1、地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一l地中海贫血的共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，致使血红蛋白的组成成分改变。l地中海贫血分为-地中海贫血和-地中海贫血。l胚胎期血红蛋白：lHb Gower 1（x2 e2）lHb Gower 2(a2 e2)lHb Portland(x2 g2)即Hb Portland 1l另有少量Hb Portland 2(x2 b2)，Hb Portland 3(x2 d2)l胎儿期主要血红蛋白：lHbF（a2 g2）l成人主要血红蛋白：lHbA（a2 b2）约占血红蛋白总量96.597.5%lHbA2（a2 d2
2、）约占血红蛋白总量2.53.5%lHbF（a2 g2）约占血红蛋白总量1%以下。a a2 2b b2 2za2a1Chromosome 16Chromosome 11a a-globin gene clusterb b-globin gene clustereggdbPredominant HaemoglobinEMBRYONICFETALADULTz z2 2e e2 2a a2 2g g2 2(a(a2 2d d2 2)Hemoglobin l-地中海贫血（简称-地贫）是一种由于-珠蛋白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基因遗传血液病。多由-珠蛋白基因的缺失突变所致。l研究发现中国地区常见
3、的3种-地贫主要由 -SEA、-3.7、-4.2缺失(左缺失）引起。-a a3.7-a a4.2-SEA a2a2 a1a1a2a2a1a1 1 1lb-地中海贫血是一种由于b-珠蛋白基因突变导致肽链合成减少或缺乏而产生的单基因遗传血液病，多由b-珠蛋白基因点突变所致。l在中国人群中常见的突变位点有CD41-42M，-28M，IVS-II-654M，CD71-72M等 l编码区的移码突变、无义突变和起始密码突变：如CD41-42，CD71-72，CD17突变后形成终止子，表现为b0。l非编码区IVS-1和IVS-2突变如IVS-II-654突变影响mRNA的拼接，表现为b。l影响转录的突变：如
4、-28，-29的突变影响基因的转录，表现为b。地区携带率（）地贫 地贫广州8.532.54广西14.956.78四川1.922.18贵州-4.72台湾4.201.10香港5.023.41基因变异基因变异频率频率(%)基因变异基因变异频率频率(%)a a 地贫地贫8.53b b 地贫地贫2.54-SEA4.14CD41-420.92-a a3.73.10IVS-2-6540.63-a a4.20.95-280.42-a aCS0.18CD260.13-THAL0.04CD170.10-a aQS0.04CD71-720.09-11.10.02CD430.09a a1CD118(+TCA)0.02
5、-290.05-a-a-gene缺失缺失0.02CD27-280.05未知突变未知突变0.04b-b-gene 缺失缺失0.01未知突变未知突变0.04Normal(/)正常正常+thal trait(/-3.7)(/-4.2)静止型单一静止型单一基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅平均红细胞体积平均红细胞体积(MCVMCV)位于正常值下限。位于正常值下限。Hb H disease(-3.7/-SEA)(-4.2/-SEA)o Thal trait(/-SEA)(-/-)血红蛋白血红蛋白H病病3个个基因缺失或丧失功
6、能基因缺失或丧失功能肝脾肿大，中度贫血。小细胞，低色素，肝脾肿大，中度贫血。小细胞，低色素，HbHHbH含含 量量较高，易发生溶血，有些病例需不定期输血，较高，易发生溶血，有些病例需不定期输血，症重症重者甚至需切除脾脏。者甚至需切除脾脏。标准型标准型2个个基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细胞大小不均一，平均红细胞体积胞大小不均一，平均红细胞体积(MCVMCV)及平均及平均血红蛋白含量血红蛋白含量(MCHMCH)明显偏低。明显偏低。Hb Barts Hydrops(-SEA/-SEA)Hb Barts 水肿胎儿综合
7、症水肿胎儿综合症 4个个a a基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水肿，肝脾肿大。由于胎儿无法合成肿，肝脾肿大。由于胎儿无法合成a a亚基，脐亚基，脐血血红蛋白血血红蛋白（Hb Barts，g g4）含量高。含量高。省份例数非缺失型缺失型aaT/-、aaT/aaT-a3.7/-a4.2/-a2.7/-nn%n%n%n%广西1366044.13525.73928.721.5广东1362719.97152.23827.9-四川551934.52749.1916.4-江西27829.6829.61140.8-香港38513
8、.22668.4718.4-台湾22511450.79441.8177.5-合计61723337.826142.312119.620.3a a2 2a a1 1T a a2 2-a-a1 1a a2 2Ta a1 1-a-a1 1T -重型重型b b-地中海贫血地中海贫血所有患者有组织缺氧症状，可出现所有患者有组织缺氧症状，可出现“地中地中海贫血面容海贫血面容”，生长发育迟缓。红细胞体，生长发育迟缓。红细胞体积小且低色素。过剩的游离积小且低色素。过剩的游离 链形成链形成 链包链包涵体，引起溶血性贫血，靠输血维持生命。涵体，引起溶血性贫血，靠输血维持生命。b/b、b0/b0、b0/b（纯合子或双
9、重杂合子）轻型轻型b b-地中海贫血地中海贫血患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。红细胞脆性降低，小细胞，低色素，红细胞脆性降低，小细胞，低色素，MCVMCV、MCHMCH较低。较低。bA/b、bA/b0（杂合子）中间型中间型b b-地中海贫血地中海贫血患者临床症状介于重型和轻型之间，如中患者临床症状介于重型和轻型之间，如中度偏重贫血，生长发育迟缓，黄疸等。血度偏重贫血，生长发育迟缓，黄疸等。血液检查呈小细胞低色素贫血症。液检查呈小细胞低色素贫血症。b/b、b/b0（纯合子或双重杂合子）突变类型广州台湾香港广西四川贵州湖北福建n%n%n%n%n%n%n%
10、n%CD41-4218440.720236.34547.98344.21723.61740.51229.31441.265410022.122840.72021.3126.4912.5716.71741.51338.3-286714.8447.977.43619.268.312.437.312.9CD17419.1386.899.53619.22433.41638.137.3411.8CD71-72153.330.50042.111.40012.400Cd26112.491.611.1-29102.210.211.142.179.712.437.312.9CD43920.10.2-31.611
11、.40024.912.9排序出生缺陷例数发生频率(/10000)1先天性心脏病26019.662重型a地贫20815.733多指20015.124肢体短缩1118.395唇裂/腭裂1098.24l可同时检测-SEA、-a a3.7、-a a4.2等3种缺失型a a-地中海贫血。l可检出无临床症状的静止型a a-地贫（aaaa/-a a3.7、aaaa/-a a4.2），l应用：婚前检查、产前检查及产前诊断。l全血DNA快速提取试剂盒l应用l全血DNA的提取l培养细胞基因组DNA的提取l注意事项l抗凝剂:不能用肝素。l红细胞裂解l干燥环节：乙醇干燥须完全,有机溶剂抑制PCR扩增.PCR反应液Mi
12、x-A 21LDNA模板 4L(200-500ng)Total 25L96 15min98 45s64 1min30s 35 cycles 72 3min72 5min M DNA Marker1.(aa/aa)1.8kb2.(aa/-a 4.2)1.8kb;1.6kb3.(aa/-a 3.7)2.0kb;1.8kb4.(-a 4.2/-SEA)1.6kb;1.3kb 5.(-a 3.7/-SEA)2.0kb;1.3kb6.(aa/-SEA)1.8kb;1.3kb M 1 2 3 4 5 6 Ma a-珠蛋白基因型珠蛋白基因型 PCRPCR产物片段长度产物片段长度 -a 3.72.0kbaa
13、1.8kb-a 4.21.6kb-SEA1.3kb注：注：l可对17个突变位点(8个常见位点及9个少见位点)进行检测 l合理的探针设计明显减少了非特异性杂交反应的发生。l位点设计更合理，绝大部分突变位点都有相应正常对照，结果易于判定 l-地贫基因诊断；携带者检出 HBB gene HBB1HBB2HBB34142717241-42M/N65471-72M/654Ml用生物素标记的引物扩增待测样品DNAPCR-Mix-I 23LDNA模板 2LTotal 25L5015min95 10min94 1 min50 30s 35 cycles 72 30s72 5min l取15 mL 塑料离心管，
14、放入膜条，加入A液5-6 mL及PCR产物。将塑料管放入沸水中加热10分钟，取出拧紧盖子，放入42杂交箱杂交1.54小时。变性及杂交变性及杂交l取出膜条，移至装有预热B液的50 mL管中，于42轻摇洗涤15分钟 l1）POD溶液孵育30分钟l2）洗涤 用A液室温洗两次，每次5分钟。l3）显色 将膜条浸泡于显色液中避光显色10-15分钟即可见斑点显现。N/N654M/N41-42M/N41-42N654N28N71-72N17NEN31N27/28M41-42M654M28M71-72M17MEM31MIVS1-1M43M32M29M30M14-15MCAPIntMIVS1-5M654M/71-72M17M/NEM/EM41-42M/N1华南地区:广东,广西，海南2西南地区:四川,贵州3福建、江西4湖北l益生堂(深圳创益生物科技)l广州达安l上海博星 l上海透景公司 l治疗l定期输血 l定時注射除铁药物 l骨髓或脐带血移植 l基因治疗l预防l遗传咨询l基因筛查l产前检查谢谢！
