1、细胞免疫检查 Examination of Cellular immunity,南方医院检验系（科）,裘宇容 教授,细胞免疫概念,广义:,狭义:,T细胞介导的特异性免疫.,凡是由免疫细胞发挥效应以清除异物的作用 。 T、B、NK、细胞因子等,细胞免疫应答的生物学意义,生理意义 1抗感染 主要清除胞内感染的病原体。 2. 抗肿瘤 杀死靶细胞,病理意义 1. 介导型超敏反应，引发移植排斥反应等。 2. 参与某些自身免疫性疾病的组织损伤。,2、 细胞免疫检查的方法：,方法,体内试验:,超敏反应的皮肤试验,体外试验:,淋巴细胞功能,表面标志物测定,功 能,T细胞转化试验(PHA) Lymphocyte
2、 transformation test B细胞转化试验(PWM) 混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte reaction) K与NK细胞活性检测,T淋巴细胞转化试验,（形态学）原理：,正常参考值（PHA） 60%80%,淋巴细胞转化率 =,转化的淋巴数 +,转化的淋巴细胞数,未转化的淋巴数,100%,结果判定：每份标本数200个细胞,优点：简便易行，便于基层推广 缺点：易受主观因素影响，重复性差,讨论1、为什么用PHA刺激T细胞可使T 细胞分裂增生？特异性转化实验？ 2、B淋巴细胞转化试验应该如何 进行？ PHA刺激行吗？,NK细胞活性测定,乳酸脱氢酶释放法,NK,Hela,+
3、,Hela LDH,LDH,LDH,LDH,LDH,LDH,比色测定LDH的活性,间接反应NK活性,参考范围：细胞毒指数27.5-52.5%,2、 细胞免疫检查的方法：,方法,体内试验:,超敏反应的皮肤试验,体外试验:,淋巴细胞功能,表面标志物测定,存在于细胞表面的多种膜分子，包括各种 表面受体和表面抗原。它们是淋巴细胞识 别抗原，并与其他免疫细胞相互作用，以 及接受微环境刺激的分子基础，亦是鉴别 和分离淋巴细胞的重要依据。,表面分化抗原：CD34825等,T细胞 B细胞 NK细胞 ,膜表面IgG测定(smIg) (Surface membrane immunoglobulin SmIg) 表
4、面分化抗原(CD192022等),表面分化抗原,流式细胞术,标志物,流式细胞术,流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)是采用流式细胞仪对处在液流中的细胞或其它生物微粒（如细菌）逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。,单个细胞、多参数、定量,什么是流式细胞仪：,流式细胞仪（Flow Cytometer) 集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、 电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆 抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。,临床型 科研型,流式细胞仪的结构和工作原理,液流系统 流动室 液流驱动系统 光学系统 激光光源 光收集系统 电子系统 光电转换 数据处理系统,FCM主要检测参
5、数,物理参数（散射光信号）：FSC、SSC 荧光参数 FL1、FL2、FL3、FL4 FSC：反映细胞大小 SSC：反映细胞内颗粒性 FL1：FITC, Alexa Fluor 488 FL2: PE, PI, Cy3 FL3：Per-CP，PE-Cy5, Alexa Fluor 700 FL4：APC,仅用散射光信号可以对未染色的活细胞进行分析或分选，但不能分析表面分子。,外周血散点图,分出淋巴细胞,淋巴细胞,（细胞大小）,细胞内颗粒性,淋巴细胞亚群 （荧光）,CD3+细胞,CD4+CD8+细胞,荧光分子耦联抗体的原理,单色荧光标记,3.表面标志物测定的临床意义,3.1 T细胞表面标志物,L
6、ymphocyte subsets,T HELPER CELLS Activate B cells and macrophages,CYTOTOXIC T LYMPHOCYTE Kill virus Infected cells,1. 分群：,CD4+ 抑制细胞诱导亚群 TI（CD4+CD45RA+） 辅助细胞诱导亚群 Th（CD4+CD29+） CD3 杀伤T细胞亚群 Tc（CD8+CD28+） CD8+ 抑制T细胞亚群 Ts （CD8+CD28-）,1. 分群：,Th1: 分泌IL-2、 IFN-、TNF- Th2: 分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10,2. 功能,对ConA和同
7、种异 体抗原刺激有强烈 反应，但不产生记 忆应答。,不同阶段的 Ts 细胞产生,Th： CD4+CD29+,诱导细胞介导的淋 巴细胞溶解作用,Tc: CD8+CD28+,讨论： Tc与NK细胞的杀伤作用有何区别？,Ts： CD8+CD28-,4. 临床意义,CD3： （1）甲亢、淋巴细胞性甲状腺炎 （2）传染性单核细胞增多症 （3）急性淋巴细胞型白血病 （4）重症肌无力 （5） SLE活动期 （6）排斥反应,CD3 ： （1）原发性细胞免 疫缺陷病（如先天无 胸腺症） （2）某些恶性肿瘤 （3）流感、麻疹等 病毒感染 （4）多发性神经炎,I 免疫功能的判定：淋巴细胞亚群中的任何一项超出正常参考
8、区间，判定为免疫功能异常。,CD4 ：,恶性肿瘤 遗传性免疫缺陷症 艾滋病 应用免疫抑制剂者,CD4： ,类风湿性关节炎 重症肌无力 自身溶血性贫血 移植排斥反应,CD8： ,艾滋病,恶性肿瘤（肝癌、鼻咽癌）,传染性单核细胞增多症,SLE活动期,CD8： 变态反应性疾病,免疫功能可作为治疗效果的判定及预后肿瘤病人,治疗后免疫功能恢复正常的肿瘤病人，一般预 后较好，反之预后差。 鼻咽癌病人 接受常规治疗的肿瘤病人，若治疗引起了免疫 抑制，则这种病人的预后较差，缓解期的白血 病病人，其免疫功能突然下降，是白血病复发 的信号。,T细胞亚群（4项或8项）,CD3： 0.630.75 CD3CD4： 0
9、.300.45 CD3CD8： 0.210.32 NK： 0.09 0.18 CD4CD29： 0.200.32 CD4CD45RA： 0.0850.20 CD8CD28： 0.100.16 CD8CD28： 0.050.13,II 监测排斥反应,移植病人：使用免疫抑制剂 早期： CD3 、CD4 、CD8 维持期： 以上指标逐渐升高，但仍低于术 前水平。 稳定期： CD3 CD4 /CD8 (CD4 Ts) 排斥反应：CD4 Tc CD25 CD4/ CD8 ,III 探讨发病机制,1. SLE CD4 CD4/CD8 （多数） CD4CD45RA Ts B细胞 自身抗体 发病,2. RA
10、CD4 CD4/CD8 CD4+CD29+ 诱导B细胞产生抗体 自身抗体 发病, 白血病分型：,T-ALL,急性早期T前体细胞白血病,急性T细胞白血病,CD7 CD2 TDT,+ - -,+ + +,T淋巴细胞白血病分型,末端脱氧核苷酸转移酶(TdT),病 例 分 析,张某，男，30岁，因发烧38.5度，咳嗽咳痰入住沙河区人民医院。住院期间，采用抗生素治疗，体温忽高忽低，住院一周余病情未见好转，于是到南方医院中医门诊就医。测体温，39.5度，拍胸片诊断间质性肺炎，于是收入中医科。入院后，针对间质性肺炎治疗，体温降为正常，但很快又升高39.5度，反复多次。,你做为一名医生下一步该如何诊治？,艾滋
11、病,CD3： 或 CD4： (2-12%) CD8：(CD8+CD28-) NK ： ,讨论：HIV病毒主要侵犯人体的什么细胞，为什么？,为什么HIV感染的晚期CD8+T细胞也减少,CD8+T细胞有辅助受体CXCR4，HIV 与CXCR4结合但不会进入 细胞,从结合部位传 递的信号，导致大量 的CD8+/CXCR4+ T细胞 凋亡。,3.2. B细胞表面标志物,B细胞膜免疫球蛋白 (1)参考值 SmIg 16-28% SmIgG 4-13% SmIgM 7-13% SmIgA 1-4% SmIgD 5-8% SmIgE 0-1.5%,（2）临床意义 增高：常与B细胞恶性增殖有关 慢性淋巴细胞性
12、白血病 毛细胞性白血病 巨球蛋白血症等 减低：主要与体液免疫缺陷有关 原发性联丙种球蛋白缺乏症 免疫缺陷病等,1. 分群： B2(CD19+CD5-)：细胞即通常参与体液免 疫的B细胞； 1(CD19+CD5+)：B1细胞在发生、分布、 表型和功能等方面具有不同于B2细胞 的特点。,2. B 细胞分化抗原,2. B细胞表面特异性抗原：,CD10 CD19、CD20、CD22 CD10 表达于前B细胞 CD19：为全部B细胞所共有的表面标 志， B细胞活化后亦不消失； CD20：表达于早期B细胞和成熟B细胞阶 段，分化为浆细胞后，表达消失。 CD22：当B细胞活化时，表达增强，一 旦分化为浆细胞
13、则表达下降。,B-ALL T-ALL AML CD22 + - - CD10 + - - CD19 + - - CD3 - + - CD5 - + - CD7 - + -/+ CD13 - - + CD33 - - +,3临床意义：B细胞白血病分型,Fab CD33 CD34 HLA-DR CD13 CD14 CD15 CD11b M2 + + + - - M3 - + - + - - M4 + + + + + ,T淋巴细胞型白血病对化疗不敏感，常复发和预后差。 普通型B-ALL对化疗很敏感、预后良好。 早前B-ALL对化疗药物常发生耐药反应，预后较差。,讨论：白血病分型有何意义？,三、NK细胞,表面标志 CD3-/CD16+56 +,临床意义 （1）升高 常见于病毒 感染的早期，器官移植的患者，还可见于干扰素及干扰素诱导物等免疫增强剂治疗的患者。 （2）降低 常见于恶性肿瘤，艾滋病及免疫抑制剂使用者 （3）肿瘤疗效观察及预后评价,总 结,1. 细胞免疫检查（细胞免疫概念复习） 2. 细胞免疫测定方法 体内 体外（功能、 表面标志物） 3.表面标志物的测定方法-流式细胞术 4. 表面标志物测定的临床意义 （1）T淋巴细（2）B淋巴细胞（3） NK细胞,谢 谢 ！,
