1、淋巴瘤知识入门 本幻灯片大部分图片内容来自陈国璋教授的慷慨馈赠特此致谢！诊断的客观条件诊断外部条件l制作精良的制作精良的HE切片切片l质控良好的免疫组化染色质控良好的免疫组化染色l临床病史临床病史l分子生物学检测（可选）l流式细胞光度术（可选）正常淋巴结结构淋巴结结构l皮质区l副皮质区l髓质l包膜和纤维分隔l窦区流入淋巴管纤维包膜 边缘窦次级滤泡套区生发中心初级滤泡纤维分隔皮质区流入淋巴管髓质及淋巴窦肥胖内皮的小静脉门区淋巴窦静脉动脉流出淋巴管副皮质区髓索皮质区:B细胞区l初级淋巴滤泡初始 B 细胞和成熟 B 细胞滤泡树突细胞CD21皮质区：淋巴结的B细胞区l次级淋巴滤泡中心母细胞,中心细胞(
2、滤泡中心 B 细胞;CD10+)滤泡树突细胞T细胞(CD10 强+;常 CD4+/T辅助及 CD57+)吞噬碎片的巨嗜细胞套区B细胞(IgM+D)次级滤泡结构示意图边缘区细胞(IgM)套区细胞(IgM+D)生发中心细胞(IgM,IgG,IgA or IgE,not IgD)CD20CD21CD10CD20皮质区：淋巴结的B细胞区l边缘区B细胞多数淋巴结中不明显在腹腔淋巴结容易见到，即在套区外侧，淡白色区域，胞浆较丰富、透明Mantle zoneMarginal zoneCD20皮质反应性增生改变l反应性滤泡增生对T细胞依赖抗原反应而发生生发中心有极性：亮区及暗区，扁桃体最明显可伴有浆细胞增多抗
3、原流入的方向套细胞在顶端较厚“帽子”生发中心的亮区（中心细胞较多）生发中心的暗区(中心母细胞较多)Dark zoneLight zoneKi67副皮质区：淋巴结的T区l T细胞为主(CD4CD8):小淋巴细胞，偶有较大的T细胞(一些散在于副皮质区的大细胞是激活的B细胞)l 高度增生内皮的小静脉(淋巴细胞在其内流通)l S100+的细胞(指突状树突状细胞)l Cytokeratin+树突细胞(纤维母细胞性树突细胞?)IDCCD3CD20副皮质区的反应性增生l最常见原因:病毒感染,过敏反应,肿瘤引流淋巴l皮质增宽,有时形成结节.T结节紧邻B滤泡，有时融合l高度增生内皮细胞的血管;混合性小细胞和免疫
4、母细胞髓索l有较多浆细胞l可显著或不明显lB细胞反应时可显著,如反应性滤泡增生、浆细胞性Castleman 病时窦l流入淋巴管 边缘窦 淋巴内窦 髓质淋巴窦 流出淋巴管l淋巴窦被覆窦内衬细胞(有桥粒).窦内有一些组织细胞和淋巴细胞l腹腔内淋巴结淋巴窦常明显扩张结缔组织网架l纤维包膜以及向淋巴结内伸出的纤维小梁构成网架l正常情况下不明显l反应性增生及周围淋巴结肿大时较明显Any Question?Take a break!免疫组化的一般问题免疫组化的重要性l鉴别淋巴瘤 VS 反应性增生l鉴别淋巴瘤 VS 其他恶性肿瘤l淋巴瘤的分类l淋巴瘤的预后及临床分期l治疗靶标没有高质量的免疫组化就不能很好地
5、进行淋巴瘤诊断染色结果的判定l正确的染色结果判定，比免疫组化染色本身一样重要l染色的判断必须紧密结合组织学必须紧密结合组织学，必须确定究竟应该是哪一种细胞着色，哪一种成分不应着色CD20染色结果的判断l必须申明哪种细胞为阳性，尤其是病变含有多种细胞成分时l如果病理报告如下:CD20+,CD3+,CD5+,Bcl2+,CD10-,Bcl6-，没有价值l正确的表述:大细胞 CD20+,CD3-,CD5-,CD10-背景的小淋巴细胞：CD3+CD5+CD8+有散在的网格状 CD21+滤泡树突细胞染色结果的判断l阳性比阴性更有价值，因为阴性可能由于：抗原丢失抗原修复不足敏感性不足抗体过期加错抗体或试剂
6、添加步骤错误染色结果的判断l必须必须有阳性的内对照和外对照，证明染色结果可信l染色应得到正确的预期结果大多数白细胞的标记为膜阳性TdT,S100 及转录因子类抗体均为核阳性Cyclin D1CD20TdT淋巴细胞的表型BTNK紧密相关淋巴系统的形成胸腺?骨髓?Peyer 结淋巴结、脾、粘膜组织中心淋巴组织:“前驱”细胞的贮存库;由此细胞发育成熟外周淋巴组织:成熟细胞的贮存库准备对抗原产生反应TBNK?前前B细胞前B细胞不成熟B细胞成熟B细胞激活的B细胞浆细胞前驱细胞，非抗体依赖初始（Virgin）B 细胞，非抗体依赖中心细胞&中心后细胞;抗体依赖TdTCD20,CD22CD19,PAX5CD7
7、9aCD10Bcl-6CD138Cytoplasmic CD22前胸腺细胞包膜下胸腺细胞皮质胸腺细胞髓质胸腺细胞外周T细胞前驱细胞成熟T细胞CytoplasmicSurfaceCD4CD8CD1CD4,CD8CD3CD2CD7TdT淋巴瘤 VS 其他恶性肿瘤?l有时淋巴瘤与分化差的癌、恶性黑色素瘤、肉瘤鉴别非常困难 l淋巴瘤也可有各种形态(如小梁状排列、粘液变性、菊形团、梭形细胞)l免疫组化对于鉴别很有帮助对于分化差的肿瘤LCACytokeratinS100 protein淋巴瘤/白血病+*-癌-+-/+恶性黑色素瘤-+肉瘤-/+*大细胞间变淋巴瘤和淋巴母细胞淋巴瘤可以LCA阴性 需要加染其他
8、标志(如 CD30)Cytokeratin,CAM5.2白细胞共同抗原lCD45(CD45RB):Leukocyte common antigen除浆细胞之外的所有正常淋巴细胞(B,T 或 NK 系)Reed-Sternberg 细胞(Hodgkin lymphoma)CD45-通常对于淋巴瘤，不必染LCA:直接染 CD20 和CD3扁桃体LCA/CD45免疫组化对淋巴瘤分类有多重要?l只有极少数淋巴瘤不做免疫组化，可明确诊断:滤泡性淋巴瘤边缘区B细胞淋巴瘤,粘膜相关淋巴组织类小淋巴细胞淋巴瘤l绝大多数其他类型均需要免疫组化，尤其是:套细胞淋巴瘤弥漫大B细胞淋巴瘤各种T细胞淋巴瘤B 系细胞标记
9、lCD20(e.g.L26):非常敏感(95%B细胞淋巴瘤阳性),有时B小淋巴细胞淋巴瘤染色不佳，B细胞淋巴母细胞淋巴瘤可为阴性 浆细胞、浆细胞瘤和浆母细胞淋巴瘤阴性(对于这类肿瘤，CD20阴性是一诊断线索)核阳性不能判定为阳性，任何细胞过度热修复均可核阳性CD20B 系细胞标志lCD79a(mb-1):B cell receptor complex:sensitive and specific B cell marker(normal plasma cells are positive;germinal center cells are stained weakly)50%plasmacyt
10、omas are positiveBut can be positive in T-lymphoblastic lymphoma/leukemiaAntibody expensive:Use as back-uplImmunoglobulin(cytoplasmic and/or surface Ig)CD79aCD79aPlasmacytomalNew B-lineage markerPAX-5Oct-2Bob.1PAX-5PAX-5PAX-5Oct-2Bob.1Oct-2Bob.1T-系细胞标志l胞浆CD3(polyclonal against CD3e,monoclonal also a
11、vailable,e.g.PS1):T系细胞高度敏感和特异 核周或核皱折处染色深组织细胞有时弱浆阳性，但无核周浓聚90%T 和NK 细胞淋巴瘤阳性合并使用其他T细胞标志(e.g.CD45RO,CD2)CD3CD3T系细胞标志l表面 CD3(e.g.Leu4,T3,OKT3):需要冰冻切片染色大部分T细胞淋巴瘤表面CD3阳性NK 细胞表面 CD3-,胞浆 CD3+T系细胞标志lCD45RO(e.g.UCHL1,A6):高度敏感的T细胞标志，一些T细胞淋巴瘤 CD3-CD45RO+但组织细胞和髓系细胞及其肿瘤也阳性lCD43(e.g.MT1,DFT1,Leu22):高度敏感的T细胞标志，但不特异组
12、织细胞和髓系细胞及其肿瘤也阳性EBV感染时，B细胞也表达小B细胞淋巴瘤时也为阳性T 系细胞标志lCD4,CD8:诊断T细胞淋巴瘤时并不常用lCD2:敏感而特异的全T细胞标志比CD3贵，备用标志lCD7:T细胞发育早期阶段表达尤其在诊断T淋巴母细胞淋巴瘤时有用(一些病例 CD3-)一个新的T细胞标志:LAT当一个“淋巴瘤”仅CD43阳性时l可能是一个真正的T细胞淋巴瘤/白血病l一定要考虑到:髓系白血病/粒细胞肉瘤组织细胞肿瘤i.e.the specific T and Bmarkers negativeCD43+:T cell lymphoma?No:See myeloperoxidaseNK
13、细胞标志lCD56(e.g.123C3):NK细胞淋巴瘤的最好标志 不完全是NK细胞特异性标志;一些表达 gd T细胞受体的T细胞淋巴瘤也阳性CD56 在神经细胞和神经内分泌细胞也阳性，诊断NK细胞淋巴瘤时必须有其他白细胞标志CD56(NK/T cell lymphoma)小结:B或者T细胞淋巴瘤？CD20 CD3CD20+B细胞淋巴瘤;加其他分类标志CD3+T或NK细胞淋巴瘤;加其他标志(CD56,CD30)CD20-CD3-非造血组织肿瘤?浆细胞瘤?浆母细胞性淋巴瘤?T细胞淋巴瘤?淋巴母细胞淋巴瘤?淋巴瘤进一步分类l小B细胞淋巴瘤CD5CD23IgDCyclin D1bcl-6 or CD
14、10淋巴瘤进一步分类lBcl-2:仅区别反应性增生和滤泡性淋巴瘤l诊断浆细胞瘤:LCA L26(-),CD79a(+/-),CD138(+),Oct-2(+),Bob.1(+),Ig(+)CD138(syndecan-1)lCD138 在浆细胞、浆母细胞和一些免疫母细胞的胞膜阳性表达l用于诊断浆细胞瘤l单独的CD138阳性不足以诊断浆细胞瘤，必须加 LCA(CD45)等CD138LCA/CD45淋巴瘤进一步分类lCD10CD10 急性淋巴母细胞白血病标志,也表达于正常的生发中心B细胞和中心T细胞价值:l滤泡中心细胞分化(滤泡性淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、一些大B细胞淋巴瘤)l血管免疫母T细胞
15、淋巴瘤CD10Strongly positive cells are T cellsRFHFL淋巴瘤进一步分类lBcl-6核阳性正常表达于滤泡中心B细胞、滤泡周围的CD30+细胞和少数T细胞以下淋巴瘤阳性:l滤泡性淋巴瘤l一些大B细胞淋巴瘤lBurkitt 淋巴瘤l一些大细胞间变性淋巴瘤Bcl-6Bcl-6淋巴瘤进一步分类l滤泡树突细胞标志(CD21,CD35,clusterin)助于诊断滤泡性淋巴瘤套细胞淋巴瘤(疏松散在网格)血管免疫母T细胞淋巴瘤l大细胞间变性淋巴瘤CD30,ALK1Mantle cell lymphoma:CD21Angioimmunoblastic T-cell lym
16、phomaTonsil:ClusterinFollicular lymphoma with diffuse component:ClusterinCD30l激活淋巴细胞标志l淋巴结反应性增生时CD30+细胞增多l必须是膜+/-高尔基区阳性、弥漫浆着色不应判定为阳性lCD30 经典的何杰金间变性大细胞淋巴瘤 其他一些大细胞淋巴瘤CD30CD30淋巴瘤进一步分类lKi67:帮助诊断 Burkitt 淋巴瘤(100%)l细胞毒性标志,e.g.TIA1,granzyme B,NK/T细胞性淋巴瘤、脂膜炎样T细胞淋巴瘤l淋巴母细胞淋巴瘤:TdTBurkitt lymphomaTIA-1TdT(termi
17、nal deoxynucleotidyl transferase)TdT(thymoma)TdT(tonsil)T-lymphoblastic lymphoma淋巴瘤的分期和预后套细胞淋巴瘤中，高 Ki67 index 与预后不良有关ZAP-70 表达是 B-CLL预后不良的标志大细胞间变淋巴瘤:ALK+比 ALK-预后要好ALK1 原发系统性ALCL的总生存期(Falini et al,1999)0510YearsALCL,t(2;5)or ALK+100%50%ALCL,t(2;5)or ALK-淋巴瘤的预后与分期l累及其他部位的淋巴瘤，如骨髓等，可以用一些标志检测出来ALK、CD30：大
18、细胞间变淋巴瘤Cyclin D1：套细胞淋巴瘤CD56：NK细胞淋巴瘤ALK1治疗靶标l 治疗性抗体的靶标:anti-CD20(Rituximab，美洛华)anti-CD22anti-CD52l 淋巴瘤的治疗过程中，临床大夫会要求病理大夫染一些抗体标志l 治疗后的淋巴瘤细胞有时会失去抗原,e.g.CD20小结:有用的分类标志l B 系细胞CD20(可选:CD79a,PAX-5)l T 系细胞CD3(可选:CD45RO,CD2)l NK 系细胞CD56l 髓质细胞Myeloperoxidasel 滤泡中心细胞CD10(or bcl-6)小结:有用的分类标志l 套区细胞IgDl 不成熟的前驱细胞TdTl 浆细胞CD20-,CD138+(可选:Oct-2,Bob.1)l 组织细胞CD68(PGM1 KP1)l 滤泡树突细胞CD21+CD35l Langerhans细胞S100,CD1a小结:重要的淋巴瘤分类标志l淋巴母细胞淋巴瘤:TdT、CD99、CD34lB-CLL:CD5,CD23l套细胞淋巴瘤:Cyclin D1l滤泡性淋巴瘤:CD10(or bcl-6)lBurkitt 淋巴瘤:Ki67 index(100%)l血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤:CD10,滤泡树突细胞标志(CD21，CD35)l间变性大细胞淋巴瘤:CD30,ALKThank you for Attention!
