1、技能点技能点27 27 鸡法氏囊高免鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定蛋卵黄抗体效价的测定技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定主要内容：主要内容：一、目的要求二、仪器及材料三、方法与步骤技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定一、目的要求一、目的要求 掌握传染性法氏囊病的卵黄抗体效价的测定方法和判定标准，明确此试验在生产中的应用。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定知识拓展知识拓展-传染性法氏囊病主要危害传染性法氏囊病主要危害法氏囊肿胀、出血、后期萎缩发病率可达100%，死亡率约20%30%技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定 卵黄抗体效价测定的意义 制备高免卵黄抗体
2、时需测定抗体效价，待卵黄琼扩反制备高免卵黄抗体时需测定抗体效价，待卵黄琼扩反应效价达应效价达1 128以上即可收蛋。以上即可收蛋。琼扩抗体效价应琼扩抗体效价应1 32，才具有良好的治疗及预防作，才具有良好的治疗及预防作用。用。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定 琼脂扩散试验 定性检测定性检测 定量检测定量检测 是以是以2的倍数稀释的倍数稀释技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定二、仪器材料二、仪器材料氯化钠、琼脂粉、培养皿、打孔器、酒精灯、高免卵黄抗体、96孔血凝板、微量移液器、烧杯、带盖瓷盘、注射器、生理盐水、蒸馏水、标准抗原等。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定三
3、、方法与步骤三、方法与步骤（一）1%琼脂平板制备（二）稀释卵黄（三）加样（四）反应（五）结果判定及结论技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定（一）（一）1%1%琼脂平板制备及打孔琼脂平板制备及打孔 1.制板 用用810%氯化钠溶液配制氯化钠溶液配制1%琼脂溶液，电炉加热使之琼脂溶液，电炉加热使之充分溶化后，倒入直径充分溶化后，倒入直径90 mm培养皿，制成厚度为培养皿，制成厚度为2.53mm琼脂平板；平置，在室温下冷却凝固后打孔。琼脂平板；平置，在室温下冷却凝固后打孔。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定2.打孔 在琼脂板上按在琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔（中间孔一组的梅花形打
4、孔（中间1孔，周围孔，周围6孔），孔径孔），孔径5mm，孔距孔距25mm，将孔内的琼脂用将孔内的琼脂用8号号针头斜面向上轻轻将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层针头斜面向上轻轻将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。一般打两组孔。脱离皿底。一般打两组孔。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定3.封底 用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂板底部刚刚要溶化（手用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂板底部刚刚要溶化（手背感觉微烫手）为止，封闭孔底部，以防侧漏。背感觉微烫手）为止，封闭孔底部，以防侧漏。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定4.编号 在平皿底用蜡笔编号，第一组编号在平皿底用蜡笔编号，第一组编号16，第
5、二组编号，第二组编号712。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定（二）卵黄稀释（二）卵黄稀释 用微量移液器在96孔血凝板加生理盐水，每孔50微升，共加112孔；再于第一孔加50微升卵黄，倍比稀释至12孔。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定（三）加样（三）加样 中央孔加入传染性法氏囊病病毒标准抗原，外周孔分别加稀释的卵黄，血凝板孔号与琼扩板孔号要一一对应，加样从低浓度开始加样，每加一个浓度，吸嘴尽量喷干净。加样量以“满而不溢”为原则。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定（四）反应（四）反应 加样完毕后，静置510min，然后将平皿轻轻倒置放入湿盒内，37温箱中扩散2448。技能点27 鸡法氏囊高免蛋卵黄抗体效价的测定（五）结果判定（五）结果判定 2448h后，出现白色沉淀线的卵黄液最大稀释倍数为抗体的琼扩效价。
