1、第三章食用菌菌种生产第三章食用菌菌种生产本章重点：食用菌制种条件，培养基种类及本章重点：食用菌制种条件，培养基种类及配方，菌种分离方法，无菌接种技术，菌种配方，菌种分离方法，无菌接种技术，菌种培养、保藏等方法措施。培养、保藏等方法措施。教学目的：使学生掌握食用菌母种、原种、教学目的：使学生掌握食用菌母种、原种、栽培种的制种技术。栽培种的制种技术。第一节食用菌菌种的概念第一节食用菌菌种的概念一、菌种的概念一、菌种的概念原意是指孢子（相当于植物的种子），但在实际生产中，常将经过人工培养的纯菌丝体连同培养基质一同叫做菌种。二、菌种的类型二、菌种的类型在生产中根据菌种的来源、繁殖代数及生产目的，把菌种
2、分为母种、原种和栽培种。分别叫一级种、二级种、三级种。母种：将纯菌丝体或孢子在试管培养基中繁母种：将纯菌丝体或孢子在试管培养基中繁殖而成。可以繁殖原种，也适宜菌种保藏。殖而成。可以繁殖原种，也适宜菌种保藏。原种：母种菌丝在固体培养基上繁殖而成。原种：母种菌丝在固体培养基上繁殖而成。这一过程增强菌丝对培养环境的适应性，又这一过程增强菌丝对培养环境的适应性，又起到扩繁的作用。原种可以直接出菇。起到扩繁的作用。原种可以直接出菇。栽培种：由原种扩繁而成。主要是为了扩繁，栽培种：由原种扩繁而成。主要是为了扩繁，为生产提供足够的菌种。为生产提供足够的菌种。第二节食用菌制种条件第二节食用菌制种条件一、食用菌
3、制种程序一、食用菌制种程序种菇试管培养基培养母种固体培养基原种固体培养基栽培种培养培养料灭菌培养基灭菌培养料灭菌培养二、制种的基本设备和条件二、制种的基本设备和条件1.接种条件接种条件接种室接种室接种箱接种箱超净工作台超净工作台酒精灯和接种工具酒精灯和接种工具2.培养条件培养条件菌种培养室菌种培养室恒温培养箱恒温培养箱3.消毒灭菌条件消毒灭菌条件灭菌条件灭菌条件高压灭菌锅高压灭菌锅手提式手提式大型高压灭菌锅常压灭菌锅常压灭菌锅常压灭菌锅常压灭菌锅3.消毒条件消毒条件常用的消毒药剂有：常用的消毒药剂有：酒精、甲醛、硫磺、多菌灵、克霉灵、气雾消毒剂、生石灰、酒精、甲醛、硫磺、多菌灵、克霉灵、气雾消
4、毒剂、生石灰、高锰酸钾等。高锰酸钾等。紫外线灯紫外线灯30W30W4.制种常用容器制种常用容器玻璃容器：玻璃容器：试管、培养皿、三角瓶、罐头瓶、菌种瓶等。试管、培养皿、三角瓶、罐头瓶、菌种瓶等。塑料容器：塑料容器：聚乙烯、聚丙烯塑料袋或筒料，塑料套环，聚丙烯膜等。聚乙烯、聚丙烯塑料袋或筒料，塑料套环，聚丙烯膜等。5.菌种保藏条件菌种保藏条件 冰箱冰箱 冷藏室冷藏室 冷库冷库第三节食用菌菌种的培养基第三节食用菌菌种的培养基一、培养基一、培养基1.1.概念：培养基是采用人工的方法，按照一定比例配制概念：培养基是采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质，以供给食用菌生长繁殖的基质。各种营养物质，
5、以供给食用菌生长繁殖的基质。2.2.种类：液体培养基固体培养基固化培养基种类：液体培养基固体培养基固化培养基液体培养基优点是营养分布均匀，有利于菌丝吸收，液体培养基优点是营养分布均匀，有利于菌丝吸收，理化条件易控制，便于机械化操作；菌丝生长迅速，理化条件易控制，便于机械化操作；菌丝生长迅速，产量高。产量高。固体培养基优点是原材料广泛价格低廉，配制容易。固体培养基优点是原材料广泛价格低廉，配制容易。固化培养基是指将各种营养物质按比例配成营养液后，固化培养基是指将各种营养物质按比例配成营养液后，再加入适量的凝固剂，冷却后凝固。再加入适量的凝固剂，冷却后凝固。二、母种培养基二、母种培养基1.常用母种
6、培养基配方常用母种培养基配方马铃薯马铃薯200g，葡萄糖，葡萄糖20g，琼脂，琼脂20g，水，水1000ml。马铃薯马铃薯200g，葡萄糖，葡萄糖20g，琼脂，琼脂20g，磷酸二氢，磷酸二氢钾钾3g，硫酸镁，硫酸镁1.5g，维生，维生B110mg，水，水1000ml。2.2.试管培养基制作试管培养基制作称重马铃薯去皮切成小块加水煮沸称重马铃薯去皮切成小块加水煮沸3030分钟分钟左右过滤取汁加糖、琼脂及其它营养趁左右过滤取汁加糖、琼脂及其它营养趁热分装试管塞好棉塞每热分装试管塞好棉塞每7 7个捆成一个捆成一梱梱棉棉塞部位用牛皮纸包好灭菌摆塞部位用牛皮纸包好灭菌摆鈄鈄面。面。装入试管的量为试管的装
7、入试管的量为试管的1/51/51/41/4高度。高度。三、原种和栽培种培养基三、原种和栽培种培养基1.1.培养基配方培养基配方1 1）阔叶树锯末）阔叶树锯末78%78%，米糠或麸皮，米糠或麸皮20%20%，石膏粉，石膏粉1%1%，蔗糖，蔗糖1%1%，加水至含水量，加水至含水量50%50%60%60%。2 2）谷粒（玉米、麦粒等）谷粒（玉米、麦粒等）10001000克，石膏粉克，石膏粉1313克，克，碳酸钙碳酸钙4 4克。克。2.2.培养基制作培养基制作拌料灭菌谷粒煮熟而又不胀破，拌入石膏粉，拌料灭菌谷粒煮熟而又不胀破，拌入石膏粉，装瓶灭菌。装瓶灭菌。第四节食用菌菌种分离第四节食用菌菌种分离 菌
8、种分离是菌种纯化的基本方法，菌种分离是菌种纯化的基本方法，是制种的重要环节。是制种的重要环节。组织分离组织分离 菌种分离孢子分离菌种分离孢子分离 种木分离种木分离一、接种箱和超净工作台的使用一、接种箱和超净工作台的使用1.1.接种箱擦净放入物品（培养基、接种工接种箱擦净放入物品（培养基、接种工具等其它物品熏蒸具等其它物品熏蒸3030分钟或紫外灯照射分钟或紫外灯照射3030分分钟点燃酒精灯接种钟点燃酒精灯接种2.2.超净工作台擦净放入物品紫外灯照射超净工作台擦净放入物品紫外灯照射3030分钟关掉紫外灯打开过滤风机点燃酒分钟关掉紫外灯打开过滤风机点燃酒精灯接种精灯接种.无菌操作及转管无菌操作及转管
9、1.1.无菌操作即在无菌操作即在绝对无菌的条件绝对无菌的条件下接种。下接种。2.2.转管转管将母种接到试管将母种接到试管培养基上，目的培养基上，目的扩大数量，也叫扩大数量，也叫扩繁。扩繁。无菌室超净工作台酒精灯三、菌种的分离三、菌种的分离1.1.组织分离法组织分离法选择头潮菇，菌选择头潮菇，菌肉肥厚，形正，肉肥厚，形正，未散孢，八分成未散孢，八分成熟的种菇。熟的种菇。消毒接种培消毒接种培养纯化试验养纯化试验孢子分离法孢子分离法是用成熟的有性是用成熟的有性孢子萌发培养成孢子萌发培养成菌丝体而得到的菌丝体而得到的菌种。菌种。消毒采集孢子消毒采集孢子接种培养挑接种培养挑菌落纯化菌落纯化第五节食用菌菌
10、种制作第五节食用菌菌种制作这节内容主要是通过实这节内容主要是通过实践课来完成，下面仅介绍制种践课来完成，下面仅介绍制种的工作程序和需要注意的问题的工作程序和需要注意的问题一、培养基的选择与制备一、培养基的选择与制备1.1.培养基的选择培养基的选择根据菌类所需要的营养，菌种的保存时根据菌类所需要的营养，菌种的保存时间，栽培季节，栽培料资源来确定培养间，栽培季节，栽培料资源来确定培养基配方。基配方。2.2.培养基制备培养基制备注意：含水量适宜，装瓶的松紧度适宜，注意：含水量适宜，装瓶的松紧度适宜，培养基做好后或拌料装瓶后应马上灭菌。培养基做好后或拌料装瓶后应马上灭菌。二、接种二、接种一支试管可以扩
11、繁一支试管可以扩繁为为20203030支试管支试管一支试管可以一支试管可以扩繁为五瓶原种扩繁为五瓶原种一瓶原种可以接一瓶原种可以接30304040瓶栽培种瓶栽培种第六节菌种的培养第六节菌种的培养1.营养成分营养成分2.水分和空气水分和空气3.温度温度4.光线光线5.酸碱度酸碱度6.培养时间培养时间7.定期检查定期检查第七节菌种质量的鉴定第七节菌种质量的鉴定 菌种质量的鉴定一般是从菌种的纯度、长势、颜色、菌龄、均匀度和出菇快慢等6方面进行鉴定的，最可靠的方法就是出菇试验。一、母种质量鉴定一、母种质量鉴定1.转管次数最多不超过转管次数最多不超过45次次2.菌龄低温保存不超过菌龄低温保存不超过6个月
12、个月3.外观菌丝浓白、粗壮、富有弹性、爬瓶力强，没外观菌丝浓白、粗壮、富有弹性、爬瓶力强，没有干燥、收缩现象和大量红褐色液体。有干燥、收缩现象和大量红褐色液体。4.长势菌丝生长快、整齐、浓而健壮。长势菌丝生长快、整齐、浓而健壮。5.温度适应性在适温培养后，放在高温下培养几小温度适应性在适温培养后，放在高温下培养几小时，菌丝仍能健壮生长的。时，菌丝仍能健壮生长的。6.干湿性鉴定干湿性鉴定7.出菇试验出菇试验二、原种和栽培种质量的鉴定二、原种和栽培种质量的鉴定原种、栽培种最好不做贮备菌种，按栽培时期有计划地生原种、栽培种最好不做贮备菌种，按栽培时期有计划地生产。接原种的母种转管次数要少。产。接原种
13、的母种转管次数要少。外观要求：外观要求：1.1.菌丝生长健壮，绒状菌丝多，生长整齐。菌丝生长健壮，绒状菌丝多，生长整齐。2.2.菌丝己长菌丝己长滿滿培养基，有的要求有分化的子实体原基。有培养基，有的要求有分化的子实体原基。有菇香味，无异味。菇香味，无异味。3.3.菌丝色泽洁白或符合该菌的颜色。菌丝色泽洁白或符合该菌的颜色。4.4.菌种瓶内无杂色出现和无杂菌污染。菌种瓶内无杂色出现和无杂菌污染。5.5.菌种瓶内无黄色汁液渗出。菌种瓶内无黄色汁液渗出。6.6.菌种培养基不能干缩与瓶壁分开。菌种培养基不能干缩与瓶壁分开。第八节菌种保藏和复壮第八节菌种保藏和复壮一、菌种保藏一、菌种保藏通常采用干燥、低
14、温、冷冻、缺氧和真通常采用干燥、低温、冷冻、缺氧和真空保藏，即使生命处于休眠状态。空保藏，即使生命处于休眠状态。1.斜面低温保藏斜面低温保藏42.液体石蜡保藏液体石蜡保藏3.滤纸保藏滤纸保藏4.自然基质保藏自然基质保藏二、菌种复壮二、菌种复壮菌种复壮是使生活力降低的菌种恢复或提高到菌种复壮是使生活力降低的菌种恢复或提高到原有健壮的程度。原有健壮的程度。1.加富培养法加富培养法2.交替培养法交替培养法3.顶端菌丝复壮法顶端菌丝复壮法复习思考题复习思考题什么叫食用菌菌种？它有哪些类型？什么叫食用菌菌种？它有哪些类型？为什么要繁殖一、二、三级的菌种？为什么要繁殖一、二、三级的菌种？食用菌制种需要哪些
15、条件？食用菌制种需要哪些条件？高压灭菌锅和常压灭菌锅各有哪些优缺点？高压灭菌锅和常压灭菌锅各有哪些优缺点？培养基有哪些类型？培养基有哪些类型？怎样进行无菌室、无菌箱消毒？怎样进行无菌室、无菌箱消毒？什么是无菌操作？什么是无菌操作？菌种分离有哪些方法？生产中常用的是哪一种？菌种分离有哪些方法？生产中常用的是哪一种？优良有母种、原种、栽培种一般符合哪些要求？优良有母种、原种、栽培种一般符合哪些要求？需要掌握的基本技能需要掌握的基本技能母种培养基的制备母种培养基的制备母种扩繁和无菌操作母种扩繁和无菌操作高压灭菌高压灭菌无菌室、无菌箱消毒灭菌无菌室、无菌箱消毒灭菌原种、栽培种培养基的制备原种、栽培种培养基的制备原种、栽培种接种原种、栽培种接种组织分离组织分离
