1、实验一微生物实验课介绍与要求及环境人体表面微生物的检测张理珉第1页，共53页。实验一微生物实验课介绍与要求及环境人体表面微生物的检测张理珉教材用书 1沈萍，范秀容，李广武主编微生物学实验（沈萍，范秀容，李广武主编微生物学实验（第三版）北京：高等教育出版社，第三版）北京：高等教育出版社，1999第四版已于第四版已于2007年年11月出版月出版第2页，共53页。教材用书 1 沈萍，范秀容，李广武主编微生物学实验（第三主要参考书主要参考书1杜连祥，路福平主编微生物学实验技术杜连祥，路福平主编微生物学实验技术M北京：中国轻工业出版社，北京：中国轻工业出版社，20052周德庆微生物学实验教程（第周德庆微
2、生物学实验教程（第2版）版）M北京：高等教育出版社，北京：高等教育出版社，20063杨文博主编微生物学实验杨文博主编微生物学实验M北京：化北京：化学工业出版社，学工业出版社，20044赵斌，何绍江主编微生物学实验赵斌，何绍江主编微生物学实验M北北京：科学出版社，京：科学出版社，20025东秀珠，蔡妙英主编常见细菌系统分类和东秀珠，蔡妙英主编常见细菌系统分类和鉴定方法鉴定方法M北京：科学出版社，北京：科学出版社，2001 第3页，共53页。主要参考书1 杜连祥，路福平主编微生物学实验技术 M 北第四版已于2007年11月出版4、化学品伤害及中毒；促进了多个学科的建立和发展生物化学、分子生物学、生
3、物工程学、免疫学、病毒学等等 透明程度 透明、半透明、不透明3、利用沉降法测定计算空气中微生物的数量，结果的表示的方法有两种：做到“读、想、学、会、用”3、实验课的具体安排和要求；高度 扁平、隆起、凹下除沉降法外，常用还有撞击式（有专门仪器设备）。其他同学立刻通知老师。认真对待，做好预习，加强自主有机溶剂，固体化学药品，酸、碱化合物均需分类存放，挥发性之化学药品更必需放置于具有抽气装置的药品柜内。了解实验室总电源开关的安装位置。多发现问题，多和教师交流1、取一无菌牛肉膏蛋白胨琼脂平板，打开上皿盖（皿盖扣放，开始计时），使培养基暴露于空气中30分钟，盖上皿盖。多发现问题，多和教师交流利用沙桶或湿
4、抹布把燃烧的液体用沙盖着。1、明确实验课的目的；、明确实验课的目的；2、实验课的内容介绍；、实验课的内容介绍；3、实验课的具体安排和要求；、实验课的具体安排和要求；4、实验安全知识介绍、实验安全知识介绍5、实验室环境及人体表面微生物检测、实验室环境及人体表面微生物检测第4页，共53页。第四版已于2 0 0 7 年1 1 月出版本次实验的主要内容第4 页，共5实实 验验 内内 容容 一一微生物学实验课介绍微生物学实验课介绍与安全教育与安全教育第5页，共53页。实 验 内 容 一微生物学实验课介绍与安全教育第5 页，共 1、实验课的目的、实验课的目的第6页，共53页。1、实验课的目的第6 页，共5
5、 3 页。意义：意义：微生物学是生命科学中最基础的学科之一微生物学是生命科学中最基础的学科之一，实验技术的独特性和重要性。，实验技术的独特性和重要性。促进了多个学科的建立和发展促进了多个学科的建立和发展生物生物化学、分子生物学、生物工程学、免疫化学、分子生物学、生物工程学、免疫学、病毒学等等学、病毒学等等 广泛的应用广泛的应用基础理论研究、工业、基础理论研究、工业、农业、环境、医学、食品等，农业、环境、医学、食品等，第7页，共53页。2、实验课的内容介绍第7 页，共5 3 页。实验内容实验内容 无菌操作技术；无菌操作技术；培养基的制备和消毒灭菌技术；培养基的制备和消毒灭菌技术；微生物的分离培养
6、纯化技术；微生物的分离培养纯化技术；菌种的保藏技术菌种的保藏技术 微生物制片染色技术；微生物制片染色技术；微生物数量和大小测定技术；微生物数量和大小测定技术；噬菌体的分离纯化及效价的测定；噬菌体的分离纯化及效价的测定；微生物生理生化反应；微生物生理生化反应；微生物微生物DNA提取技术介绍；提取技术介绍；免疫学技术介绍；免疫学技术介绍；第8页，共53页。实验内容无菌操作技术；第8 页，共5 3 页。第9页，共53页。3、实验课的具体安排和要求实验课学习要求第9 页，共5 3 页。第10页，共53页。实验课学习要求认真对待，做好预习，加强自主第1 0 页，共5 3 页第11页，共53页。实验过程的
7、要求实验过程注意安全（具体介绍）第1 1 页，共5 3 页实验课安排实验课安排根据教学计划，本门实验课根据教学计划，本门实验课程程2学分，学分，4学时学时/周，周，14周周共共56学时，每学时学时，每学时45分钟，分钟，每次课每次课3小时；实验结果的小时；实验结果的观察是实验过程的重要内容观察是实验过程的重要内容。分组分组两人一组，登记联系两人一组，登记联系 ；穿白色实验服进入实验室；穿白色实验服进入实验室；每组准备记号笔和打火机各一每组准备记号笔和打火机各一个；个；值日生由班委每次实验前委派值日生由班委每次实验前委派；下午实验课改在下午实验课改在13：30上，上，上午的不变。上午的不变。第1
8、2页，共53页。实验课安排第1 2 页，共5 3 页。不迟到，不缺席，有事提前请假；迟到不迟到，不缺席，有事提前请假；迟到5 5分钟分钟以上以缺席计入实验习惯成绩；以上以缺席计入实验习惯成绩；爱护实验用具；爱护实验用具；实验完成后认真清洗实验用具，并摆放整齐实验完成后认真清洗实验用具，并摆放整齐；离开实验室要经教师检查同意方可离开；离开实验室要经教师检查同意方可离开；认真做好值日生工作，有人具体负责安排检查认真做好值日生工作，有人具体负责安排检查。第13页，共53页。良好的实验习惯第1 3 页，共5 3 页。实验报告的格式实验报告的格式第14页，共53页。实验报告的格式实验目的第1 4 页，共
9、5 3 页。实验报告要求实验报告要求 1.每位学生准备规定式样的实验报告纸。每位学生准备规定式样的实验报告纸。2.上课时每给出一次作业，就在下一次上上课时每给出一次作业，就在下一次上课前上交这一次的实验报告，不得拖延时间，课前上交这一次的实验报告，不得拖延时间，否则后果自负。否则后果自负。3.报告要求写清楚实验目的、原理、步骤报告要求写清楚实验目的、原理、步骤、结果及思考题。希望简洁、工整。、结果及思考题。希望简洁、工整。4.本门课结束前，要求使用统一的封面，把本门课结束前，要求使用统一的封面，把自己的所有实验报告按实验先后顺序装订成一册自己的所有实验报告按实验先后顺序装订成一册，交给实验教师
10、。，交给实验教师。第15页，共53页。实验报告要求第1 5 页，共5 3 页。实验成绩实验成绩 第16页，共53页。实验成绩第1 6 页，共5 3 页。实验用到仪器设备实验用到仪器设备 显微镜（光学显微镜（光学普通、相差、微分干涉差普通、相差、微分干涉差、暗视野；电子、暗视野；电子扫描、透射）；高压蒸扫描、透射）；高压蒸汽灭菌锅（立式和卧式）；超净工作台、隔汽灭菌锅（立式和卧式）；超净工作台、隔水式恒温培养箱；鼓风恒温干燥箱；恒温振水式恒温培养箱；鼓风恒温干燥箱；恒温振荡培养箱（旋转式和往复式）；旋涡振荡器荡培养箱（旋转式和往复式）；旋涡振荡器；恒温水浴锅；恒温水浴锅；pH计；分光光度计（紫外
11、、计；分光光度计（紫外、可见光、红外、原子吸收等）；离心机；电可见光、红外、原子吸收等）；离心机；电泳仪、泳仪、PCR仪、发酵罐、酶标仪、冰箱；微仪、发酵罐、酶标仪、冰箱；微波炉等。波炉等。第17页，共53页。实验用到仪器设备显微镜（光学普通、相差、微分干涉差、暗视实验用到器械实验用到器械 试管（试管（test tube）德汉氏小管（德汉氏小管（Durham tube）小塑料离心管，又称小塑料离心管，又称Eppendorf管管 玻璃吸管（玻璃吸管（glasspipette）微量吸管（微量吸管（micropipette）微量加样枪微量加样枪 培养皿（培养皿（petri dish）三角烧瓶（三角烧
12、瓶（erlenmeyer flask）第18页，共53页。实验用到器械试管（t e s t t u b e）第1 8 页，共5 3 页。实验用到器械实验用到器械 载玻片（载玻片（slide）和盖玻片（）和盖玻片（coverslip）滴瓶滴瓶(dropper bottle)接种工具接种工具接种环、接种针、接种钩、接接种环、接种针、接种钩、接种铲、接种刀、涂布器（玻璃或不锈钢制作种铲、接种刀、涂布器（玻璃或不锈钢制作）等。）等。第19页，共53页。实验用到器械第1 9 页，共5 3 页。常见的接种工具常见的接种工具（可根据要求自已定做）（可根据要求自已定做）第20页，共53页。常见的接种工具（可根
13、据要求自已定做）第2 0 页，共5 3 页。常用玻璃仪器常用玻璃仪器第21页，共53页。常用玻璃仪器第2 1 页，共5 3 页。第22页，共53页。第2 2 页，共5 3 页。实验室安全实验室安全 1 1、火灾；、火灾；2 2、触电；、触电；3 3、跑（漏）水；、跑（漏）水；4 4、化学品伤害及中毒；、化学品伤害及中毒；5 5、灼伤；、灼伤；6 6、割（划）伤。、割（划）伤。第23页，共53页。实验室安全实验教学过程中出现的各类突发事故和事件主要有：第2第24页，共53页。实验室安全第2 4 页，共5 3 页。先保护好自身的安全，再施救先保护好自身的安全，再施救不要慌张，按安全预案处理不要慌张
14、，按安全预案处理认真负责，不推缷责任认真负责，不推缷责任逐级上报，不隐瞒事故逐级上报，不隐瞒事故第25页，共53页。事故处理要求第2 5 页，共5 3 页。(一一)化学药品及溶剂的处理方法化学药品及溶剂的处理方法第26页，共53页。(一)化学药品及溶剂的处理方法1.在使用强酸或强碱时必需戴上(二二)安全用电，防止事故安全用电，防止事故 第27页，共53页。(二)安全用电，防止事故1.了解实验室总电源开关的安装位置。（三）节约用水，防止跑漏（三）节约用水，防止跑漏1.不用水时，随手关闭阀门。2.废物废液不准倒在水槽内，实验完了放水冲洗水槽和下水管，勿使废液残留其中。第28页，共53页。（三）节约
15、用水，防止跑漏1.不用水时，随手关闭阀门。第2 8 页（四）安全用药，防中毒（四）安全用药，防中毒 1.使用化学药品前，要充分了解其化学性质、物理性质和使用注意事项。2.不能尝化学药品，也不能直接去闻化学药品，避免用手直接去接触药品；使用药品和实验结束后立即用肥皂水洗手。3.尽量不可在实验室进餐。4.有毒或带剌激味的实验要在通风橱内进行，实验期间要开排风扇，或开窗通风。5.做好废液处理，防止环境污染；发现中毒现象，及时对症治疗，必要时送医院。第29页，共53页。（四）安全用药，防中毒1.使用化学药品前，要充分了解其化学性实验时需特别注意：实验时需特别注意：人身安全人身安全 防止割伤、灼伤，如有
16、发防止割伤、灼伤，如有发生，应用急救药品施治。生，应用急救药品施治。第30页，共53页。实验时需特别注意：第3 0 页，共5 3 页。意意 外外 对对 策策第31页，共53页。意 外 对 策第3 1 页，共5 3 页。学生衣服着火的对策学生衣服着火的对策 以灭火毡包裹以灭火毡包裹该同学，并使其在该同学，并使其在地上滚动地上滚动 其他同学立刻通知其他同学立刻通知老师。老师。第32页，共53页。学生衣服着火的对策第3 2 页，共5 3 页。实验室的窗帘布着火的对策：实验室的窗帘布着火的对策：取出灭火器，拔出安取出灭火器，拔出安全针。全针。把喷咀对准火源。把喷咀对准火源。按掣使灭火器喷出二按掣使灭火
17、器喷出二氧化碳。氧化碳。其他同学立刻通知老师其他同学立刻通知老师。第33页，共53页。实验室的窗帘布着火的对策：取出灭火器，拔出安全针。第3 3 页，酒精溅在实验桌上并着火的对策：酒精溅在实验桌上并着火的对策：利用沙桶或湿抹布把燃烧的液体用沙盖着。利用沙桶或湿抹布把燃烧的液体用沙盖着。其他同学立刻通知老师。其他同学立刻通知老师。第34页，共53页。酒精溅在实验桌上并着火的对策：利用沙桶或湿抹布把燃烧的液体用学生打破了烧杯，被碎片割伤流血的对学生打破了烧杯，被碎片割伤流血的对策策 以清水冲洗伤口。以清水冲洗伤口。贴上干净的消毒胶布。贴上干净的消毒胶布。其他同学立刻通知老师。其他同学立刻通知老师。
18、第35页，共53页。学生打破了烧杯，被碎片割伤流血的对策以清水冲洗伤口。第3 5 页化学药品溅进学生的眼睛内的对策化学药品溅进学生的眼睛内的对策 用洗眼瓶以大量清水冲洗眼睛。用洗眼瓶以大量清水冲洗眼睛。其他同学立刻通知老师。其他同学立刻通知老师。第36页，共53页。化学药品溅进学生的眼睛内的对策用洗眼瓶以大量清水冲洗眼睛。第一个学生在倾倒酸时意外地接触到酸的对一个学生在倾倒酸时意外地接触到酸的对策策 立刻以大量清水冲洗患处最少五分钟。立刻以大量清水冲洗患处最少五分钟。立刻通知老师。立刻通知老师。第37页，共53页。一个学生在倾倒酸时意外地接触到酸的对策立刻以大量清水冲洗患处实验物品常见警告标识
19、符号第38页，共53页。实验物品常见警告标识符号第3 8 页，共5 3 页。灭火器及其使用方法灭火器及其使用方法第39页，共53页。灭火器及其使用方法第3 9 页，共5 3 页。实实 验验 内内 容容 二二第40页，共53页。实 验 内 容 二实验室环境及人体表面 微生物的检测第 一、目的要求一、目的要求 检查实验室空气中及各人手检查实验室空气中及各人手上的微生物上的微生物(细菌为主细菌为主)，并加以，并加以统计、比较和描述（数量、菌落统计、比较和描述（数量、菌落形态等）。形态等）。使学生认识到微生物无处不使学生认识到微生物无处不在，以便在以后的实验中重视无在，以便在以后的实验中重视无菌操作。
20、菌操作。第41页，共53页。第4 1 页，共5 3 页。二、实验原理二、实验原理 微生物广泛分布于室内外、水、空微生物广泛分布于室内外、水、空气和土壤中；气和土壤中；通过对环境和人体表面微生物的检测通过对环境和人体表面微生物的检测及观察，建立起及观察，建立起“微生物无处不在、微生物无处不在、无孔不入无孔不入”的概念。的概念。形成自身良好的卫生习惯，认识到形成自身良好的卫生习惯，认识到在微生物实验中无菌操作的重要性在微生物实验中无菌操作的重要性。第42页，共53页。二、实验原理第4 2 页，共5 3 页。广泛的应用基础理论研究、工业、农业、环境、医学、食品等，1、取一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板，用记
21、号笔在平板底部（外面）划线等分成2半，用手指在其中一半上印（或摩擦）几下（不能把培养基划破）；透明程度 透明、半透明、不透明(二)安全用电，防止事故4赵斌，何绍江主编微生物学实验M北京：科学出版社，2002实验物品常见警告标识符号每组准备记号笔和打火机各一个；不要慌张，按安全预案处理期末考试（20%，笔试考试）了解实验室总电源开关的安装位置。除沉降法外，常用还有撞击式（有专门仪器设备）。2周德庆微生物学实验教程（第2版）M北京：高等教育出版社，2006面积为100cm2的平板培养基，暴露在空气中5分钟相当于10升空气中的菌落数。多发现问题，多和教师交流本门课结束前，要求使用统一的封面，把自己的
22、所有实验报告按实验先后顺序装订成一册，交给实验教师。在使用强酸或强碱时必需戴上安全手套，并戴上安全眼镜。实验一微生物实验课介绍与要求及环境人体表面微生物的检测张理珉3、实验课的具体安排和要求有机溶剂，固体化学药品，酸、碱化合物均需分类存放，挥发性之化学药品更必需放置于具有抽气装置的药品柜内。电子扫描、透射）；利用沙桶或湿抹布把燃烧的液体用沙盖着。常见的接种工具（可根据要求自已定做）培养基的制备和消毒灭菌技术；立刻以大量清水冲洗患处最少五分钟。迟到5分钟以上以缺席计入实验习惯成绩；平板培养基含有微生物生长所需的营养成分，当不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，12天内每一菌体细胞即能通
23、过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个肉眼可见的细胞群体（菌落）；学生打破了烧杯，被碎片割伤流血的对策1、取一无菌牛肉膏蛋白胨琼脂平板，打开上皿盖（皿盖扣放，开始计时），使培养基暴露于空气中30分钟，盖上皿盖。平板培养基含有微生物生长所需的营养成平板培养基含有微生物生长所需的营养成分，当不同来源的样品接种于培养基上，分，当不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，在适宜温度下培养，12天内每一菌体细天内每一菌体细胞即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，胞即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个肉眼可见的细胞群体（菌落）；形成一个肉眼可见的细胞群体（菌落）；每种微生物都有其特有的菌落形态，一般
24、每种微生物都有其特有的菌落形态，一般情况下一个菌落对应一个微生物活细胞，情况下一个菌落对应一个微生物活细胞，这样就可以统计不同微生物在某样品中的这样就可以统计不同微生物在某样品中的数量。数量。第43页，共53页。广泛的应用基础理论研究、工业、农业、环境、医学、食品等，第44页，共53页。第4 4 页，共5 3 页。牛肉膏蛋白胨培养基平板牛肉膏蛋白胨培养基平板 3 3个个/组；组；洗手液、酒精灯、记号笔、恒温培养洗手液、酒精灯、记号笔、恒温培养箱等。箱等。第45页，共53页。三、实验材料及器材牛肉膏蛋白胨培养基平板 3 个/组；第4 5 页第46页，共53页。四、实验方法及步骤（一）实验室空气中
25、微生物检查第4 6 页，共5第47页，共53页。1、取一无菌牛肉膏蛋白胨琼脂平板，打开上皿盖（皿盖扣放，第48页，共53页。3、利用沉降法测定计算空气中微生物的数量，结果的表示的方)/(100100532mrtNX个第49页，共53页。根据前苏联奥梅梁斯基提出的建议：第4 9 页，共5 3 页。多级撞击式空气微生多级撞击式空气微生物采样器物采样器第50页，共53页。除沉降法外，常用还有撞击式（有专门仪器设备）。第5 0 页，共5第51页，共53页。1、取一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板，用记号笔在平板底部（外面）划第52页，共53页。（三）菌落特征描写方法第5 2 页，共5 3 页。第53页，共53页。第5 3 页，共5 3 页。
