1、第六章第六章样品采集技术样品采集技术讨论主题:4SCAN采集方式的适用性4各种数据采集参数对数据的影响Scan 采集原理125010015020025030011109876Time minutesMass daltons质谱数据是三维的Time-Abundance4.765.775.886.436.807.074.505.005.506.006.507.007.50 0 2000000 4000000 6000000 8000000 1e+007 1.2e+007TIC:DRUGDEMO.D总离子色谱M/ZAbundance8216618230350100150200250 1000000S
2、can 32(5.281 min):ALKDEMO.DAbundance82182303 1000000Scan 33(5.289 min):ALKDEMO.DM/Z Abundance8216618230350100150200250 1000000Scan 34(5.297 min):ALKDEMO.DAbundance82166182303 1000000Scan 35(5.305 min):ALKDEMO.DTimeAbundance5.255.265.275.285.295.305.315.325.33 2000000 4000000 6000000 8000000TIC:ALKDE
3、MO.D32333435313630总离子色谱MASSTIMEMS 采集参数质量范围e.g.35-350A/D se.g.N=2or 4 samplesper 0.1 amu Scan high low,0.1 amu steps Signal averaging with 2 determinations per 0.1 amu data pointMASS质量峰检测影响扫描时间的因素:平均每 0.1 amu 增加 数据点的数目(sampling rate)扫描质量范围 离子检测的真实数目(scan threshold)每个色谱峰通过5-10次扫描可以很好地 定性定性!每个色谱峰通过10-2
4、0次扫描可以很好地 定量定量!MASSTIME程序时间回扫时间扫描时间扫描循环时间数字式扫描过程1E22E23E24E25E26E27E28E29E21E31E3ABUNDANCE150.0151.0152.0153.0154.0155.0M/Z1.1E3阈值321451234532145STORES:154.10,1137 用五个邻近的数据点平滑 确定中心质量(质量峰最大).质量中心的水平应超过质量阈值 数据文件同时储存质量和丰度质量峰检测(续)阈值过高82182M/Z相对强度相对强度82303182阈值设置适当阈值4MS 需考虑的事项扫描速度/循环时间4GC 需考虑的事项峰宽4Data 需
5、考虑的事项信号:噪声比率高斯峰形峰倾斜阈值讨论主题:选择离子检测（SIM）与扫描的区别SIM 采集参数如何影响数据SIM 方式如何进行数据采集选择离子检测的原则SIMSIM是什么是什么?只监视所选择信息的质荷比它如何做它如何做?控制质量分析器，仅仅对感兴趣的质量进行分析为什么做为什么做?提高灵敏度改善峰形改善精确度应用应用痕量分析复杂基质常规定量选择离子检测SIM 数据采集DwelltimeSIMmass 1SIMmass 2SIM 循环时间四极杆电压(amu)TIMESIMmass 3空中时间扫描数据采集扫描时间扫描循环时间空中时间四极杆电压(amu)TIMESIM 与SCAN比较4选择:离
6、子/组数目 每个离子驻留时间 以便获得良好的数据采集所需的循环/峰数目4目标:每个峰通过 15-25 次循环4每个离子驻留时间相同4运用时间规划(SIM Groups)使 采集/循环离子数目最少设置 SIM 采集该 SIM质谱图是 9-羧基 THC的离子以 0.1 amu 增加量.选择最大丰度的质量数做SIM采集动态质量校正9-CarboxyTHC TMS DerivativeMass to charge ratio in 0.1 amu increments020406080100120.7.8.9.0.1.2.3.4.5.7.8.9.0.1.2.3.4.5.7.8.9.0.1.2.3.4.
7、5.7.8.9.0.1.2.3.4.573.0488.3473.3371.2Normalized Abundance371.0473.0488.0动态质量校正在左图的三种可能性中选择最大丰度质量,不会导致 来源于调谐与调谐之间不正确比率的错误负峰COMPARISON OF EXACT AND INTEGER MASS RATIOS9-CarboxyTHC TMS Derivative peak ratiosAUTOTUNE HAS+/-0.1 amu VARIANCE OF MASS AXIS.9.0.1.1.2.3.2.3.4.2.3.4.9.0.1.9.0.1.9.0.1.9.0.1+-m
8、ass 0.1 amuInteger mass 0.1 amu+-+-ApexNormalized Abundancem/z-73.0371.2473.3488.373.0371.0473.0488.0选择精确质量和整数质量对照如果自动调谐质量轴为-0.1amu 离子比率将如何？左图为精确质量，右图为整数质量 二者化合物相同但测定结果不同9-CarboxyTHC TMS Derivative peak ratios.9.0.1.1.2.3.2.3.4.2.3.4.9.0.1.9.0.1.9.0.1.9.0.1mass-0.1 amuInteger mass 0.1 amu-ApexNormal
9、ized Abundancem/z-72.9371.1473.2488.272.9370.9472.9487.91001002040608020406080-9-羧基 THC TMS 衍生物峰比率4可以监视 30 离子/组,50 组/采集4使用最小数目的 离子/组 以获得最大灵敏度和精度4选择最有特征的离子高质量丰度化合物特有的4可以选择化合物的特征离子以达到分类目的选择 SIM 离子PEAK#1:质谱图质量数丰度表20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160050000100000150000200000250000300000350
10、000400000450000500000550000600000650000700000750000m/z-Abundance28394451 6375768998102115125128139151154联苯%abund.m/z%abund.m/z50.12127.1251.13128.2363.13139.1264.13150.2274.02151.2875.12152.12676.112153.14077.15154.1100115.14155.113126.13PEAK#2:质谱图质量数丰度表20406080100 120 140 160 180 200050000100000150
11、000200000250000300000350000400000450000m/z-Abundance2628395163768794101113126136149152162177188191氯联苯m/z%abund.m/z50.12149.151.12150.163.15151.274.13152.175.15153.176.114154.194.14188.2101.12189.1126.13190.2127.13191.1选择 离子 SIM-Course ProblemRF 电压DC 电压扫描线选择153151152高-维持质量峰宽 为 0.5 amu低(默认值)-质量峰宽增大到 0
12、.9 amu选择“LOW”可增加灵敏度低分辨方式不适合于质量差别低分辨方式不适合于质量差别 3 3 amuamu的化合物测定的化合物测定(如：如：同位素标记内标同位素标记内标)低或高质量分辨本章将学到 如何输入 GC 参数 如何输入 MS(scan)参数 如何输入 MS(SIM)如何输入 如何设置系统监控数据采集设置 method 是为仪器和计算机设定的采集和处理数据的一个完整指示数据采集采集方式调谐文件MS 质谱应用参数GC 质谱应用参数 进样口参数Methods Methods 在在 HPCHEMnMethodsHPCHEMnMethods 子目录下子目录下 由由“.“.m”m”扩展名识别
13、扩展名识别.数据文件在数据文件在 HPCHEMnDATA HPCHEMnDATA 子目录下子目录下 由由 “.“.d”d”扩展名识别扩展名识别.n n represents instrument numberrepresents instrument number什么是方法?所有仪器控制由这一窗口进行 当前方法显示于栏目中Views-仪器控制 输入所有流量和压力参数(选用恒流方式、MSD及Vacuum色谱柱安装柱子点击点击输入柱子编号，点击OK 按Add 出现这一目录“Install”安装 校正 所安装的柱子更换柱子 从目录中选择柱子 在目录中增加柱子 从目录中删除柱子更换柱子(添加新柱子于目
14、录中)选择柱子以安装 从目录中删除柱子更换柱子(“install”)使用其他厂家柱子填写相关信息，点击OK校正柱长步骤1首先用1微升空气进样，记录其保留时间。点击 change/calibrate步骤2输入空气峰的真实保留时间步骤3步骤4步骤5选择进样方式 选择进样源(GC or other)选择进样方式(手动,ALS,或阀)如果手动，需选择进样口 如果选用MS采集样品，选择 Use MS.如果只用GC，则不选此项进样口和注射器信息 选择方法的某部分进行编辑 方法/编辑完整方法编辑方法 填入关于方法的说明 选择acquisitions 和 analysis方法信息 设置进样量和注射器清洗程序
15、按键 Configure.设置注射器大小 按键 More.设置注射速度注射器控制黏度：最后一次泵起至进样的时间有效值0-7样品深度：0.00表示针尖与标准瓶底距离3.6mm有效值-230.0进样前注射器在进样口停留时间,有效值0.00-1.00进样后注射器在进样口停留时间,有效值0.00-1.00进针速度 首先配置阀(如果使用)使用 RunTime 对话框，确定运行过程中阀事件的时间表阀控制 阀在 OPEN 位置 超量液体从分流口排出FSPSSPR流量限制器比例阀 1流量 控制回路阱流量传感器隔垫螺母 压力传感器隔垫吹扫 调整柱头压控制回路隔垫吹扫出口分流出口比例 阀 2吹扫阀(开)分流进样方
16、式 阀处于 CLOSED 位置 除隔垫吹扫外，全部流量进入柱子FSPSSPR流量限制器比例阀 1阱流量传感器隔垫螺母压力传感器隔垫吹扫调整隔垫吹扫出口分流出口比例 阀 2Purge 阀(关)进样口压力控制回路不分流进样方式 选择 Split 输入全部设定值进样口-分流进样 选择 Splitless 输入全部设定值进样口-不分流进样 选择 Pulsed Splitless 输入全部设定值进样口-脉冲不分流进样 选择 Pulsed Split 输入全部设定值进样口-脉冲分流进样 柱流量和压力按时间编程程序变流进样 输入炉温设定值炉温 输入 GC 检测器温度设定值(如果有GC检测器)检测器 保存 G
17、C 检测器数据(如果有GC检测器)监控温度 监视流量或压力信号 输入辅助部件（MS接口）温度 输入辅助部件压力辅助部件 运行期间可自动运行25个时间表运行时间表 为方法定义压力单位 锁住 HP6890 键盘 GC 检测器柱补偿(如果有GC检测器)选项 从仪器控制面板监视信号时观察或移动GC检测器保留时间（如果有GC检测器）GC 保留时间绘图 选择用于MS采集的调谐文件MS 调谐文件 选择采集方式 输入扫描参数MS SIM/Scan 参数(扫描方式)选择采集方式 输入 SIM 参数MS SIM/Scan 参数(SIM 方式)检测器 on/off时间程序 倍增器电压随时间变化程序 阀时间程序MS SIM/Scan 参数(时间事件)更改EM电压溶剂延迟采集方式编辑采集参数离子源与四极杆温度编辑时间事件表5973N MS采集参数（SCAN）扫描范围阈值与采样点数 输入新方法名称保存方法 用于监视 MS 源压力,阀 和 MS 温度范围.MS 监控 适用于远距离控制监控警告器 选择 Method/Run 样品瓶标识采集数据 从 Instrument Control 窗口,选择 Window/Total Ion保留时间显示
