1、（PCRPCR）基础知识1 1、DNADNA分子的组成成分和结构分子的组成成分和结构DNA DNA 分子的基本组成单位是分子的基本组成单位是 .共有共有 种种,每个基本单位是由一分子的每个基本单位是由一分子的 、一分子的一分子的 、和一分子的、和一分子的 构构成。成。脱氧核甘酸脱氧核甘酸4 4磷酸磷酸碱基碱基脱氧核糖脱氧核糖2 2、脱氧核甘酸的基本结构、脱氧核甘酸的基本结构基础知识5 52 23 34 41 1碱基碱基OHOO POHOOHOOPOHO碱基碱基OHOHOOPOHO碱基碱基OOHOOPOHOOH碱基碱基基础知识3 3、DNADNA分子的平面结构分子的平面结构ATGCAGCT5端端
2、3端端 识别识别：DNA分子的分子的3 端与端与5 端端-OH端为端为3 ;磷酸基团的末磷酸基团的末端为端为5。1.DNA1.DNA分子的复制需要哪些条件？分子的复制需要哪些条件？回忆2.DNA2.DNA分子的复制的过程是怎样的？分子的复制的过程是怎样的？条件条件组分组分作用作用模板模板提供复制的模板提供复制的模板原料原料合成合成DNADNA子链的原料子链的原料酶酶打开打开DNADNA双链双链催化合成催化合成DNADNA子链子链能量能量ATPATP为解螺旋和合成子链供能为解螺旋和合成子链供能引物引物RNARNA为为DNADNA聚合酶提供合成的聚合酶提供合成的3 3端起点端起点1.DNA分子细胞
3、内复制需要哪些条件？DNADNA母链母链4 4种脱氧核甘酸种脱氧核甘酸解旋酶解旋酶DNADNA聚合酶聚合酶2.DNA分子的复制的过程是怎样的？解旋酶解旋酶DNA聚合酶聚合酶母链母链母链母链引物引物子链子链PCR(多聚酶链式反应）1.1.定义：定义：2.2.原理：原理：体外扩增DNA如何提供相似环境？打开打开DNADNA双链双链模板模板合成子链原料合成子链原料催化子链合成催化子链合成使使DNADNA聚合酶能从聚合酶能从引物引物3 3端开始连端开始连接脱氧核苷酸接脱氧核苷酸细胞内复制细胞内复制PCRPCR解旋酶解旋酶DNA母链母链4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸DNA聚合酶聚合酶引物（引物（RNA）变性
4、变性（80-100）TaqDNA聚合酶聚合酶2030个核苷酸构成个核苷酸构成DNA或或RNADNA母链母链4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸DNA的热变性原理 DNA双链双链单链单链变性（加热变性（加热80-100）复性（缓慢冷却）复性（缓慢冷却）变性的目的：变性的目的：复性的目的：复性的目的：解开双链解开双链有利于引物有利于引物和引物和引物与两条单与两条单链的结合链的结合5/3/3/5/5/3/引物引物5/3/引物引物变性变性95oC复性复性55oC延伸延伸72oC5/3/3/5/PCR的反应过程PCR的总结1.1.每个循环包括：每个循环包括：变性变性 复性复性延伸延伸2.2.复制的方向：复制的方向
5、：子链的子链的5 5端向端向 3 3端延伸。端延伸。3.3.体外体外DNADNA复制的条件：复制的条件：四种脱氧核苷酸、耐高温的四种脱氧核苷酸、耐高温的DNADNA聚合酶、引物、聚合酶、引物、模板；缓冲溶液、模板；缓冲溶液、严格控制温度。严格控制温度。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参与反应，与反应，并且由引物并且由引物延伸而成的延伸而成的DNADNA单链会与引物单链会与引物结结合，进行合，进行DNADNA的延伸的延伸，这样，这样，DNADNA聚合酶只能特异性地复制聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的处于两个引物之间的DNA
6、DNA序列序列，使这段固定长度的序列使这段固定长度的序列呈呈指数扩增。指数扩增。体内DNA复制与PCR的技术区别：体内复制体内复制PCRPCR技术技术解旋解旋在解旋酶作用下，细胞提在解旋酶作用下，细胞提供供ATPATP，部分解开，部分解开加热到加热到9494o oC,C,双链全双链全部解开，不需解旋酶部解开，不需解旋酶引物引物一小段一小段RNARNADNADNA或或RNARNA片段片段DNADNA聚合聚合酶酶细胞自身的细胞自身的DNADNA聚合酶聚合酶（不耐高温）（不耐高温）TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶复制特复制特点点半保留复制，边解旋边复半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。制，多起点复制。半保留复制，完全解半保留复制，完全解旋后复制，从模板链旋后复制，从模板链的一端开始复制。的一端开始复制。复制的复制的方向方向子链的子链的55端向端向 3 3端延端延伸伸子链的子链的55端向端向 3 3端延伸端延伸引物引物I I引物引物IIII第二次复制第二次复制第一次复制第一次复制5 5 5 5 5 5 5 5 5模板模板DNA5 5 5 5 5 5 5 5
