1、第一节第一节 微生物的分离和纯培养微生物的分离和纯培养课程标准课程标准1进行微生物的分离和培养。进行微生物的分离和培养。2用大肠杆菌为材料进行平板培养，分离菌落。用大肠杆菌为材料进行平板培养，分离菌落。课标解读课标解读1了解有关微生物及其培养基的基础知识。了解有关微生物及其培养基的基础知识。2理解消毒和灭菌的原理、方法，进行无菌技术的操理解消毒和灭菌的原理、方法，进行无菌技术的操 作。作。3理解微生物接种的方法步骤，进行大肠杆菌的分离和理解微生物接种的方法步骤，进行大肠杆菌的分离和 纯培养。纯培养。微生物主要包括微生物主要包括_、放线菌、放线菌、_、霉菌以及立、霉菌以及立克次氏体、支原体、克次
2、氏体、支原体、_等。等。(1)培养基的概念：根据微生物培养基的概念：根据微生物_和和_的需要，的需要，将各种将各种_混合在一起，配制成适合微生物生存的混合在一起，配制成适合微生物生存的营养基质营养基质培养基。培养基。微生物分离与纯培养的基本方法与原理微生物分离与纯培养的基本方法与原理1微生物的种类微生物的种类2培养基培养基细菌细菌酵母菌酵母菌病毒病毒生长繁殖生长繁殖代谢代谢营养物质营养物质(2)平板培养基平板培养基将溶化后的将溶化后的_培养基基质倒入培养基基质倒入_，_后制成的培养基称为平板培养基。后制成的培养基称为平板培养基。(1)接种的概念：把相应的接种的概念：把相应的_移入培养基中的过程
3、移入培养基中的过程称为接种。称为接种。(2)接种的方法：在平板培养基上的接种方法有接种的方法：在平板培养基上的接种方法有_、_、稀释混合平板法。、稀释混合平板法。(3)纯培养的概念：将所需要的微生物从纯培养的概念：将所需要的微生物从_中分离出来，获得中分离出来，获得_微生物的过程称为纯培养。微生物的过程称为纯培养。3接种接种固体固体无菌培养皿无菌培养皿冷却凝冷却凝研究对象研究对象平板划线平板划线稀释涂布平板法稀释涂布平板法混杂的微生物群混杂的微生物群纯种纯种固固法法体体(1)采用无菌技术的原因与要求采用无菌技术的原因与要求原因：在微生物的分离和纯培养中，一定不能有原因：在微生物的分离和纯培养中
4、，一定不能有_。要求：在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严要求：在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严格的格的_，对工作场所进行，对工作场所进行_。(2)灭菌和消毒灭菌和消毒灭菌是指用强烈的灭菌是指用强烈的_杀死环境或物体内外杀死环境或物体内外_的微生物，常用的是的微生物，常用的是_法。法。消毒一般是用消毒一般是用_的理化方法杀死环境或物体上的理化方法杀死环境或物体上的的_和和_，常用的是，常用的是_消毒法和消毒法和_消毒法。消毒法。4无菌技术无菌技术外来的外来的灭菌灭菌消毒消毒理化因素理化因素所有所有高温灭菌高温灭菌相对温和相对温和病原微生物病原微生物有害微生物的营养细胞有害微生物
5、的营养细胞射线射线化学药剂化学药剂污染性杂菌污染性杂菌 用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？70%与与95%的酒精，哪一种效果更好？为什么？的酒精，哪一种效果更好？为什么？提示提示酒精擦拭属化学消毒。酒精消毒时，酒精擦拭属化学消毒。酒精消毒时，70%的酒精杀的酒精杀菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。力减弱。思维激活思维激活1(1)定义定义形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜
6、形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。才能看清楚的生物，统称为微生物。(2)微生物的类群微生物的类群原核生物：细菌、放线菌、立克次氏体、支原体等。原核生物：细菌、放线菌、立克次氏体、支原体等。部分真核生物：酵母菌、霉菌、大型真菌部分真核生物：酵母菌、霉菌、大型真菌(如蘑菇如蘑菇)等。等。非细胞结构生物：病毒、类病毒等。非细胞结构生物：病毒、类病毒等。(3)微生物的化学成分与营养需求微生物的化学成分与营养需求微生物的化学组成与其他生物大体相同，也是主要由微生物的化学组成与其他生物大体相同，也是主要由C、H、O、N、P、S等大量元素和等大量元素和Fe、M
7、n、Cu、Zn、Mo等等1微生物微生物微量元素组成，这些元素最终来自外界环境中各种有机物微量元素组成，这些元素最终来自外界环境中各种有机物和无机物，可归纳为碳源和无机物，可归纳为碳源(主要提供主要提供C元素元素)、氮源、氮源(主要提主要提供供N元素元素)、水、水(提供提供H、O)、无机盐、无机盐(提供大量元素和微量提供大量元素和微量元素元素)和生长因子五大类。和生长因子五大类。(4)代谢类型与营养物质的关系代谢类型与营养物质的关系自养型微生物和异养型微生物的营养物质比较：自养型微生物和异养型微生物的营养物质比较：营养营养 物质物质类型类型碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子举例举例自养型自养型微生
8、物微生物CO2、NaHCO3NH3、铵盐、铵盐、硝酸盐等硝酸盐等一般不一般不需要需要硝化硝化细菌细菌异养型异养型微生物微生物糖类、脂糖类、脂肪酸等肪酸等铵盐、铵盐、硝酸盐、硝酸盐、蛋白质等蛋白质等有些种有些种类需要类需要乳酸菌乳酸菌(1)培养基的成分培养基的成分培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源、生长因子五培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源、生长因子五大类营养物质。大类营养物质。(2)碳源、氮源及生长因子的来源与功能比较碳源、氮源及生长因子的来源与功能比较2.培养基的成分培养基的成分营养成分营养成分来源来源功能功能碳碳源源无机碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物等含
9、碳无机物构成细胞物质和构成细胞物质和一些代谢产物；一些代谢产物；有机碳源既是碳有机碳源既是碳源又是能源源又是能源有机碳源有机碳源糖类、脂质、蛋白质、糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生有机酸、石油、花生粉饼等粉饼等氮氮源源无机氮源无机氮源无机氮：无机氮：NH3、铵盐、铵盐、硝酸盐、硝酸盐、N2等等将无机氮合成含氮将无机氮合成含氮的代谢产物的代谢产物有机氮源有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸酸、尿素、氨基酸合成蛋白质、核酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物及含氮的代谢产物生长因子生长因子维生素、氨基酸、碱维生素、氨基酸、碱基基酶和核酸的组成酶和核酸的组成成分；成分；参与
10、代谢参与代谢过程中的酶促反应过程中的酶促反应培养基的种类很多，可以从不同的角度进行分类。培养基的种类很多，可以从不同的角度进行分类。(1)按照物理性质分类按照物理性质分类种类种类特点特点作用作用固体固体培养基培养基加凝固剂，呈固态加凝固剂，呈固态微生物的分离、计微生物的分离、计数、保藏菌种等数、保藏菌种等半固体半固体培养基培养基加少量凝固剂，容器放加少量凝固剂，容器放倒不致流出，剧烈震动倒不致流出，剧烈震动则破散则破散观察微生物的运动、观察微生物的运动、鉴定菌种等鉴定菌种等液体液体培养基培养基不加凝固剂，呈液态不加凝固剂，呈液态常用于工业生产常用于工业生产3.培养基的种类培养基的种类特别提醒特
11、别提醒 平板培养基是固体培养基的一种。平板培养基是固体培养基的一种。(2)按照培养基的用途分类按照培养基的用途分类种类种类制备方法制备方法用途用途选择培选择培养基养基加入某种化学物质或除加入某种化学物质或除去某些营养成分去某些营养成分从众多的微生物中分从众多的微生物中分离所需微生物离所需微生物鉴别培鉴别培养基养基加入某种试剂加入某种试剂鉴别不同种类的微鉴别不同种类的微生生物物基础培基础培养基养基不另加其他物质或试剂不另加其他物质或试剂培养多种微生物培养多种微生物(3)按照培养基的化学成分分类按照培养基的化学成分分类种类种类特点特点用途用途天然培养基天然培养基含化学成分不明确的天然物质含化学成分
12、不明确的天然物质工业生产工业生产合成培养基合成培养基培养基成分明确培养基成分明确(用化学成分用化学成分已知的化学物质配成已知的化学物质配成)分类、鉴定分类、鉴定特别提醒特别提醒 天然培养基成分不明确，造价低；合成培养基天然培养基成分不明确，造价低；合成培养基成分明确，价格高。成分明确，价格高。4消毒和灭菌的区别消毒和灭菌的区别条件条件结果结果常用的方法常用的方法消消毒毒较为温和的较为温和的物理或化学物理或化学方法方法仅杀死物体表面或内仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害部一部分对人体有害的微生物的微生物(不包括芽孢不包括芽孢和孢子和孢子)煮沸消毒法、煮沸消毒法、巴氏消毒法、巴氏消毒法、紫外线或
13、化学紫外线或化学药物消毒法药物消毒法灭灭菌菌强烈的理化强烈的理化因素因素杀死物体内外所有的杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和微生物，包括芽孢和孢子孢子灼烧灭菌、干灼烧灭菌、干热灭菌、高压热灭菌、高压蒸汽灭菌蒸汽灭菌特别提醒特别提醒 实验后所有用过的培养基、培养液都要统一进实验后所有用过的培养基、培养液都要统一进行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会造成环境污染。实验过行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会造成环境污染。实验过程中一定不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手，程中一定不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。以防止被微生物感染。下列说法正确的是下列说法正确的是 ()。A培养
14、基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C除水以外的无机物只能提供无机盐除水以外的无机物只能提供无机盐D无机氮源不可能提供能量无机氮源不可能提供能量解析解析本题主要考查了微生物培养中培养基的含义、类型、本题主要考查了微生物培养中培养基的含义、类型、营养等方面的知识。根据培养基的物理性质，可分为液体营养等方面的知识。根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固
15、体培养基；除入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除水以外的无机物如水以外的无机物如NH4HCO3，既可以是碳源，也可以是，既可以是碳源，也可以是氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，如如NH3可以为硝化细菌提供能量。可以为硝化细菌提供能量。答案答案A【巩固巩固1】_培养基。培养基。采用采用_进行接种。划线的方法包括进行接种。划线的方法包括_和和_。划线完毕后，盖上培养皿盖，将培养皿划线完毕后，盖上培养皿盖，将培养皿_，放入，放入_中培养中培养24 h。大肠杆菌的分离和纯培养大肠杆菌的分离和纯培养1培养基类型培养基类型2接
16、种接种3培养培养牛肉膏蛋白胨琼脂牛肉膏蛋白胨琼脂平板划线分离法平板划线分离法连续划线法连续划线法交叉划线法交叉划线法倒置倒置37 的恒温培养箱的恒温培养箱挑取挑取_大肠杆菌菌落接种到培养基上，仍在大肠杆菌菌落接种到培养基上，仍在_中培养中培养24 h，可获得大肠杆菌的，可获得大肠杆菌的_。检查。检查后如果发现有杂菌，可进一步后如果发现有杂菌，可进一步_，直至，直至_。大多数微生物适宜生长的温度是大多数微生物适宜生长的温度是_之间，实验室中之间，实验室中常采用常采用_ 培养微生物。一般的细菌适合于培养微生物。一般的细菌适合于_性环性环境生长，放线菌适合于境生长，放线菌适合于_性环境，酵母菌和霉菌
17、适合于性环境，酵母菌和霉菌适合于_性环境。性环境。4纯化培养纯化培养5微生物的培养条件微生物的培养条件单个单个37 恒恒纯培养纯培养划线挑菌划线挑菌纯化纯化2540 2830中中偏碱偏碱微酸微酸温培养箱温培养箱 微生物接种技术中最核心的内容是什么？微生物接种技术中最核心的内容是什么？提示提示所有微生物接种方法中最核心的内容是防止杂菌污所有微生物接种方法中最核心的内容是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。染，保证培养物的纯度。思维激活思维激活2(1)名称名称牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。(2)主要成分与作用主要成分与作用1培养大肠杆菌的培养基培养大肠杆菌的培养基培养基组分培养基组分
18、提供的主要营养物质提供的主要营养物质牛肉膏牛肉膏碳源、磷酸盐和生长因子碳源、磷酸盐和生长因子蛋白胨蛋白胨 氮源和生长因子氮源和生长因子NaCl无机盐无机盐H2O氢元素、氧元素氢元素、氧元素(3)类型类型牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，从物理状态上看，属于固体培牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，从物理状态上看，属于固体培养基且是平板培养基；从功能用途上看，属于基础培养基；养基且是平板培养基；从功能用途上看，属于基础培养基；从化学成分上看，属于天然培养基。从化学成分上看，属于天然培养基。(1)接种前的准备工作接种前的准备工作将所用的实验器材全部放入超净工作台或无菌箱将所用的实验器材全部放入超净工作台或无菌箱(室室)
19、，用，用紫外灯照射紫外灯照射30 min。进入无菌室前，要用消毒液。进入无菌室前，要用消毒液(质量分质量分数为数为70%的酒精的酒精)清洁双手，还需换好工作服、鞋、帽，清洁双手，还需换好工作服、鞋、帽，戴上口罩。戴上口罩。(2)接种环灭菌接种环灭菌将接种环环端在酒精灯火焰上烧红，再将接种环斜放，沿将接种环环端在酒精灯火焰上烧红，再将接种环斜放，沿环向上，烧至可能碰到培养皿的部分。来回数次。环向上，烧至可能碰到培养皿的部分。来回数次。2接种大肠杆菌接种大肠杆菌(3)试管口灭菌试管口灭菌在酒精灯火焰附近冷却接种环。左手拿取混合菌液试管，让在酒精灯火焰附近冷却接种环。左手拿取混合菌液试管，让试管口缓
20、缓通过火焰灭菌。试管口缓缓通过火焰灭菌。(4)沾取混合菌液沾取混合菌液将接种环伸入试管内，沾取一环混合菌液。将接种环伸入试管内，沾取一环混合菌液。(5)接种接种左手持培养皿并开启一条缝隙，右手将接种环迅速伸入平板，左手持培养皿并开启一条缝隙，右手将接种环迅速伸入平板，进行划线。划线的方法包括连续划线法和交叉划线法。进行划线。划线的方法包括连续划线法和交叉划线法。连续划线法是从平板边缘的一点开始，连续作紧密的波浪连续划线法是从平板边缘的一点开始，连续作紧密的波浪式划线。式划线。注意注意：a.画线的方向应该从一个方向开始；画线的方向应该从一个方向开始；b.线条要细且密；线条要细且密；c.不要重复画
21、线。不要重复画线。交叉划线法是从平板的一边作第一次平行划线若干条。交叉划线法是从平板的一边作第一次平行划线若干条。转动培养皿约转动培养皿约70角，将接种环在火上灼烧并冷却后，通角，将接种环在火上灼烧并冷却后，通过第一次划线部分，作第二次平行划线。同法进行第三次、过第一次划线部分，作第二次平行划线。同法进行第三次、第四次划线。第四次划线。特别提醒特别提醒 交叉划线法操作注意事项：交叉划线法操作注意事项：操作第一步即取菌种之前及第二次及以后每次划线之前都操作第一步即取菌种之前及第二次及以后每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧
22、接种环，每次灼烧目的如下表：环，每次灼烧目的如下表：取菌种之前取菌种之前第二次及以后每次划线之前第二次及以后每次划线之前划线结束划线结束目目的的杀死接种环杀死接种环上原有的微上原有的微生物生物杀死上次划线后接种环上残杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末种直接来源于上次划线的末端，使每次划线后菌种数目端，使每次划线后菌种数目减少减少杀死接种环上杀死接种环上残存的菌种，残存的菌种，避免细菌污染避免细菌污染环境和感染操环境和感染操作者作者(1)培养培养将培养皿倒置的原因：将平板倒置，既可以使培养基表面将培养皿倒置的原因：将平板倒置，既可以使
23、培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。(2)观察记录观察记录将观察到的大肠杆菌的菌落特征记录于下表。将观察到的大肠杆菌的菌落特征记录于下表。形状形状大小大小表面表面边缘边缘隆起隆起透明度透明度颜色颜色3.大肠杆菌的培养大肠杆菌的培养特别提醒特别提醒 菌落及其特征：菌落及其特征：菌落是指在固体平板培养基上，由单个微生物细胞或孢子菌落是指在固体平板培养基上，由单个微生物细胞或孢子生长繁殖而成的具有特定形状的、肉眼可见的子细胞群体。生长繁殖而成的具有特定形状的、肉眼可见的子细胞群体。菌落特征是鉴别微生物类
24、群的重要依据。如细菌菌落光滑，菌落特征是鉴别微生物类群的重要依据。如细菌菌落光滑，易与基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小而不致广泛易与基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小而不致广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌菌落较稀松，多延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌菌落较稀松，多呈绒状、絮状。呈绒状、絮状。下列有关平板划线的操作正确的是下列有关平板划线的操作正确的是 ()。A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上 塞上棉塞塞上棉塞C把
25、皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划 三至五条平行线即可三至五条平行线即可D最后将平板倒置，放入培养箱中培养最后将平板倒置，放入培养箱中培养解析解析考查平板划线操作。平板划线操作时要时刻注意两个考查平板划线操作。平板划线操作时要时刻注意两个问题：一是防止杂菌污染；二是要尽可能地将菌种分离。问题：一是防止杂菌污染；二是要尽可能地将菌种分离。答案答案D【巩固巩固2】培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是 ()。化学消毒化
26、学消毒灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌紫外线消毒紫外线消毒高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法巴氏消毒法A BC D【例例1】示例示例一一无菌操作技术无菌操作技术思维导图：思维导图：深度剖析深度剖析培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用70%的酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其的酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。
27、营养成分可采用巴氏消毒法。答案答案A归纳提升归纳提升 几种常用灭菌方法比较几种常用灭菌方法比较方法方法灭菌操作灭菌操作适用对象适用对象灼烧灼烧灭菌灭菌在酒精灯火焰的充分在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧燃烧层灼烧对接种环、接种针或其对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可他金属工具灭菌，也可以对试管口、瓶口灭菌以对试管口、瓶口灭菌干热干热灭菌灭菌在干热灭菌箱内，在干热灭菌箱内，160170 条件下，条件下，加热加热12 h耐高温且需保持干燥的耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金物品，如玻璃器皿和金属用具等属用具等高压蒸高压蒸汽灭菌汽灭菌在高压蒸汽灭菌锅内，在高压蒸汽灭菌锅内，121，100 kP
28、a，灭，灭菌菌1530 min培养基、发酵设备等培养基、发酵设备等 如图是微生物平板划线示意图，划如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为线的顺序为12345。下。下列操作方法正确的是列操作方法正确的是 ()。【例例2】示例二示例二微生物的纯化培养微生物的纯化培养A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作须在火焰上进行划线操作须在火焰上进行C在在5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D在在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌区域中划线前后都要对接种环灭菌思维导图：思维导图：深度剖析深度剖析本题考查平板划线的操作方法。在每次划线前本题
29、考查平板划线的操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰旁进行。在上灼烧，接种时划线操作是在火焰旁进行。在5个区域中，个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。答案答案D方法技巧方法技巧 两种纯化培养方法的比较两种纯化培养方法的比较项目项目优点优点缺点缺点适用范围适用范围平板划平板划线法线法可以观察菌落特可以观察菌落特征，对混合菌进征，对混合菌进行分离行分离不能计数不能计数适用于好适用于好氧菌氧菌稀释涂布稀释涂布平板法平板法可以计
30、数，可以可以计数，可以观察菌落特征观察菌落特征吸收量较少，较吸收量较少，较麻烦，平板不干麻烦，平板不干燥效果不好，容燥效果不好，容易蔓延易蔓延适用于厌适用于厌氧菌和兼氧菌和兼性厌氧菌性厌氧菌根据某些微生物的营养需求特点及生理生活条件，配制特根据某些微生物的营养需求特点及生理生活条件，配制特定的培养基，进行该微生物的分离和纯培养。定的培养基，进行该微生物的分离和纯培养。(1)无菌技术的主要操作要求无菌技术的主要操作要求对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭将用于微生物培养的器皿、接种
31、用具和培养基等进行灭菌；菌；探究特定微生物的分离和纯培养探究特定微生物的分离和纯培养技法必备技法必备1实验原理实验原理2实验方法实验方法为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；火焰附近进行；实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。品相接触。(2)接种、培养与纯化接种、培养与纯化采用平板划线分离法进行接种；采用平板划线分离法进行接种；放入恒温培养箱中进行培养；放入恒温培养箱中进行培养；挑取单个该种微生物的菌落进行纯化培养。挑取单个该种微生物的菌落进行纯化培养。某
32、实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。计实验步骤如下，请给予合理的补充。(1)采样与培养采样与培养将采集的土样混匀后称取将采集的土样混匀后称取1 g，置于经过，置于经过_法灭菌处理法灭菌处理的的_(填填“固体固体”或或“液体液体”)培养基中，培养基中，28 振荡培养。振荡培养。(2)接种与选择接种与选择为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行_处处理。之后，将菌液涂布接种于以理。之后，将菌液涂布接种于以_为唯一碳源的固体为唯一碳源的固体培养基上，培养基上
33、，30 条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈_状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计验可信度，本步骤需设计_作为空白对照。作为空白对照。能力展示能力展示(3)筛选与纯化筛选与纯化将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是象是_，则说明此种菌能够，则说明此种菌能够_。从平板中挑取。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用实验效果明显的目的菌株，采用_法接种于新的培养法接种于新的培养基平板上，可对菌株进行进一步的纯化。基平板上
34、，可对菌株进行进一步的纯化。解析解析本题主要考查微生物培养有关知识。本题主要考查微生物培养有关知识。(1)灭菌方法一般用高压蒸汽灭菌，由于接下来要用涂布法接灭菌方法一般用高压蒸汽灭菌，由于接下来要用涂布法接种，所以要用液体培养基种，所以要用液体培养基(或者从第或者从第2小题也可以得出小题也可以得出)。(2)减小培养液菌体浓度一般用稀释方法。由于题目要求选出减小培养液菌体浓度一般用稀释方法。由于题目要求选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，所以应该用含有淀粉为唯一碳源能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，所以应该用含有淀粉为唯一碳源的培养基；倒置可以防止培养基受污染；为排除其它因素影的培养基；倒置可以防止培养基受污染；
35、为排除其它因素影响，需要设置未接种的空白的培养基作为对照组。响，需要设置未接种的空白的培养基作为对照组。(3)淀粉被水解，培养基会出现透明圈的现象。用划线法来淀粉被水解，培养基会出现透明圈的现象。用划线法来培养，可进一步纯化菌种。培养，可进一步纯化菌种。答案答案(1)高压蒸汽灭菌液体高压蒸汽灭菌液体(2)系列稀释系列稀释(或梯度稀释或梯度稀释)淀粉倒置未接种的空白培养基淀粉倒置未接种的空白培养基(或接种等量无菌水的或接种等量无菌水的培养基培养基)(3)出现透明圈分泌淀粉酶使淀粉发生水解出现透明圈分泌淀粉酶使淀粉发生水解平板划线平板划线下列接种操作过程中，不正确的是下列接种操作过程中，不正确的是
36、 ()。A要将接种环灼烧灭菌要将接种环灼烧灭菌B取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌C将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位D接种后还要将试管口灭菌加塞接种后还要将试管口灭菌加塞解析解析接种环伸入试管后应先接触未长菌的部位，待接种接种环伸入试管后应先接触未长菌的部位，待接种环冷却后再接触长菌部位。环冷却后再接触长菌部位。答案答案C1.(广东调研广东调研)分离纯化大肠杆菌最常用的方法是平板划线法和分离纯化大肠杆菌最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。下列有关这两种方法的叙述错误的是稀释涂布平板法。下列有关这两种方法的叙述错误的是 ()
37、。A均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面B获得的每个菌落均是由一个细菌繁殖而来的子细胞群获得的每个菌落均是由一个细菌繁殖而来的子细胞群C都应在火焰附近进行操作，以防止杂菌污染都应在火焰附近进行操作，以防止杂菌污染D稀释分散菌种的原理不同，均能达到分离纯化大肠杆菌稀释分散菌种的原理不同，均能达到分离纯化大肠杆菌 的目的的目的解析解析本题考查平板划线法和稀释涂布平板法。用稀释涂布本题考查平板划线法和稀释涂布平板法。用稀释涂布平板法时，如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可平板法时，如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能是由一个
38、细菌细胞繁殖出现分散的单个菌落，这个菌落可能是由一个细菌细胞繁殖形成的。形成的。答案答案B2下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。请回答下面的问题。养基的配方。请回答下面的问题。试剂试剂用量用量牛肉膏牛肉膏5 g蛋白胨蛋白胨10 gNaCl5 g琼脂琼脂20 g蒸馏水蒸馏水1 000 mL3(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是氮源和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是_和和_。培养基配制完成以后，一般还
39、要调。培养基配制完成以后，一般还要调节节pH并对培养基进行并对培养基进行_处理。处理。(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是分离纯化微生物最常使用的接种方法是_和和_两种。在接种过程中，接种环或涂布器的灭菌方两种。在接种过程中，接种环或涂布器的灭菌方法是法是_。(3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？能的原因是什么？_。解析解析本题考查微生物培养的有关知识。牛肉膏和蛋白胨本题考查微生物培养的有关知识。牛肉膏和蛋白胨都是从天然物质中提取出来的，都含有丰富的有机物，可都是从天然物质中提取出来的，都含有丰富的有机物，可以为微生物提供碳源和氮源。平板划线法和稀释涂布平板以为微生物提供碳源和氮源。平板划线法和稀释涂布平板法都能使菌体分散开，但是如果操作不当，会使分离效果法都能使菌体分散开，但是如果操作不当，会使分离效果不理想。不理想。答案答案(1)牛肉膏蛋白胨灭菌牛肉膏蛋白胨灭菌(2)平板划线法稀释涂布平板法灼烧灭菌平板划线法稀释涂布平板法灼烧灭菌(3)菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种环划菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染；利用接种环划线时，划下一个区域前没有对接种环进行灭菌处理线时，划下一个区域前没有对接种环进行灭菌处理(答出答出一项即可一项即可)课堂小结课堂小结
