1、微生物学实验微生物学实验Lab work on Microbiology 三峡大学化学与生命科学学院三峡大学化学与生命科学学院微生物学教学组微生物学教学组实验指导老师实验指导老师:郭金玲郭金玲 涂涂 璇璇实验室规章制度及实验基本要求实验室规章制度及实验基本要求1.遵守实验室规则，遵守实验室规则，爱护实验仪器设备爱护实验仪器设备。2.实验前要实验前要写预习报告写预习报告，了解目的、原理和基本方法，做，了解目的、原理和基本方法，做到心中有数、思路清晰。到心中有数、思路清晰。3.进入实验室要进入实验室要签名签名，指导老师检查，指导老师检查预习报告预习报告。4.实验操作要细心谨慎，严格遵守操作规则，认
2、真进行观实验操作要细心谨慎，严格遵守操作规则，认真进行观察，做好察，做好实验记录实验记录。5.以实事求是的态度认真完成以实事求是的态度认真完成实验报告实验报告，并交给指导教师，并交给指导教师批阅。批阅。6.随时注意实验台面的清洁，做完实验要清理好实验台面，随时注意实验台面的清洁，做完实验要清理好实验台面，卫生值日生要做好当日的卫生值日生要做好当日的清洁卫生清洁卫生。7.指导老师检查实验记录和实验任务，检查通过指导老师检查实验记录和实验任务，检查通过签字后签字后方可离开实验室方可离开实验室，走时注意关闭灯、电、火、窗。，走时注意关闭灯、电、火、窗。实验考核实验考核1.微生物学实验成绩包括实验过程
3、微生物学实验成绩包括实验过程表现成绩、实验报告成表现成绩、实验报告成绩绩2.实验过程表现成绩包括：实验操作是否正确规范、学习实验过程表现成绩包括：实验操作是否正确规范、学习态度是否认真、实验结果如何是否符合逻辑、清扫值日态度是否认真、实验结果如何是否符合逻辑、清扫值日等方面。成绩分为等方面。成绩分为：良好、一般、差三级，相当于百分：良好、一般、差三级，相当于百分制制 85、75、55。3.实验报告成绩包括：实验报告的格式是否正确、原理是实验报告成绩包括：实验报告的格式是否正确、原理是否论述清楚，实验结果分析讨论是否正确，报告字迹是否论述清楚，实验结果分析讨论是否正确，报告字迹是否清楚等方面，实
4、验报告给定成绩分为：否清楚等方面，实验报告给定成绩分为：A+、A、A-、B+、B、B-、C+、C、C-九级，相当于百份制的九级，相当于百份制的 95、90、85、80、75、70、65、60、55。微生物实验进程表微生物实验进程表实验一实验一 实验室环境、人体表面微生物检查及常用器皿包扎实验室环境、人体表面微生物检查及常用器皿包扎实验二实验二 普通光学显微镜的使用及细菌形态观察普通光学显微镜的使用及细菌形态观察实验三实验三 培养基的制备、消毒与灭菌培养基的制备、消毒与灭菌实验四实验四 细菌简单染色和革兰氏染色法细菌简单染色和革兰氏染色法实验五实验五 神农架土壤微生物分离纯化神农架土壤微生物分离
5、纯化实验六实验六 放线菌、霉菌形态观察放线菌、霉菌形态观察实验七实验七 平板菌落计数与接种平板菌落计数与接种实验八实验八 酵母菌形态观察及死活细胞鉴别、微生物大小测定酵母菌形态观察及死活细胞鉴别、微生物大小测定 和显微镜直接计数和显微镜直接计数实验九实验九 环境因素对微生物生长的影响环境因素对微生物生长的影响实验十实验十 微生物生理生化实验微生物生理生化实验实验十一产碱性蛋白酶菌株的筛选实验十一产碱性蛋白酶菌株的筛选（综合实验）（综合实验）v 微生物实验室常用器具和仪器微生物实验室常用器具和仪器v 空玻璃器皿的包装空玻璃器皿的包装v 玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗v 证明实验室环境与人体表面存在
6、微生物证明实验室环境与人体表面存在微生物v 实验任务实验任务v 思考题思考题微生物实验一微生物实验一试管（试管（test tube）一、常用器具和仪器一、常用器具和仪器1.Control：Negative 2.S.aureus：Acid 3.P.vulgaris：Acid,Gas 4.P.aeruginosa：Negative 5.E.coli：Acid,Gas Control Acid+Gas -+德汉氏小管（德汉氏小管（Durham tube）玻璃吸管（玻璃吸管（glass pipette）吸器吸器微量加样器（微量加样器（micropipette）吸嘴（吸嘴（tip）培养皿（培养皿（pet
7、ri dish）三角瓶（三角瓶（erlenmeyer flask）接种铲（接种铲（inoculating shovel）玻璃涂布器（玻璃涂布器（glass spreader）接种环（接种环（inoculating loop）接种钩（接种钩（inoculating hook）接种针（接种针（inoculating needle）小塑料离心管（小塑料离心管（Eppendorf tube）滴瓶（滴瓶（dropper bottle）双层瓶（双层瓶（double bottle）酒精灯酒精灯(alcohol burner）煤气喷头（煤气喷头（coal gas sprinkler head）试剂瓶试剂瓶量筒
8、量筒烧杯烧杯温度计温度计漏斗漏斗石棉网石棉网烘箱烘箱卧式灭菌锅卧式灭菌锅手提式灭菌锅手提式灭菌锅无菌操作台无菌操作台/室室过滤除菌设备过滤除菌设备厌氧操作设备厌氧操作设备小型发酵罐小型发酵罐离心机离心机培养箱培养箱/摇床摇床冷冻干燥机冷冻干燥机蒸馏水器蒸馏水器超声波清洗仪超声波清洗仪磁力搅拌器磁力搅拌器方法一：用旧报纸密密包紧，方法一：用旧报纸密密包紧，一般以一般以5-8套培套培养皿作一包养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌（见。包好后用干热或湿热灭菌（见无菌操作技术）。无菌操作技术）。方法二：将培养皿放入金属（不锈钢）筒内，方法二：将培养皿放入金属（不锈钢）筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部
9、还有一个干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。提出，以便装取培养皿。1、培养皿的包装、培养皿的包装二、玻璃器皿的包装二、玻璃器皿的包装包好的培养皿包好的培养皿塑料培养皿架塑料培养皿架金属筒和内部的框架金属筒和内部的框架2、吸管的包装、吸管的包装 准备好干燥的吸管，在准备好干燥的吸管，在粗头端塞入一小段棉花粗头端塞入一小段棉花，以，以免使用时将杂菌吹入或不慎将微生物吸出。免使用时将杂菌吹入或不慎将微生物吸出。将吸管尖端斜放在旧报纸的近左端，将吸管尖端斜放在旧报纸的近左端，与报纸成与报纸成45角角，左
10、端多余的一段覆折在尖头上，再将整根吸管卷入，左端多余的一段覆折在尖头上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打个小结。报纸，右端多余的报纸打个小结。包好的吸管再用一张大报纸包好，干热灭菌。或一包好的吸管再用一张大报纸包好，干热灭菌。或一起装入专用吸管筒进行灭菌。起装入专用吸管筒进行灭菌。如果一次可以用完，也可以将吸管直接装入筒内。如果一次可以用完，也可以将吸管直接装入筒内。尖端向内，使用时将筒平放在桌面上，手持粗端抽出。尖端向内，使用时将筒平放在桌面上，手持粗端抽出。3、试管和三角瓶的包装、试管和三角瓶的包装 试管管口和三角瓶瓶口塞以棉试管管口和三角瓶瓶口塞以棉花塞或泡膜塑料塞，然后在外面用花
11、塞或泡膜塑料塞，然后在外面用两层报纸包好，并用细线扎紧。若两层报纸包好，并用细线扎紧。若用铝箔更好，可以不用线扎。进行用铝箔更好，可以不用线扎。进行干热或湿热灭菌。干热或湿热灭菌。4、棉塞的制作：、棉塞的制作：棉塞的作用主要是防止杂菌污染和保证通气良好，所以棉塞的作用主要是防止杂菌污染和保证通气良好，所以好的棉塞应该形状、大小和松紧与试管口或三角瓶口完全好的棉塞应该形状、大小和松紧与试管口或三角瓶口完全适合。适合。加塞时，棉塞长度的加塞时，棉塞长度的1/3在管口（瓶口）外，在管口（瓶口）外，2/3在内在内。一般用一般用纤维长的棉花纤维长的棉花做塞子，做塞子，不用脱脂棉不用脱脂棉，因为脱脂，因为
12、脱脂棉易吸水变湿，造成污染。棉易吸水变湿，造成污染。此外，此外，液体培养液体培养中还经常用到中还经常用到通气塞通气塞，即，即8层纱布重叠层纱布重叠而成，或在两层纱布间均匀铺一层棉花作成。而成，或在两层纱布间均匀铺一层棉花作成。制做棉塞制做棉塞三、玻璃器皿的清洗三、玻璃器皿的清洗新玻璃器皿：新玻璃器皿：用用 2%盐酸盐酸浸泡数小时后用自来水冲洗干净；浸泡数小时后用自来水冲洗干净；使用过的玻璃器皿：使用过的玻璃器皿：试管、培养皿、三角瓶等：试管、培养皿、三角瓶等：用瓶刷沾用瓶刷沾去污粉等洗涤剂刷洗，再用自来水冲洗干净；装有固体培去污粉等洗涤剂刷洗，再用自来水冲洗干净；装有固体培养基的器皿应先将其刮
13、去，然后洗涤；养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤；玻璃吸管：玻璃吸管：使用后投入有自来水的大量筒或标本缸内，以使用后投入有自来水的大量筒或标本缸内，以免干燥后不易清洗，再集中用自来水冲洗。免干燥后不易清洗，再集中用自来水冲洗。载玻片和盖玻片：载玻片和盖玻片：滴加过香柏油的玻片要先用软纸沾滴加过香柏油的玻片要先用软纸沾二甲二甲苯苯擦去油，在肥皂水中煮沸擦去油，在肥皂水中煮沸5-10 min，用软布或脱脂棉擦用软布或脱脂棉擦拭后用自来水冲洗。然后在稀洗液中浸泡拭后用自来水冲洗。然后在稀洗液中浸泡2 h，再用自来再用自来水和蒸馏水冲洗晾干后浸于水和蒸馏水冲洗晾干后浸于95%乙醇中备用。乙醇中备用。注意
14、注意：带菌的器皿在带菌的器皿在洗涤前用洗涤前用 2%煤酚皂溶液或煤酚皂溶液或 0.25%新洁尔灭溶液新洁尔灭溶液等消毒液内浸泡等消毒液内浸泡 24 h或煮或煮沸沸 30 min，再洗涤；再洗涤；带病原菌的培养物先进行高压蒸灭菌，然后带病原菌的培养物先进行高压蒸灭菌，然后倒去培养物，再洗涤。倒去培养物，再洗涤。四、证明实验室环境与人体表面存在微生物四、证明实验室环境与人体表面存在微生物基本原理：基本原理：平板培养基含有微生物生长所需要的营养成分，当平板培养基含有微生物生长所需要的营养成分，当取自取自不同来源不同来源的样品接种于培养基上，在的样品接种于培养基上，在 2837 温度下培养，温度下培养
15、，13 天内每一菌体即能通过很多次细胞天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为为菌落菌落。每一种微生物所形成的菌落都有它自己的特点，。每一种微生物所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。养基来检查环
16、境中微生物的数量和类型。1、培养皿做记号、培养皿做记号 任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，培养皿的记号一般在笔做上记号，培养皿的记号一般在皿底皿底上。用记号笔写上上。用记号笔写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源，字尽量班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源，字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察。小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察。2、接种、接种（每人接种（每人接种2只平皿）只平皿）用棉签接种实验室空气、台面及手指（洗手前和洗手用棉签接种实验室空气、台面及手指（洗手前和洗手后）、头
17、发、咳嗽、鼻腔等。后）、头发、咳嗽、鼻腔等。五、实验任务五、实验任务每人：每人：包扎包扎4个平皿、个平皿、1只吸管；只吸管；做做2个试管塞、做个试管塞、做1个三角瓶塞子并包扎好；个三角瓶塞子并包扎好；接种接种2只平皿。只平皿。六、思考题六、思考题1、记录实验结果，描写观察到的菌落形态。、记录实验结果，描写观察到的菌落形态。2、比较各种不同来源的样品，哪一种样品的平板菌、比较各种不同来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多？落数与菌落类型最多？3、通过本次实验，在你防止培养物的污染与防止微、通过本次实验，在你防止培养物的污染与防止微生物的扩散方面，你学到些什么？有什么体会？生物的扩散方面，你学到些什么？有什么体会？结结 束束请注意实验台面清洁！请注意实验台面清洁！请值日生留下来打扫卫生！请值日生留下来打扫卫生！
