型：直接凝集 间接凝集直接凝集v将颗粒性抗原与相应抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集的现象。v类型：玻片凝集试验：ABO血型鉴定 细菌鉴定 （用标准的抗体测抗原）试管凝集试验：肥达氏试验 （用标准的抗原测抗体）间接凝集v 将可溶性抗原包被在载体（红细胞或乳 胶颗粒）表面，与相应抗体反应出现凝 集颗粒的现象。v 载体：动物红细胞 人O型红细胞 乳胶颗粒等v类风湿因子检测：r球蛋白乳胶颗粒致敏颗粒抗人r球蛋白抗体
3、（抗原）v抗Rh抗体检测（Coombs test）Rh抗体（IgG）Rh+红细胞抗人IgG抗体（抗体）v间接凝集抑制试验间接凝集间接凝集抑制试验v 抗原（抗体）载体 致敏颗粒+抗体（抗原）凝集现象v 抗原 抗体致敏颗粒 无凝集现象（间接凝集抑制试验）沉淀沉淀反应反应v 沉淀反应：可溶性抗原（血清蛋白、细胞裂解液、组 织浸液等）与相应抗体结合后出现沉淀物 的反应。v 琼脂扩散（免疫扩散）：可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中扩散并 在比例合适处形成白色沉淀线。v 类型 单向免疫扩散 双向免疫扩散 免疫电泳单向免疫扩散v 抗体加入琼脂凝胶中，制成琼脂板，打孔后加入抗原，抗原在扩散过程中与抗体相遇，形成沉淀
4、环的试验。v用途：检测血清免疫球蛋白和补体的含量 （IgG、IgM、IgA、C3)v 火箭电泳：单扩电泳双向免疫扩散v 分别将抗原与抗体加入琼脂凝胶的小孔中，两者自由扩散并相遇，在比例合适处形成 沉淀线的试验v 用途：用于抗原或抗体的定性分析 血清AFP定性分析v 对流免疫电泳：双扩电泳 抗原阴极、抗体阳极免疫电泳免疫标记技术v用荧光素、酶或放射性同位素等标记物，标记抗体或抗原，进行的抗原抗体反应v优点：敏感、快速、可定性或定量，甚至定位。v类型：免疫荧光法（immunofluorescence）酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA)放射免疫测定法(radioimmunoa
5、ssay,RIA)免疫荧光法v用荧光素标记抗体，再与待检标本中的抗原反应，借助荧光显微镜观察，对标本中的抗原鉴定或定位v常用的荧光素：异硫氰酸荧光素（FITC）黄绿色 藻红蛋白红色v用途：病原微生物（细菌、病毒、螺旋体等）抗原抗体的检测v类型：直接荧光法 间接荧光法直接荧光法v荧光素直接标记抗体，进行检测v优点：特异性强 缺点：必须制备每一种抗原的荧光素抗体间接荧光法v荧光素标记二抗，当一抗与标本中的抗原结合后，再用标记二抗进行检测v优点：敏感性高 只需制备一种标记二抗，可用于多种抗 原的检测 缺点：特异性较直接荧光法低酶免疫测定v用酶标记的抗体进行的抗原抗体反应，通过酶作用于底物后显色来判断
6、结果。v常用的酶：辣根过氧化物酶（HRP)碱性磷酸酶（AP）v类型：酶联免疫吸附试验检测可溶性抗原、抗体 酶免疫组化法检测组织中细胞表面的抗原 酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）vELISA：将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，再用酶标抗体进行检测的抗原抗体反应。v特点：敏感性高（ng-pg），操作简便v用途：检测病原体的抗原，抗体定量分析 微量蛋白成分，细胞因子等v类型：双抗体夹心法:Ab+Ag+Ab*间接法:Ag+Ab+Ab*放射免疫测定法v 用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检 测的技术v 常用的放射性核素：125I 12
7、3Iv 优点：敏感性高（pg）v 用途：用于微量物质的测定（激素、药物等）淋巴细胞淋巴细胞测定测定v类型鉴定：免疫荧光法表面标志淋巴细胞群与亚群 流式细胞术检测免疫细胞v 功能测定：T 细胞功能测定 B 细胞功能测定T 细胞功能测定vT细胞增殖试验：T细胞经丝裂原刺激后，分裂增殖，检测淋巴母细胞的数量v细胞毒试验：51Cr 释放法 调亡细胞检查法v细胞因子检测：ELISA 生物活性测定法 PCRv 皮肤试验:OT试验（IV型超敏反应）B 细胞功能测定vB 细胞增殖试验：B细胞经丝裂原刺激后，分裂增殖，检测抗体 形成细胞的数量v抗体形成细胞测定：溶血空斑试验免疫学检测方法的应用v 感染性疾病：诊
8、断，免疫力的确定v 免疫缺陷病：诊断v 免疫学监测：判断感染性疾病的转归与预后 药物治疗的疗效判断免疫学治疗（immunotherapy)v概述v抗体为基础的免疫治疗v抗原为基础的免疫治疗v细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗v细胞为基础的免疫治疗v免疫增强剂和免疫抑制剂概述v免疫治疗：针对机体免疫低下或亢进的免疫状态，人为地增强或抑制机体的免疫功能以达到治疗疾病的治疗方法v分类：特异性免疫治疗 主动免疫治疗 被动免疫治疗 非特异性免疫治疗 细胞因子 免疫制剂主动免疫治疗v 给免疫应答健全的机体输入具有抗原性的疫 苗或免疫佐剂，以激活或增强机体的自身抵 抗疾病的能力。v 瘤苗、卡介苗、短小棒状杆
9、菌 狂犬病毒疫苗被动免疫治疗v将对疾病有免疫力的供者的免疫应答产物转移给其他个体，或自体细胞体外经过处理后回输的免疫治疗方法。v 抗体 小分子免疫肽：转移因子、胸腺肽 免疫效应细胞抗体为基础的免疫治疗v 免疫血清v单克隆抗体v基因工程抗体免疫血清v免疫血清：指用抗原免疫动物后获得的免疫血清或者 从机体组织中提取制备的免疫球蛋白。v类别：抗毒素血清：白喉、破伤风抗毒素 治疗、紧急预防 胎盘球蛋白：预防急性传染病，丙种球蛋白缺乏者 抗菌免疫血清：防治效果不显著 抗病毒免疫血清：预防效果显著v缺点：特异性差、易致超敏反应单克隆抗体v抗细胞表面分子的单抗 CD3单抗：急性移植排斥反应 CD4单抗：移植
10、排斥反应 类风湿关节炎、多发性硬化v抗细胞因子单抗：IL-1单抗、TNF单抗中和IL-1、TNF 减轻炎症反应v抗体导向药物治疗抗体导向药物治疗 单抗单抗 放射性同位素 化学药物 毒素（131I/125I/111I）（氨甲蝶呤MTX （植物毒素 长春新碱、阿霉素）细菌毒素）放射免疫治疗 抗体导向化学疗法 免疫毒素疗法基因工程抗体v嵌合抗体v人源化抗体v完全人源抗体:人Ig基因转染小鼠v单链抗体人Ig V 区鼠Ig C区嵌合抗体鼠CDR区人Ig 人源化抗体VH 连接物 VL 单链抗体抗原为基础的免疫治疗增强免疫应答：治疗感染、肿瘤诱导免疫耐受：治疗自身免疫病 超敏反应、移植排斥反应细胞因子及其拮
11、抗剂为基础的免疫治疗v补充和添加疗法v阻断和拮抗疗法v基因治疗细胞为基础的免疫治疗v骨髓移植：自体、异体、造血干细胞v免疫效应细胞：LAK、TILvDC:肿瘤多肽、抗原多肽负载的DCv肿瘤疫苗：活瘤苗、减毒活灭活瘤苗 基因修饰瘤苗 分子瘤苗免疫学预防v 疫苗的基本要求v 人工免疫v 新型疫苗v 疫苗的应用疫苗的基本要求v 安全v 有效v 实用人工免疫v 人工自动免疫 (artifical active immunization)v 人工被动免疫 (artifical passive immunization)v 计划免疫 (planed immunization)人工自动免疫v概念:给人体接种
12、疫苗等抗原性制剂，使 机体产生特异性免疫，从而预防感染 的措施。v疫苗：用于人工自动免疫的生物制品 （细菌、病毒、螺旋体、类毒素等）v 类型：灭活疫苗（死疫苗）、减毒活疫苗、类毒素类 别v经典疫苗：灭活疫苗（死疫苗）；减毒活疫苗 类毒素v新型疫苗：亚单位疫苗 结合疫苗 合成肽疫苗 基因工程疫苗：重组抗原疫苗 DNA疫苗 人工被动免疫v 概念：给人体注射含特异性抗体的免疫血清活 细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感 染的措施。v制剂：抗毒素 人免疫球蛋白制剂 细胞因子制剂 单抗制剂计划免疫v概念：根据某些特定传染病的疫情监测和人群免疫状况分析，按照规定的免疫程序有计划地进行人群预防接种，以提高人群
13、免疫力，达到控制直至消灭传染病地措施。v 免疫程序：儿童基础免疫 特殊人群免疫新型疫苗v亚单位疫苗（亚单位疫苗（subunit vaccine）:提取病原体中能激发保护提取病原体中能激发保护性免疫地有效免疫成分制作的疫苗。性免疫地有效免疫成分制作的疫苗。v合成肽疫苗：根据有效免疫原的氨基酸序列，人工合成免合成肽疫苗：根据有效免疫原的氨基酸序列，人工合成免疫原性肽作为疫苗。疫原性肽作为疫苗。v基因工程疫苗：利用基因工程疫苗：利用DNA重组技术制备的，含病原体有效重组技术制备的，含病原体有效免疫原的疫苗。免疫原的疫苗。vDNA疫苗：将病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建的疫苗：将病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建的重组体，在宿主细胞中表达保护性抗原，从而诱导机体产重组体，在宿主细胞中表达保护性抗原，从而诱导机体产生特异性免疫的疫苗生特异性免疫的疫苗v转基因植物疫苗转基因植物疫苗疫苗的应用v 抗感染v 抗肿瘤v 计划免疫v 防止免疫病理损伤
