广泛耐药结核病诊断演示教学课件.ppt

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资源描述

1、1MDR-TB的诊断2内容 临床病史 危险因素 培养&药敏试验 结核分枝杆菌的鉴定 药敏试验3临床病史 评价危险因素 填写既往结果:-培养结果-药敏试验结果-治疗方案4危险因素(1)既往治疗过活动性结核 新发结核病诊断:在耐药结核病高流行地区居住或者居住过 有与耐药结核病患者的接触史(在一起居住/工作)当结核病体征没有被识别时接受过潜在结核病感染(LTBI)治疗5危险因素(2)经验性一线抗结核治疗失败 治疗过程中痰培养未阴转 结核病症状未/部分好转 结核病症状或者胸部X线进展 使用FQ治疗社区获得性肺炎的类似症状后证实为结核病 在HIV高感染地区使用间歇性结核病治疗方案,治疗失败。6如果有结核

2、病治疗史,怀疑MDR 病灶广泛(双肺或者空洞)菌量大 依从性差,间断服药,或者服药不规律 无DOT或者治疗督导不够 有治疗方案不恰当史:单药治疗 有效药物太少 药物剂量不够 7发现耐药风险的重要性 避免无效治疗 选择最适当的经验治疗方案 减少传播 减低可能的药物副反应 预防进一步的耐药发生8培养&药敏 启动治疗的前提:痰标本 如果是痰涂片阴性肺结核:痰诱导,支气管镜检查!对患者操作过程中卫生工作人员做好保护 肺外结核:外科标本/细针抽吸送涂片和组织病理学检查 药敏试验(DST):在可信的参比实验室开展9结核分枝杆菌的鉴定10鉴定结核分枝杆菌 LED荧光显微镜检测:减低视觉疲劳的风险 延长灯的使

3、用寿命 成本较低 不需要“暗室”甚至可以使用电池来操作11鉴定结核分枝杆菌 液体培养基:BACTEC MGIT 960 自动系统比固体培养基更快,敏感度更高 污染的风险较高需要培训好的人员 固体培养基的优点:菌落形态 便宜 污染率较低12鉴定结核分枝杆菌 基于分枝杆菌噬菌体的系统 2天后获得结果 高特异度 83 100%低灵敏度 21 88%核酸扩增试验(NAAT)灵敏度 91,7 100%涂阳标本灵敏度 65,5 92,9%涂阴标本13DST 标准技术 固体培养基比例法 4-6周后获得结果 对新药没有临界浓度14DST 标准技术 液体培养基:MGIT 460TB 1-2周后获得结果 除环丝氨

4、酸外所有药物 放射性物质 废弃物的处理!2011年11月后不再使用 MGIT 960 1-2周后获得结果 除环丝氨酸外所有药物 基于氧气消耗的检测手段15DST 新方法 表型的方法:MODS:显微镜观察药物敏感性 硝酸还原酶法(NRA)基因法:线性探针检测 GeneXpert16MODS 结核分枝杆菌在液体培养基中的生长情况 绳状并杂乱分布(体态)比在固体培养基中生长得快 治疗的标本在塑料器皿中的分布:抗生素 如果通过(反转)光显微镜镜检观察到生长则耐药17MODS18硝基还原酶法(NRA)结核分枝杆菌种植在LJ 培养基上加入抗生素检测硝基还原为亚硝酸的能力19线性探针检测线性探针检测(INN

5、O-Lipa 利福平结核检测)培养菌株利福平耐药灵敏度&特异度均较高,直接使用临床标本的效果不是很好20线性探针检测基因型 MTB耐药+检测(Hain 生命科学)即使直接使用临床标本,利福平耐药的特异度和灵敏度非常好。21线性探针检测基因型 MTB耐药二线药试验(Hain生命科学)22GenXpert Boehme,NEJM,20101.使用2:1的标本试剂对痰菌液化并灭活 2.将2ml的处理后的标本导入检测盒3.将检测盒插入MTB-RIF检测平台(完成手工操作)4.标本自动过滤和清洗5.超声溶解过滤捕获的微生物来释放DNA6.DNA分子与干PCR试剂混合7.在一体式反应试管中进行半巢式实时扩

6、增和检测8.可打印的检测结果检测结果检测结果105分钟后获得分钟后获得23GeneXpert 敏感结核Migliori,ERS-online course,2011患者发现的比例天液体培养固体培养涂片24地区和试验标本数量地区灵敏度特异度所有培阳涂阳培阳涂阴培阳非结核校准数量/总数校准数量/总数校准数量/总数校准数量/总数校准数量/总数校准数量/总数校准数量/总数校准数量/总数试验标本数量3标本2标本1标本表2.根据每个患者检测标本的数量与三个涂片和四个培养比较MTB/RIF试验的灵敏度和特异度25GenXpertMigliori,ERS-online course,2011痰涂片-痰涂片+培

7、养阳性培养阴性培养阳性联 合 X p e r t MTB/RIF检测出MTB7030275PPV 99.1%未检测出MTB71710NPV 96.1%灵敏度特异度98.0%98.3%涂阳培阳的灵敏度为100%,涂阴培阳的灵敏度为91%DST 利福平耐药DST 敏感联合Xpert MTB/RIF利福平耐药584PPV 93.6%利福平不耐药2280NPV 99.3%灵敏度特异度96.7%98.6%利福平耐药检测准确率高。有差异结果的测序数据显示Xpert是正确的。26GenXpert 在低发病率环境的作用?疾病合计存在不存在检测结果阳性9799196PPV=97/196=49%阴性3980198

8、04合计100990010.000频率=100/10.000=1%灵敏度=97/100=97%特异度=9801/9900=99%疾病合计存在不存在检测结果阳性1940802020PPV=1940/2020=96%阴性6079207980合计2000800010.000频率=2000/10.000=20%灵敏度=1940/2000=97%特异度=7920/8000=99%27GeneXpert 检测结核的时间Migliori,ERS-online course,2011均数:中位数均数:中位数均数:中位数均数:中位数涂片(503)液体培养(946)固体培养(539)28GeneXpert 检测利

9、福平耐药的时间Migliori,ERS-online course,2011均数:中位数均数:中位数均数:中位数分子生物学DST(19)传统DST(110)29GeneXpert 优点:简单,容易培训 没有污染的风险 生物安全二级实验室 固体/液体培养:三级 缺点:需要确定利福平耐药水平 只能检测一种药的耐药情况 需要其他技术来确定治疗方案30基因法 缺点:成本高 发现利福平 异烟肼耐药没有其他药品的耐药信息(除了Hain+试验,但是二线药的灵敏度较低)在感染控制/治疗监测方面没有作用(关于涂片阳性没有信息)31基因法 优点:早期&快速发现耐药情况 GeneXpert:容易操作,对生物安全的要求较低 WHO 2011 MDR-TB治疗指南:建议 1:利用现有资源,推荐开展异烟肼和利福平或者利福平快速药敏试验,以替代传统试验或者在诊断结核时不进行药物敏试验的模式。

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