1、实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验Thalassemia地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一全球有全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）中国南方不同高发地中国南方不同高发地区人群携带率区人群携带率 3 24%2 地地中中海海沿沿岸岸国国家、家、东东南南亚亚及及中中国国南南方方多多见；见；重重型型地地贫贫给给家家庭庭社社会会带带来来沉沉重重的的经经济济负负担担和和难难以以估估量量的的精精神神负负担；担；广广西西发发病病率率为为2 20 0%34中国南方人群地贫基因携带率5高高发发区区人人群群6定定
2、 地地中中海海贫贫血血（海海洋洋性性贫贫血、血、珠珠蛋蛋白白生生成成障障碍碍性性贫贫血）血）：由由于于（突突变、变、缺缺失失等）等）引引起起的的，导导致致，同同时时的的一一种种。遗遗传传性性珠珠蛋蛋白白基基因因缺缺陷陷一一种种或或多多种种珠珠蛋蛋白白肽肽链链生生物物合合成成减减少少或或完完全全不不能能合合成成珠珠蛋蛋白白肽肽链链间间的的正正常常平平衡衡不不能能维维持持成成人人型型Hb（HbA：22）合合成成降降低低遗遗传传性性血血红红蛋蛋白白病病7由由于于珠珠蛋蛋白白基基因因的的缺缺陷陷使使血血红红蛋蛋白白中中的的珠珠蛋蛋白白肽肽链链有有一一种种或或几几种种合合成成减减少少或或不不能能合合成，
3、成，导导致致的的组组成成成成分分改改变。变。本本组组疾疾病病的的临临床床症症状状轻轻重重不不一，一，大大多多表表现现为为。血血红红蛋蛋白白慢慢性性进进行行性性溶溶血血性性贫贫血血89地地中中海海贫贫血血1011-地地 重型重型地贫地贫（HbBarts胎儿水肿综合征）胎儿水肿综合征）4个个基因都缺失了基因都缺失了(-/-)，在孕后期或出生后即死亡。在孕后期或出生后即死亡。1213141516重重度度-17骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等18重重度度-19重重度度-20重重度度-21重重度度-22重重度度-23
4、2425结结1.广西人群地贫基因携带率很高。2.。3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。4.，但。5.是未来发展的方向。26羊羊膜膜腔腔27羊羊膜膜腔腔2829-靶型靶型RBC30 红细胞脆性实验红细胞脆性实验Erythrocyte fragility testErythrocyte fragility test地贫患者地贫患者正常人正常人31血红蛋白电泳血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresisHemoglobin electrophoresis3233 chain disappear (0-thal major)chain dis
5、appear (HbBarts hydrop fetalis)12341234 肽链分析肽链分析Peptide chain analyses 34单管多重单管多重PCR35PCR-ASO36诊断诊断(Diagnosis)(Diagnosis)临床特点实验室检查父母调查阳性临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）（基因分析）37 MCV 80fl 和和/或或MCH 27pg,则则高高度度怀怀疑疑为为地地贫贫;HbA2 3.5%,则则为为地地贫贫基基因因携携带带者者 红红细细胞胞渗渗透透脆脆性性试试验验阳阳性性(Red cell os motic fragility test,ROFT;0.60
6、):即即可可怀怀疑疑为为地地贫贫;38地中海贫血确诊试验地中海贫血确诊试验 地贫诊断基因芯片地贫诊断基因芯片(Thalachip);地贫基因诊断条膜地贫基因诊断条膜(反向点杂交反向点杂交)/一管法多一管法多重重PCR ASO寡核苷酸探针点杂交寡核苷酸探针点杂交 DNA测序测序39鉴别诊断鉴别诊断(Differential(Differential diagnosis)diagnosis)缺铁性贫血缺铁性贫血 遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症 传染性肝炎或肝硬化传染性肝炎或肝硬化4041【检验原理】【检验原理】贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。测
7、定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是可筛查是否贫血，特别是42组成：由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）；SG-B母液（终止红细胞溶血液）母液（终止红细胞溶血液）；SG-C母液（红细胞溶血液）组成；成分：SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化钠制成；母液采用氯化钠制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。43新鲜抗凝全血新鲜抗凝全血（、EDTA-Na、ACD），置28保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。441、取试管一只，加入，放。2、加入，立刻混匀，继续放在。3、，加入。混匀，。4、将（），于（以纯化水作空白对照）。5、，混匀，（透明红色）后，。6、。7、按下列公式计算出溶血率百分比。45
