第九章临床常见病原体检测课件.ppt

1、1第九章第九章 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2概概 述述 感染性疾病感染性疾病 凡由病原生物包括细菌、真菌、凡由病原生物包括细菌、真菌、病病毒、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体毒、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体或寄生虫侵入人体所致的疾病，统称为感或寄生虫侵入人体所致的疾病，统称为感染性疾病。染性疾病。3感染性疾病感染性疾病4临床病原体检查目的临床病原体检查目的 确定感染的发生和性质。确定感染的发生和性质。在疾病早期提供恰当的治疗方案，并采取有效的预在疾病早期提供恰当的治疗方案，并采取有效的预 防措施。防措施。防止感染传播所造成的危害。防止感染传播所造成的危害。病原体检查重要性：明确临

2、床诊断病原体检查重要性：明确临床诊断 指导临床用药指导临床用药5临床病原体检查的基本程序临床病原体检查的基本程序 医生、护士、病人、检验师：医生、护士、病人、检验师：正确规范采集运送标本正确规范采集运送标本。检验科：直接镜检、免疫学、分子生物检测、病原体检验科：直接镜检、免疫学、分子生物检测、病原体 分离培养鉴定和药敏实验分离培养鉴定和药敏实验报告结果。报告结果。医生：明确诊断、合理用药。医生：明确诊断、合理用药。6第一节第一节 标本的采集运送、实验室评价标本的采集运送、实验室评价和检查方法和检查方法7一、标本采集和运送无菌操作无菌操作采集时采集时间、部间、部位位根据标本中根据标本中细菌的特点

3、细菌的特点及时送检及时送检生物安全生物安全8检验申请单的基本内容检验申请单的基本内容 The patient,s name and hospital number.Age and sex.Collection date and time.Diagnosis.Source of the specimen.Ordering physician.Immunization history and antimicrobial therapy.Objective.9（一）血液标本的采集（一）血液标本的采集 适应症适应症 采集时机采集时机 皮肤准备皮肤准备 培养瓶消毒培养瓶消毒 采血量采血量 采血套数采血套

4、数 振摇振摇 室温送检室温送检10（二）尿标本的采集（二）尿标本的采集晨起第一次尿液为佳晨起第一次尿液为佳冲洗外阴部、尿道口冲洗外阴部、尿道口清洁中段尿清洁中段尿导尿导尿耻骨穿刺采集膀胱内尿液耻骨穿刺采集膀胱内尿液不得加防腐剂和消毒剂不得加防腐剂和消毒剂11（三）粪便标本的采集（三）粪便标本的采集 自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。排便困难者，采用直肠拭子采集。排便困难者，采用直肠拭子采集。根据细菌种类不同选用合适的运送培养液以提高阳性检根据细菌种类不同选用合适的运送培养液以提高阳性检出率。出率。传染性腹泻应连续送检传染性腹泻应连续

5、送检3 3次。次。12(四四)呼吸道标本的采集呼吸道标本的采集13痰标本的采集痰标本的采集 采集时间：晨痰，且在取痰采集时间：晨痰，且在取痰 前用清水反复漱口。前用清水反复漱口。方法：方法：（1 1）自然咳痰法：（）自然咳痰法：（2 2）气）气 管镜下采集法；（管镜下采集法；（3 3）气管）气管 穿刺法。穿刺法。14要求：要求：1010个鳞状上皮细胞个鳞状上皮细胞/低倍低倍 2525个个WBC/WBC/低倍低倍15（五）脑脊液与其他无菌体液标本（五）脑脊液与其他无菌体液标本 无菌注射器穿刺采集，置于无菌容器中立即送检。无菌注射器穿刺采集，置于无菌容器中立即送检。脑脊液标本应立即保温送检，不能暂

6、时保存于冰箱中。脑脊液标本应立即保温送检，不能暂时保存于冰箱中。第一管用于微生物学检查。第一管用于微生物学检查。胸腹水等体液标本应抽取胸腹水等体液标本应抽取2-5ml2-5ml送检。送检。16（六）泌尿生殖道标本的采集（六）泌尿生殖道标本的采集 常取生殖道分泌物常取生殖道分泌物 男性：无菌采集尿道口分泌物或前列腺液。男性：无菌采集尿道口分泌物或前列腺液。女性：用无菌棉签采集阴道或宫颈分泌物。女性：用无菌棉签采集阴道或宫颈分泌物。生殖道疱疹常穿刺取疱疹液生殖道疱疹常穿刺取疱疹液17（七）脓液及创伤感染分泌物标本（七）脓液及创伤感染分泌物标本开放性脓肿及脓性分泌物开放性脓肿及脓性分泌物封闭性脓肿封

7、闭性脓肿大面积烧伤的创面分泌物大面积烧伤的创面分泌物18脓液及创伤感染分泌物标本 开放性脓肿及脓性分泌物：直接涂片染色镜检 用NS冲洗表面两支无菌棉拭取脓液或深部分泌物 分离培养 封闭性脓肿：灭菌试管 一般细菌培养 消毒皮肤粘膜注射器无菌抽取脓液 厌氧送检供厌氧菌培养 大面积烧伤的创面分泌物：无菌棉拭取多部位创面脓汁分泌物无菌试管送检。19二、标本的实验室质量评估标准二、标本的实验室质量评估标准无标签的标本或标签信息与申请单信息不一致；无标签的标本或标签信息与申请单信息不一致；送检日期延误的标本；送检日期延误的标本；容器有破损或渗漏等；容器有破损或渗漏等；标本储存、运送方式不当；标本储存、运送

8、方式不当；明显污染标本；明显污染标本；量明显不足标本；量明显不足标本；重复送检标本（血培养除外）重复送检标本（血培养除外）烈性传染病标本的采集和运送不符合相关规定烈性传染病标本的采集和运送不符合相关规定拒拒 收收20三、检查方法三、检查方法 直接显微镜检查。直接显微镜检查。病原体抗原与抗体的检测。病原体抗原与抗体的检测。病原体核酸的检测。病原体核酸的检测。病原体的分离培养与鉴定。病原体的分离培养与鉴定。21（一）（一）直接显微镜检查直接显微镜检查 不染色标本检查法：悬滴法和压滴法不染色标本检查法：悬滴法和压滴法 染色标本检查法：染色标本检查法：革兰染色：细菌、真菌革兰染色：细菌、真菌 抗酸染色

9、：抗酸杆菌（结核、麻风）抗酸染色：抗酸杆菌（结核、麻风）墨汁染色：隐球菌墨汁染色：隐球菌2223直接显微镜检查的优缺点直接显微镜检查的优缺点 优点：快速诊断或初步诊断。优点：快速诊断或初步诊断。缺点：不能准确鉴定细菌真菌的属和种；未进行药缺点：不能准确鉴定细菌真菌的属和种；未进行药 敏试验，不能准确指导临床抗生素治疗。敏试验，不能准确指导临床抗生素治疗。24（二）病原体抗原检查（二）病原体抗原检查 方法：免疫荧光、酶免、化学发光等。方法：免疫荧光、酶免、化学发光等。排除交叉抗原的影响，病原体抗原检测可明确感染的病原体排除交叉抗原的影响，病原体抗原检测可明确感染的病原体HIVHIV抗原检测实验原

10、理示意图抗原检测实验原理示意图25（三）血清学实验（三）血清学实验 特异性特异性 IgMIgM可作为感染性疾病可作为感染性疾病 早期早期诊断指标，且可区分原诊断指标，且可区分原 发与复发感染。发与复发感染。特异性特异性 IgGIgG，尤其双份血清的，尤其双份血清的 滴度呈滴度呈4 4倍或倍或4 4倍以上升高，考倍以上升高，考 虑病原体感染。虑病原体感染。26（四）病原体核酸的检测（四）病原体核酸的检测聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCRPCR）：扩增）：扩增 病原体微生物特异的病原体微生物特异的DNADNA或或RNARNA 片段。片段。探针杂交法：通过已知序列的探针杂交法：通过已知序列的 探针与

11、病原体的核苷酸杂交，探针与病原体的核苷酸杂交，用以了解病原体的有无。用以了解病原体的有无。主要适用于不能或很难分离培主要适用于不能或很难分离培 养的微生物。养的微生物。27（五）病原体的分离培养与鉴定（五）病原体的分离培养与鉴定 目的：目的：明确感染病原体。明确感染病原体。为临床提供体外抗微生物药物敏感试验结果为临床提供体外抗微生物药物敏感试验结果。28细菌、真菌：选择合适的培养基与培养方法、观察细菌、真菌：选择合适的培养基与培养方法、观察 菌落性状、生化鉴定、血清学实验。菌落性状、生化鉴定、血清学实验。病毒、立克次体、衣原体：接种鸡胚、易感动物或病毒、立克次体、衣原体：接种鸡胚、易感动物或

12、进行细胞培养，观察增殖指标和血清学方法鉴定。进行细胞培养，观察增殖指标和血清学方法鉴定。2930病实毒验感室染诊性断疾 病 的 31细菌分离培养与鉴定的结果评价培养阴性培养阴性培养阳性培养阳性无菌部位标本无菌部位标本致病菌致病菌存在正常菌群标本存在正常菌群标本结合细菌的量考虑结合细菌的量考虑临床表现支持感染临床表现支持感染标本不合格标本不合格培养不恰当培养不恰当等等镜检找到病原体镜检找到病原体L L细菌细菌 厌氧菌厌氧菌苛养菌苛养菌32第二节第二节 病原体耐药性检测病原体耐药性检测33抗生素耐受的起点：盘尼西林抗生素耐受的起点：盘尼西林年年 弗莱明弗莱明 Fleming年年弗洛里弗洛里 Flo

13、rey&钱恩钱恩 Chain34耐药性的历史1941 1941 青霉素青霉素 1960 1960 甲氧苯青霉素甲氧苯青霉素1943 1943 链霉素链霉素 1962 1962 林可霉素林可霉素1945 1945 头孢菌素头孢菌素 1962 1962 喹诺酮类喹诺酮类1950 1950 四环素四环素 1970 1970 青霉烯类青霉烯类 1952 1952 红霉素红霉素 1980 1980 单环单环-内酰胺类内酰胺类 1956 1956 万古霉素万古霉素 2010 2010 抗生素时代的终结？抗生素时代的终结？35 可以预测药物在病人体内的效果，指导临床合理选择可以预测药物在病人体内的效果，指导

14、临床合理选择 抗生素；抗生素；了解本地区或本医院内常见病原菌的种类及耐药性，了解本地区或本医院内常见病原菌的种类及耐药性，有助于临床经验性治疗时合理选药。有助于临床经验性治疗时合理选药。定期对病原菌种类和耐药谱分析，有助于发现医院感定期对病原菌种类和耐药谱分析，有助于发现医院感 染暴发或流行。染暴发或流行。细菌药敏检测的意义细菌药敏检测的意义36 定义：对某种抗菌药物敏感的细菌变成对该药物耐受称定义：对某种抗菌药物敏感的细菌变成对该药物耐受称 细菌耐药性。细菌耐药性。类型：类型：天然耐药：是通过染色体天然耐药：是通过染色体DNADNA突变所致。突变所致。获得性耐药：是由质粒介导、转位因子的插入

15、以及其他遗获得性耐药：是由质粒介导、转位因子的插入以及其他遗 传物质携带外来传物质携带外来DNADNA片段导致产生的耐药性。片段导致产生的耐药性。细菌耐药性细菌耐药性37 细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统；细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统；产生灭活抗生素的水解酶和钝化酶；产生灭活抗生素的水解酶和钝化酶；细菌抗生素作用靶位改变；细菌抗生素作用靶位改变；细菌膜外排泵出系统；细菌膜外排泵出系统；细菌生物膜的形成。细菌生物膜的形成。细菌产生耐药的常见机制细菌产生耐药的常见机制3839 K-B K-B纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法 稀释法：稀释法：E E试验试验MIC MIC（最低抑菌浓度）（

16、最低抑菌浓度）药敏检测的方法药敏检测的方法40药敏实验结果的解释根据美国临床实验室标准化委员会（根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLSNCCLS）标准判断：）标准判断：敏感敏感（susceptiblesusceptible，S):S):表示推荐使用该抗生素进行临床表示推荐使用该抗生素进行临床治疗。治疗。耐药耐药(resistant(resistant，R):R):指常规用药剂量不能达到指常规用药剂量不能达到MICMIC，临床，临床治疗不可靠。治疗不可靠。中介中介(intermediate(intermediate，I):I):表示药物表示药物MICMIC接近体液或组织可接近体液或组织可达到

17、药物浓度，但反应低于敏感株；但在一些浓集部位（如达到药物浓度，但反应低于敏感株；但在一些浓集部位（如尿液中的喹诺酮类）或者使用高于正常给药量时临床上使用尿液中的喹诺酮类）或者使用高于正常给药量时临床上使用有疗效。有疗效。41（1 1）耐甲氧西林葡萄球菌（）耐甲氧西林葡萄球菌（MRSMRS）（2 2）产超广谱）产超广谱-内酰胺酶内酰胺酶(ESBL)(ESBL)（3 3）氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌（）氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌（HLARHLAR）（4 4）耐万古霉素肠球菌（）耐万古霉素肠球菌（VREVRE）特殊耐药菌检测的临床意义特殊耐药菌检测的临床意义42（1 1）耐甲氧西林葡萄球菌（）耐甲

18、氧西林葡萄球菌（MRSMRS）MRSA+MRCNSMRSA+MRCNS NCCLSNCCLS规定：规定：MRSMRS对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑体外类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑体外药敏结果，治疗首选药物为万古霉素。药敏结果，治疗首选药物为万古霉素。特殊耐药菌检测的临床意义特殊耐药菌检测的临床意义4344（2 2）产超广谱）产超广谱-内酰胺酶内酰胺酶(ESBL)(ESBL)：该酶水解青霉素、头孢菌素及单胺类，主要由大肠埃该酶水解青霉素、头孢菌素及单胺类，主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌

19、产生。希菌和肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌产生。NCCLSNCCLS规定：产规定：产ESBLESBL细菌细菌,不论体外药物敏感试验结果不论体外药物敏感试验结果如何如何,对青霉素类、头孢菌素类和氨曲南治疗均无效，建对青霉素类、头孢菌素类和氨曲南治疗均无效，建议用碳青酶烯类抗生素。议用碳青酶烯类抗生素。特殊耐药菌检测的临床意义特殊耐药菌检测的临床意义4546（3 3）氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌（）氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌（HLARHLAR）NCCLSNCCLS规定规定:HLAR:HLAR指对高浓度庆大霉素或链霉素耐药，指对高浓度庆大霉素或链霉素耐药，提示与细胞壁活性药物无协同作用。提示与细胞壁活

20、性药物无协同作用。特殊耐药菌检测的临床意义特殊耐药菌检测的临床意义4748（4 4）耐万古霉素肠球菌（）耐万古霉素肠球菌（VREVRE）VREVRE临床上可用药物很有限，可以对氯霉素（或强临床上可用药物很有限，可以对氯霉素（或强力霉素、二甲胺四环素）和利福平做药敏实验。但是对力霉素、二甲胺四环素）和利福平做药敏实验。但是对青霉素敏感的青霉素敏感的VREVRE可用青霉素和庆大霉素联合治疗；若可用青霉素和庆大霉素联合治疗；若对青霉素耐药而不是对青霉素耐药而不是HLARHLAR可以用壁霉素可以用壁霉素+庆大霉素。庆大霉素。特殊耐药菌检测的临床意义特殊耐药菌检测的临床意义49第三节第三节 临床感染常见

21、的病原体检查临床感染常见的病原体检查50细菌感染检查项目的选择细菌感染检查项目的选择普通细菌：常采用直接镜检、分离培养与鉴定明确病原体。普通细菌：常采用直接镜检、分离培养与鉴定明确病原体。难培养或培养要求高的细菌：综合运用免疫学或分子生物难培养或培养要求高的细菌：综合运用免疫学或分子生物 学检测，如结核分枝杆菌感染以及幽门螺杆菌感染等。学检测，如结核分枝杆菌感染以及幽门螺杆菌感染等。流行病学调查：病原体抗体检测，如流行病学调查：病原体抗体检测，如ASOASO试验与试验与WidalWidal反应等。反应等。51病毒感染检查项目的选择病毒感染检查项目的选择细胞培养快速复制的病毒：细胞培养。细胞培养

22、快速复制的病毒：细胞培养。细胞培养不能快速复制的病毒：目前多检测病毒抗原、细胞培养不能快速复制的病毒：目前多检测病毒抗原、特异性抗体或核酸，如特异性抗体或核酸，如CMVCMV。不能细胞培养的病毒：病毒核酸检测与病毒特异性抗不能细胞培养的病毒：病毒核酸检测与病毒特异性抗 体检测，如体检测，如HCVHCV、HPVHPV等。等。52真菌感染检查项目的选择与应用评价真菌感染检查项目的选择与应用评价直接显微镜检查：初步明确真菌感染直接显微镜检查：初步明确真菌感染分离培养：明确何种真菌感染分离培养：明确何种真菌感染真菌抗原检测：只适合于血清与脑脊真菌抗原检测：只适合于血清与脑脊液中隐球菌、念珠菌以及荚膜组

23、织胞液中隐球菌、念珠菌以及荚膜组织胞浆菌等浆菌等 真菌抗体检测：深部真菌的检测真菌抗体检测：深部真菌的检测53寄生虫感染检查项目的选择与应用评价寄生虫感染检查项目的选择与应用评价直接显微镜检查：观察寄生虫直接显微镜检查：观察寄生虫生活史的各阶段，是寄生虫感生活史的各阶段，是寄生虫感染的主要诊断依据。染的主要诊断依据。寄生虫抗体检测：辅助诊断。寄生虫抗体检测：辅助诊断。54支原体感染检查项目的选择与应用支原体感染检查项目的选择与应用 直接显微镜检查：无价值。直接显微镜检查：无价值。分离培养：阳性可明确诊断。分离培养：阳性可明确诊断。目前临床多检测支原体抗原目前临床多检测支原体抗原 与核酸，用于早

24、期快速诊断。与核酸，用于早期快速诊断。55衣原体感染检查项目的选择与应用衣原体感染检查项目的选择与应用 直接显微镜检查：检查衣原体直接显微镜检查：检查衣原体 包涵体可提供早期初步诊断。包涵体可提供早期初步诊断。分离培养：阳性可明确诊断。分离培养：阳性可明确诊断。目前临床多检测衣原体抗原与目前临床多检测衣原体抗原与 核酸，用于早期快速诊断。核酸，用于早期快速诊断。56螺旋体感染检查项目的选择与应用螺旋体感染检查项目的选择与应用 直接显微镜检查有初步诊断价值。直接显微镜检查有初步诊断价值。特异性抗体的检测为确诊依据。特异性抗体的检测为确诊依据。57第四节第四节 病毒性肝炎检测病毒性肝炎检测58肝炎

25、病毒标志物检测肝炎病毒标志物检测甲型肝炎病毒（甲型肝炎病毒（HAVHAV）乙型肝炎病毒（乙型肝炎病毒（HBVHBV）丙型肝炎病毒（丙型肝炎病毒（HCVHCV）丁型肝炎病毒（丁型肝炎病毒（HDVHDV）戊型肝炎病毒（戊型肝炎病毒（HEVHEV）庚型肝炎病毒（庚型肝炎病毒（HGVHGV）输血传播病毒（输血传播病毒（TTVTTV）59 1.1.抗抗-HAV IgM-HAV IgM型型AbAb阳性：可诊断为急性甲型肝炎。阳性：可诊断为急性甲型肝炎。2.2.抗抗-HAV IgG-HAV IgG型型AbAb阳性：表示过去曾受过阳性：表示过去曾受过HAVHAV感染，感染，但体内已无但体内已无HAVHAV，是

26、一种，是一种保护性抗体保护性抗体，可用于甲，可用于甲 肝的流行病学调查。肝的流行病学调查。（对（对HAVHAV的检测还有的检测还有HAV-RNAHAV-RNA，其诊断特异性高，其诊断特异性高，特别是对早期诊断意义更大。）特别是对早期诊断意义更大。）一一、HAV抗体检测抗体检测 60二、二、HBV血清标志物检测血清标志物检测 HBV HBV 特点：又称特点：又称DaneDane颗粒，嗜肝颗粒，嗜肝性性DNADNA病毒，分为包膜与核心两部病毒，分为包膜与核心两部分：包膜上的蛋白质即分：包膜上的蛋白质即HBsAgHBsAg；核；核心部分含双链心部分含双链DNADNA、DNADNA聚合酶聚合酶（DNA

27、PDNAP）、核心抗原（）、核心抗原（HBcAgHBcAg）和）和e e抗原（抗原（HBeAgHBeAg），是病毒复制的），是病毒复制的主体。主体。611 1、乙肝两对半检测、乙肝两对半检测（1 1）HBsAg:HBsAg:表面抗原表面抗原为为HBVHBV的主要外壳蛋白，包括前的主要外壳蛋白，包括前S1S1、前、前S2S2和和S S蛋白，蛋白，具有抗原性，具有抗原性，HBsAgHBsAg阳性表示存在阳性表示存在HBVHBV的现症感染，的现症感染，为为HBVHBV感染最早证据感染最早证据。HBsAgHBsAg阳性见于急性乙肝潜伏期；发病后阳性见于急性乙肝潜伏期；发病后3 3个月不转个月不转阴，则

28、易发展成慢性乙型肝炎或肝硬化。携带者阴，则易发展成慢性乙型肝炎或肝硬化。携带者HBsAgHBsAg也呈阳性。也呈阳性。HBsAgHBsAg本身不具有传染性，但因其本身不具有传染性，但因其常与常与HBVHBV同时存在，常作为传染性标志之一。同时存在，常作为传染性标志之一。62（2 2）抗）抗-HBs-HBs：表面抗体：表面抗体抗抗-HBs-HBs是是一种保护性一种保护性AbAb（中和性抗体，能中和（中和性抗体，能中和HBsAg HBsAg），），抗抗-HBs-HBs阳性提示机体有一定免疫力。一般在感染后阳性提示机体有一定免疫力。一般在感染后3-63-6个个月才出现，可持续多年。注射过乙型肝炎疫苗

29、或抗月才出现，可持续多年。注射过乙型肝炎疫苗或抗-HBs-HBs免免疫球蛋白者，抗疫球蛋白者，抗-HBs-HBs可呈现阳性反应。可呈现阳性反应。63（3 3）HBeAgHBeAg：e e抗原抗原 HBeAgHBeAg阳性是阳性是HBVHBV复制的标志复制的标志，表明乙型肝炎处，表明乙型肝炎处 于活动期，提示于活动期，提示HBVHBV在体内复制，传染性较强；在体内复制，传染性较强；HBeAgHBeAg持续阳性，表明肝细胞损害较重，且可转持续阳性，表明肝细胞损害较重，且可转 为慢性乙型肝炎或肝硬化。如转为阴性，表示病为慢性乙型肝炎或肝硬化。如转为阴性，表示病 毒停止复制毒停止复制 。64（4 4）

30、抗）抗-HBe-HBe：e e抗体抗体 乙肝急性期即出现，抗乙肝急性期即出现，抗-HBe-HBe阳性者易进展为慢性乙阳性者易进展为慢性乙 型肝炎；慢性活动性肝炎出现阳性者可进展为肝硬型肝炎；慢性活动性肝炎出现阳性者可进展为肝硬 化；抗化；抗-HBe-HBe阳性表示大部分乙肝病毒被消除，复制阳性表示大部分乙肝病毒被消除，复制 减少，传染性减弱，但并非无传染性，减少，传染性减弱，但并非无传染性，HBeAbHBeAb不是保不是保 护性抗体护性抗体（不能抑制（不能抑制HBVHBV增殖）。增殖）。65（5 5）抗）抗-HBc-HBc：核心抗体：核心抗体 抗抗-HBc-HBc 是是HBVHBV感染后最早出

31、现的抗体，效价高，持续时间感染后最早出现的抗体，效价高，持续时间 长，是长，是HBVHBV感染的标志感染的标志；有；有IgGIgG和和IgMIgM两种两种:抗抗-HBc-HBc总抗体：抗总抗体：抗-HBc-HBc总抗体主要反映的是抗总抗体主要反映的是抗 -HBc IgG-HBc IgG，其检出率比，其检出率比HBsAgHBsAg更敏感，可作为更敏感，可作为 HBsAgHBsAg阴性的阴性的HBVHBV感染的敏感指标；也可用作乙感染的敏感指标；也可用作乙 型肝炎疫苗和血液制品的安全性鉴定和献血员型肝炎疫苗和血液制品的安全性鉴定和献血员 的筛选。的筛选。抗抗-HBc IgG-HBc IgG对机体无

32、保护作用对机体无保护作用，其阳，其阳 性可持续数十年甚至终身。性可持续数十年甚至终身。66（6 6）HBcAgHBcAg：核心抗原：核心抗原 HBcAgHBcAg位于位于DaneDane颗粒的核心部位，被颗粒的核心部位，被HBsAgHBsAg 包裹，包裹，血中一般无游离的血中一般无游离的HBcAgHBcAg；如果患；如果患 者者HBcAgHBcAg阳性，提示病人血清中有感染性的阳性，提示病人血清中有感染性的 HBVHBV存在，其含量较多，表示复制活跃，传存在，其含量较多，表示复制活跃，传 染性强，预后较差。染性强，预后较差。67HBVHBV五项血清标志物联合检测的临床意义五项血清标志物联合检测

33、的临床意义 HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-HBe 抗抗-HBc 临床意义临床意义 +-+-+急性或慢性乙型肝炎，高传染性急性或慢性乙型肝炎，高传染性 +-+急、慢性乙肝或慢性急、慢性乙肝或慢性HBsAg携带者携带者 +-+急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱弱 传传 染性染性 -+-+急性急性HBV感染康复期或有既往感感染康复期或有既往感 染染 史，目前保持免疫力史，目前保持免疫力 -+乙肝恢复期，弱传染性乙肝恢复期，弱传染性 -+急性急性HBV感染感染“窗口期窗口期”或既往或既往 感染过乙肝，有流行病学意义感染过乙肝，有流行病学意义 -+-疫苗接种后或疫苗

34、接种后或HBV感染后康复感染后康复 -+-+急性乙肝康复期，开始产生免疫力急性乙肝康复期，开始产生免疫力 -非乙肝感染非乙肝感染682 2、HBV-DNAHBV-DNA定性和定量测定定性和定量测定 血清中血清中HBV-DNAHBV-DNA的存在是的存在是HBVHBV感染最直接，最灵感染最直接，最灵 敏和最特异的检测指标。敏和最特异的检测指标。HBV-DNAHBV-DNA检测是评价检测是评价HBVHBV传染性的最可靠方法。传染性的最可靠方法。HBV-DNAHBV-DNA检测结果与血清免疫学结果应综合评价。检测结果与血清免疫学结果应综合评价。HBV-DNAHBV-DNA检测可用于抗病毒药物治疗乙肝

35、的疗效评价。检测可用于抗病毒药物治疗乙肝的疗效评价。筛查献血员，防止乙肝病毒输血后感染。筛查献血员，防止乙肝病毒输血后感染。监测血制品的传染性、乙肝疫苗的安全性。监测血制品的传染性、乙肝疫苗的安全性。69三、三、HCVHCV标志物检测标志物检测 1 1、HCVHCV抗体测定抗体测定 抗抗-HCV-HCV为为保护性保护性AbAb,阳性是诊断阳性是诊断HCVHCV感染的重要依据。感染的重要依据。抗抗-HCV IgM-HCV IgM 阳性：阳性：常见于急性常见于急性HCVHCV感染，是诊断丙肝的早期敏感指标；感染，是诊断丙肝的早期敏感指标；是是HCVHCV活动的指标。活动的指标。在慢性在慢性HCVH

36、CV感染时，若抗感染时，若抗-HCVIgM-HCVIgM 阳性，只表示病变阳性，只表示病变 活动，常伴有活动，常伴有ALTALT升高；是判断升高；是判断HCVHCV传染性的指标。传染性的指标。抗抗-HCV IgG-HCV IgG 出现晚于抗出现晚于抗-HCV IgM-HCV IgM，阳性表明体内阳性表明体内 有有HCVHCV感染，但不能作为感染，但不能作为HCVHCV感染的早期诊断指标。感染的早期诊断指标。702 2、HCV-RNAHCV-RNA检测检测HCV-RNA(+)HCV-RNA(+)是是HCVHCV感染最直接、最灵敏和最特异的检测指标。感染最直接、最灵敏和最特异的检测指标。HCV-R

37、NA(+)HCV-RNA(+)，提示活动性感染；，提示活动性感染；HCV-RNA(-)HCV-RNA(-)、抗、抗-HCV IgG-HCV IgG（+）：提示既往感染可能性大。）：提示既往感染可能性大。HCV-RNAHCV-RNA定量检测可用于病情判断、病情预测、监测干扰素定量检测可用于病情判断、病情预测、监测干扰素等药物的疗效、检测血制品的安全性；等药物的疗效、检测血制品的安全性；HCV-RNAHCV-RNA可用于研究丙肝发病机理和传播途径可用于研究丙肝发病机理和传播途径。71第五节第五节 性传播疾病病原体检测性传播疾病病原体检测性传播性疾病（性传播性疾病（sexually transmit

38、ted disease,STDsexually transmitted disease,STD）：）：是指通过各种性接触而传播的侵犯皮肤、性器官及是指通过各种性接触而传播的侵犯皮肤、性器官及全身多脏器的疾病，简称性病（全身多脏器的疾病，简称性病（venereal diseasevenereal disease）。）。72重要的性病及病原体重要的性病及病原体 性性 病病 病病 原原 体体 淋病淋病 淋球菌淋球菌 梅毒梅毒 梅毒螺旋体梅毒螺旋体 艾滋病艾滋病 人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒 非淋球菌尿道炎非淋球菌尿道炎 溶脲支原体、沙眼衣原体等溶脲支原体、沙眼衣原体等 生殖器疱疹生殖器疱疹 单纯

39、疱疹病毒单纯疱疹病毒 尖锐湿疣尖锐湿疣 人乳头瘤病毒人乳头瘤病毒73艾滋病（艾滋病（AIDSAIDS）病原体检查项目与应用）病原体检查项目与应用 直接显微镜检查与分离培养：临床较少采用。直接显微镜检查与分离培养：临床较少采用。HIV-RNAHIV-RNA检测：排除假阳性可确诊。检测：排除假阳性可确诊。HIVHIV抗体检测：颗粒凝集试验、抗体检测：颗粒凝集试验、ELISAELISA等为过筛实验，等为过筛实验，WesterblotWesterblot确诊实验。确诊实验。74梅毒螺旋体感染检查项目的选择与应用梅毒螺旋体感染检查项目的选择与应用 暗视野显微镜检查：有初步诊断价值。暗视野显微镜检查：有初

40、步诊断价值。梅毒血清学试验：梅毒血清学试验：非特异性抗体的检测：过筛试验。非特异性抗体的检测：过筛试验。特异性抗体的检测特异性抗体的检测：确诊试验。：确诊试验。75淋病病原体的检测方法选择与应用（淋病病原体的检测方法选择与应用（1 1）直接显微镜检查：多形核白直接显微镜检查：多形核白细胞内见革兰氏阴性双球菌，细胞内见革兰氏阴性双球菌，男性泌尿生殖道标本可明确男性泌尿生殖道标本可明确诊断，而女性需结合培养结诊断，而女性需结合培养结果分析。果分析。76淋病病原体的检测方法选择与应用（淋病病原体的检测方法选择与应用（2 2）分离培养分离培养；广泛采用，阳性即可确诊。；广泛采用，阳性即可确诊。PCRP

41、CR：可用于早期快速诊断，但假阳性率高。：可用于早期快速诊断，但假阳性率高。特异性抗原与抗体检测：方法尚不成熟。特异性抗原与抗体检测：方法尚不成熟。77非淋菌性尿道炎检测方法选择与应用非淋菌性尿道炎检测方法选择与应用 特异性抗体的检测：意义不大。特异性抗体的检测：意义不大。分离培养分离培养；阳性可确诊。；阳性可确诊。直接显微镜检查：适用于衣原体的检测。直接显微镜检查：适用于衣原体的检测。目前临床多检测抗原与核酸，用于早期快速诊断。目前临床多检测抗原与核酸，用于早期快速诊断。78单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒 分离培养分离培养；阳性可确诊。；阳性可确诊。目前临床常检测目前临床常检测HSV-DNAHSV

42、-DNA与与HSVHSV抗原，用抗原，用 于早期快速诊断。于早期快速诊断。79人乳头瘤病毒人乳头瘤病毒 不能分离培养不能分离培养 目前临床常检测目前临床常检测HPV-DNAHPV-DNA与与HPVHPV抗原，用于抗原，用于 早期快速诊断。早期快速诊断。80第六节第六节 医院感染常见病原体检查医院感染常见病原体检查 医院感染（医院感染（nosocomial infectionnosocomial infection）：又称院内感染）：又称院内感染或医院获得性感染，指患者在入院时不存在，也不处或医院获得性感染，指患者在入院时不存在，也不处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括医院内获得于潜伏期，而在

43、医院内发生的感染，包括医院内获得的而在出院后发病的感染。的而在出院后发病的感染。医院感染对象：病人（住院、门诊）、医院职工、探医院感染对象：病人（住院、门诊）、医院职工、探视人员与陪护人员等。视人员与陪护人员等。81医院感染重大事件医院感染重大事件20052005年安徽宿州年安徽宿州 白内障手术白内障手术20082008年西安交通大学第一附属医院年西安交通大学第一附属医院 新生儿科新生儿科20092009年天津蓟县妇幼保健院年天津蓟县妇幼保健院 新生儿科新生儿科20092009年山西太原年山西太原 血液透析血液透析20092009年广东汕头年广东汕头 剖腹产手术剖腹产手术82医院感染的高危人群

44、医院感染的高危人群 慢性疾病，如肿瘤、糖尿病以及肝硬化等。慢性疾病，如肿瘤、糖尿病以及肝硬化等。免疫抑制剂及激素的使用者。免疫抑制剂及激素的使用者。化疗及放疗患者。化疗及放疗患者。手术及麻醉患者。手术及麻醉患者。使用介入性诊断与治疗的患者。使用介入性诊断与治疗的患者。广谱抗生素使用者。广谱抗生素使用者。83医院感染的感染源医院感染的感染源 病人、医院职工、探视人员、陪护人员。病人、医院职工、探视人员、陪护人员。医院环境、未彻底消毒的医疗器械、血医院环境、未彻底消毒的医疗器械、血 液制品等。液制品等。84医院感染常见的病原体医院感染常见的病原体 细菌为主要病原体。细菌为主要病原体。细菌的种类因时

45、、地和人而异。细菌的种类因时、地和人而异。不同临床类型其感染细菌的构成不同临床类型其感染细菌的构成比不同。比不同。85常见临床类型常见临床类型下呼吸道感染：我国最常见，以铜绿假单胞菌为主。下呼吸道感染：我国最常见，以铜绿假单胞菌为主。尿路感染：以大肠埃希菌尿路感染：以大肠埃希菌 、变形杆菌为主。、变形杆菌为主。手术切口感染：外源性感染，约占手术切口感染：外源性感染，约占25%25%。胃肠道感染：肠炎，以真菌为主。胃肠道感染：肠炎，以真菌为主。血液感染：菌血症，以大肠埃希菌为主。血液感染：菌血症，以大肠埃希菌为主。皮肤和软组织感染：金葡，溶链引起的蜂窝织炎等。皮肤和软组织感染：金葡，溶链引起的蜂

46、窝织炎等。86及时；及时；无菌操作；无菌操作；立即送检，床旁接种；立即送检，床旁接种；尽量在抗菌药物使用前采集标本；尽量在抗菌药物使用前采集标本；盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂；盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂；送检标本应注明来源和检验目的，使实验室能正确选送检标本应注明来源和检验目的，使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明选用用相应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明选用何种抗菌药物；何种抗菌药物；作定量作定量(或半定量或半定量)培养；培养；作药敏试验，提倡作药敏试验，提倡“分级报告分级报告”(即分阶段报告涂片即分阶段报告涂片镜检、初步培养、直接药敏

47、、初步鉴定、最终鉴定与药镜检、初步培养、直接药敏、初步鉴定、最终鉴定与药敏结果敏结果)和和“限时报告限时报告”(涂片报告涂片报告2 2小时，普通培养小时，普通培养3 3天天)。标本采集和送检基本原则标本采集和送检基本原则87医院感染检查内容医院感染检查内容 基本原则与病原体感染类似，但更应注意正常菌基本原则与病原体感染类似，但更应注意正常菌群的污染以及条件致病菌在医院感染中的地位。群的污染以及条件致病菌在医院感染中的地位。定期对医院环境进行病原体监测。定期对医院环境进行病原体监测。定期对医疗器械的消毒效果进行监测。定期对医疗器械的消毒效果进行监测。88思考题：思考题：1 1、病原体检、病原体检测标本种类及采集注意事项？标本种类及采集注意事项？2 2、常见病原体有哪些种类及检测意义？、常见病原体有哪些种类及检测意义？3 3、ESBLESBL、MRSMRS、HLARHLAR、VREVRE检测的临床意义？检测的临床意义？4 4、何为乙肝两对半检测及临床意义？、何为乙肝两对半检测及临床意义？5 5、何谓院内感染？常见临床类型有哪些？、何谓院内感染？常见临床类型有哪些？89谢谢！谢谢！