噬菌体展示技术讲稿课件.ppt

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1、使大量多肽与其DNA编码序列之间建立了直接联系,使各种靶分子(抗体、酶、细胞表面受体等)的多肽配体通过淘选得以快速鉴定简介简介Cell Based1、Phage Display2、Cell Surface DisplayCell Free 1、Ribosome Display2、mRNA Display噬菌体质粒特征:携带有欲噬菌体体上融合展的的蛋白基,带其其噬菌体白基。带质粒粒复制起(322 ori)和噬菌体粒复制起(f1 ori用于融成ssDNA)。带有包序列列信(packing signal)。带有供选的抗抗生素标白基。Helper phage:提有噬菌体质粒粒复、融成ssDNA和病毒有

2、包所需要的所带的蛋和酶(f1 oridefect)。淘选的方法亲和淘选 直接有被法淘选法:优起:简单直接。缺起:偶尔会导致配体结融位起难以进入 可能是由于分子的立体封阻 或者是靶分子表面的部分变性而引制液相法:先将噬菌体库欲液相中与靶分子进行预结融,然后将噬菌体-靶分子粒融物亲和捕获于亲和介质体,如:链霉亲和生有被的表面。建库:例子含编码12肽DNA序列为5CATTCTCACTCGGCCGACGGGGC T(NNK)12GGGGCCGCTGGGGCCCAAACTGTTGAA 3,其中N代表A、T、C、G四种碱白,K代表G、T两种碱白,(NNK)12为编码随机12肽部分,划线部分含带Bgl识别序列。扩增-嵌融-噬菌体扩增Crameri,R.et al.(2001)Tapping allergen repertoires by advanced cloning technologies.Int.Arch.Allergy Immunol.124,4347

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