1、定性酶免疫测定的数据处理及结果报告卫生部临床检验中心 李金明定性？定量？定性测定常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果；半定量测定虽介于定性和定量之间，但从严格意义上来说，其仍属于定性测定，只不过其对定性测定中的“阳性”作了进一步的分级，即所谓的强阳性阳性弱阳性的区别；定量测定的结果则以浓度（如IU/L、ug/L等的方式表达。定性测定结果确定的依据定性测定结果确定的依据 定性测定结果确定的依据在于阳性阴性判定值（Cut-off）的建立，Cut-off 值的确立应尽可能地避免假阳性或假阴性结果的出现。除了 Cut-off 值以外，还有许多其它的设值方法以判断阴性和阳性结果，如S/
2、N（常称为P/N）比值（Ratio）等。与酶免疫测定数据处理和结果报告有关的概念 标准差 适用于正态分布的标准差（SD），不能泛泛地用于酶免疫测定结果的判定。这是因为阴性参考血清的酶免疫测定值的分布常为非正态分布，呈一正向偏斜。概念 变异系数 重复性（Reproducibility）：一般通过重复两次测定样本来观察。测定下限（Detectability）：是指超过零剂量精密度的最低抗原浓度，可通过 t 分布（一边拖尾，因为此时曲线只有上升趋势）计算在测定下限时的吸光度值的均值差。测定敏感性（Sensitivity):是指一实验的测定反应对待测物质浓度变化的改变，即dR/dC。概念 阳性测定能力
3、指数（DI（）可定义为一实验对阳性标本测定后给出阳性结果的能力（通常称为“敏感性”）；DI（）=真阳性/（真阳性+假阴性）100%阴性测定能力指数（DI（）则为对阴性样本测定给出阴性结果的能力（通常称为“特异性”）；DI（）=真阴性/（真阴性+假阳性）100%概念 阳性结果的可靠性（预示值）即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。=真阳性/（真阳性+假阳性）100%阴性结果的可靠性则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。=真阴性/（真阴性+假阴性）100%测定结果的报告和数据处理 酶免疫测定数据处理报告在理想情况下应达到下述要求:(1)易于让不熟悉该试验的人所理解;(2)定性测定必须结
4、果明确,即阳性或阴性、反应或不反应、在正常范围内或不正常等；（3）定量测定的线性；（4）数据的可重复性；（5）试验的评价不应建立在假定的正态分布上；（6）结果用于进一步分析处理（如流行病学分析）的充分性。定性酶免疫测定的CUT-OFF值确定CUT-OFF值的方法一 使用阴性血清测定结果均值的2或3倍作为阳性判断值：取一定数量（通常较少）的阴性血清样本，使用已建立的酶免疫测定方法或试剂盒测定，如果上述阴性血清样本的吸光度均值为0.05，则该次测定的阳性判断值为0.10或0.15。例如现有的试剂盒结果的判定以P/N或S/N2.1为阳性，其依据即是以阴性参考血清的2倍作为阳性判定值。这种Cut-of
5、f值设定方法，可以较为避免假阳性结果的出现，但假阴性可能比例较高。总的来说，这是一种非常粗糙的Cut-off值设定方法。确定CUT-OFF值的方法二 首先测定大量（数千）正常人血清样本，然后将所得到的吸光度均值2或3个SD作为阳性判断值：当正常人血清样本数量足够大时，使用特定的酶免疫测定方法测得的吸光度值将呈正态分布，在具有95.3(单侧)的可信度的情况下，可以将从正常人血清测得的吸光度均值2SD作为阳性判断值；如要求99(单侧)的可信度，则以吸光度均值3SD作为阳性判断值。与第一种方法相比，这种Cut-off值设定方法更为科学一些，建立在统计学的精确计算的基础上，但由于这种方法仅考虑阴性人群
6、，故而难以确定“灰区”，从图32可见，有可能会出现较多的假阴性，因其将整个“灰区”几乎都归为阴性。确定CUT-OFF值的方法三 在测定大量正常人血清样本的同时，测定大量阳性血清样本，如测定值为正态分布，则根据u检验的特点，以单侧99.5%的可信限先分别确定阴性和阳性的Cut-off值；如为非正态分布，则百分位数法单侧 95或99来确定Cut-off值。阴性和阳性人群的Cut-off值确定后，根据“灰区”的大小，综合平衡考虑假阳性和假阴性率的情况下确定Cut-off值。这种Cut-off值确定方法，较之单纯从阴性人群考虑要较为全面一些，并且对测定的“灰区”有一个估计，不会出现将“灰区”全部纳入阴
7、性的情况。确定CUT-OFF值的方法四 在测定大量正常人和大量阳性血清样本的同时，测定转化型血清（从阴性转变为阳性过程中的系列血清）样本，取假阳性和假阴性发生率最低，且能区别抗原转化至抗体出现点的吸光度值作为阳性判断值：该方法与上述（3）的区别是增加了转化型血清样本的测定，使得阳性判断值的确定，能最佳地将阳性与阴性样本区别开来。这种Cut-off值确定方法应该说是目前最佳的模式，但由于转化型血清样本非常昂贵且难以得到，因此应用起来有一定难度。ROC曲线在曲线在Cut-off值设定中的应用值设定中的应用 ROC是英文Receiver Operating characteristic的缩写，可直译
8、为接收机工作特性，其最初主要是用于通讯学领域。在临床医学检验领域内，ROC不仅可用于不同检验方法之间的比较，而且可用于对检验项目临床准确性的评价以及决定正常和异常的分界点。ROC曲线描述的是特定的检验方法的灵敏度(真阳性率)(TPR)=真阳性数/(真阳性+假阴性)与假阳性率(FPR)=假阳性数/(假阳性+真阴性)之间的关系，即以FPR为横坐标、TPR为纵坐标所作出来的一条曲线 根据这种关系，可确定区分正常与异常的分界点究竟在何处最为合适，也就是说此时的假阳性和假阴性率最低或比例最为适当或最为符合使用目的。因此，当然就可以用于ELISA测定Cut-off值的确定。ROC曲线的含义 怎样利用ROC
9、曲线来确定Cut-off值怎样利用ROC曲线来确定Cut-off值怎样利用ROC曲线来确定Cut-off值Cut-off值批间差异的控制 ELISA测定每次的Cut-off值都会有所差异。但只要这种差异是在允许的范围内，就不会影响Cut-off值的应用。通常有这样几种方法来控制Cut-off值的批间变异，即（1）测定多份（如50份）正常人血清，确定其吸光度均值3SD为试剂盒内阳性参考血清测定吸光度的40。因此，在使用该试剂盒的临床检测中，可将这种参考血清作为测定控制的一个内标准，以校准试验系统的Cut-off值。（2）在测定中包括标准化的阳性混合血清和阴性混合血清。（3）还有一个简单的非参数方法是测定许多阴性血清，于是将Cut-off值设于95的阴性血清的吸光度值低于此值处，然后将确定的关键的参考血清包括在试剂盒内作为内标准。定性酶免疫测定结果判断及报告 结果判断：按试剂盒所定的CUT-OFF值判断阴或阳性结果，不能以其它标准判断。结果报告：阴性或阳性。灰区内的结果建议患者过一段时间复查。感染性病原体抗原抗体的定量测定？乙肝“两对半”抗HCV 梅毒抗体 抗HIV
