1、生物个体由小到大的增长，即表现为细生物个体由小到大的增长，即表现为细胞组分与结构在量方面的增加胞组分与结构在量方面的增加 生长生长指生物个体数目的增加指生物个体数目的增加 繁殖繁殖在单细胞微生物中，生长繁殖的速度很快，而且在单细胞微生物中，生长繁殖的速度很快，而且两者始终交替进行，个体生长与繁殖的界限难以两者始终交替进行，个体生长与繁殖的界限难以划清，因此实际上常群体生长作为衡量微生物生划清，因此实际上常群体生长作为衡量微生物生长的指标。长的指标。群体生长的实质是包含着个体细胞生长与繁殖交群体生长的实质是包含着个体细胞生长与繁殖交替进行的过程。替进行的过程。一、微生物纯培养的分离一、微生物纯培
2、养的分离 平板划线分离法平板划线分离法 稀释倒平板法稀释倒平板法 单孢子或单细胞分离法单孢子或单细胞分离法 利用选择性培养基分离法利用选择性培养基分离法 平板划线分离法平板划线分离法 用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线划线 ，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释倒平板法稀释倒平板法 单孢子或单细胞分离法单孢子或单细胞分离法 采取显微分
3、离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养个个体进行培养以获得纯培养 。在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作，挑取单在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作，挑取单孢子或单细胞进行培养。也可以采用特制的毛细管在孢子或单细胞进行培养。也可以采用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移到合适的培养基进行培养。到合适的培养基进行培养。选择性培养基分离法选择性培养基分离法 各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有不同的抵各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有
4、不同的抵抗能力，利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生抗能力，利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生物生长的选择培养基，用它来培养微生物以获得纯培养。物生长的选择培养基，用它来培养微生物以获得纯培养。微生物纯培养分离方法的比较微生物纯培养分离方法的比较分离方法分离方法应用范围应用范围平皿划线法平皿划线法方法简便，多用于分离细菌方法简便，多用于分离细菌稀释倒平皿法稀释倒平皿法即可定性，又可定量，用途广泛即可定性，又可定量，用途广泛单细胞挑取法单细胞挑取法局限于高度专业化的科学研究局限于高度专业化的科学研究利用选择培养基法利用选择培养基法适用于分离某些生理类型较特殊的适用于分离某些
5、生理类型较特殊的微生物微生物二、微生物的培养方法二、微生物的培养方法 同步培养法同步培养法(synchronous culture)：是使培养物中所是使培养物中所有微生物细胞都处于相同的生长阶段的培养方法。有微生物细胞都处于相同的生长阶段的培养方法。同步生长：以同步培养方法使群体细胞能处于同一同步生长：以同步培养方法使群体细胞能处于同一生长阶段，并同时进行分裂的生长方式生长阶段，并同时进行分裂的生长方式同步培养物常被用来研究在单个细胞上难以研究的生同步培养物常被用来研究在单个细胞上难以研究的生理与遗传特性和作为工业发酵的种子，它是一种理想理与遗传特性和作为工业发酵的种子，它是一种理想的材料。的
6、材料。温度温度培养基成份控制培养基成份控制光照和黑暗交替培养光照和黑暗交替培养诱导法诱导法机械方法机械方法离心方法离心方法过滤分离法过滤分离法硝酸纤维素滤膜法硝酸纤维素滤膜法硝硝酸酸纤纤维维素素滤滤膜膜法法离离心心法法四、微生物生长的测定方法四、微生物生长的测定方法血球计数板法血球计数板法:利用血球计数板，在利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。物的数量。涂片计数法涂片计数法:将已知体积的待测样品将已知体积的待测样品均匀涂布在载玻片的已知面积内均匀涂布在载玻片的已知面积内,在在显微镜下计算样品中微生物数量。显微镜下计算样品中微生物数量。缺点
7、：缺点：不能区分死菌与活不能区分死菌与活菌；菌；不适于对运动细菌不适于对运动细菌的计数；的计数；需要相对高的细菌需要相对高的细菌浓度；浓度；个体小的细菌在显个体小的细菌在显微镜下难以观察；微镜下难以观察；两种方法都是在显微镜下直接计两种方法都是在显微镜下直接计数，故又称为直接计数法。特点数，故又称为直接计数法。特点是检测快速。是检测快速。比浊法：样品中由于菌体细胞对光的消散作用而呈比浊法：样品中由于菌体细胞对光的消散作用而呈浑浊，细胞数目越多，对光的消散作用越强，浑浊浑浊，细胞数目越多，对光的消散作用越强，浑浊度越高。浊度可以用比色计或分光光度计测量，以度越高。浊度可以用比色计或分光光度计测量
8、，以光吸收值来表示。单细胞生物在一定的范围内的光光吸收值来表示。单细胞生物在一定的范围内的光吸收值的大小与液体中细胞数目及细胞物质量成正吸收值的大小与液体中细胞数目及细胞物质量成正比，因而可用做溶液中总细胞的计数。检测时需用比，因而可用做溶液中总细胞的计数。检测时需用直接显微镜计数或平板活菌计数法制作标准曲线。直接显微镜计数或平板活菌计数法制作标准曲线。该方法缺点是灵敏度差，优点是简便、快速、不干该方法缺点是灵敏度差，优点是简便、快速、不干扰或不破坏样品。扰或不破坏样品。检测时可使用侧臂三角瓶在不同的培养时间重复测检测时可使用侧臂三角瓶在不同的培养时间重复测定样品的浊度，因而广泛地用作生长速率
9、的测定。定样品的浊度，因而广泛地用作生长速率的测定。活菌计数法是通过在培养基形成的菌落来间接确定活菌计数法是通过在培养基形成的菌落来间接确定其活菌数的方法，也称平板计数法。原理是每个活其活菌数的方法，也称平板计数法。原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。生长形成菌落。1.湿重法湿重法:将微生物培养液离心，收集细胞沉淀物，然后称重。将微生物培养液离心，收集细胞沉淀物，然后称重。2.干重法：离心得到的细胞沉淀物置干重法：离心得到的细胞沉淀物置100105的烘箱中干燥的烘箱中干燥过夜至除去水分，然后称重。过夜至除去水分，然后
10、称重。3.3.含氮量测定法：一般微生物细胞的含氮量比较稳定，可以含氮量测定法：一般微生物细胞的含氮量比较稳定，可以用凯氏定氮法等测其总量，再乘以系数用凯氏定氮法等测其总量，再乘以系数6.256.25即为粗蛋白含量，即为粗蛋白含量，蛋白含量越高，说明菌体数和细胞物质量越高。蛋白含量越高，说明菌体数和细胞物质量越高。4.DNA4.DNA含量测定法：微生物细胞的含量测定法：微生物细胞的DNADNA含量比较稳定，采用适含量比较稳定，采用适当的荧光指示剂与菌体当的荧光指示剂与菌体DNADNA作用，荧光比色或分光光度计法测作用，荧光比色或分光光度计法测DNADNA含量。含量。5.5.其它生理指标：如测定碳
11、、磷、其它生理指标：如测定碳、磷、RNARNA、ATPATP、DAPDAP的含量。的含量。1.1.培养基表面菌丝生长速率测定法。培养基表面菌丝生长速率测定法。2.2.培养料中菌体速率测定法。培养料中菌体速率测定法。3.3.单个菌丝顶端生长速率测定法。单个菌丝顶端生长速率测定法。微生物的生长表现在微生物的个体生长和群体生长两微生物的生长表现在微生物的个体生长和群体生长两个水平上。作为单细胞，单个微生物的生长表现为细个水平上。作为单细胞，单个微生物的生长表现为细胞基本成分的协调合成和细胞体积的增加，细胞生长胞基本成分的协调合成和细胞体积的增加，细胞生长到一定时期，就分裂成为两个子细胞。微生物的个体
12、到一定时期，就分裂成为两个子细胞。微生物的个体生长反映在个体的细胞数目和每个细胞内物质含量两生长反映在个体的细胞数目和每个细胞内物质含量两个方面的增加。由于微生物个体微小，个体质量和体个方面的增加。由于微生物个体微小，个体质量和体积的变化不易观察，所以以微生物的群体作为研究对积的变化不易观察，所以以微生物的群体作为研究对象，以微生物细胞的数量或微生物细胞质量的增加作象，以微生物细胞的数量或微生物细胞质量的增加作为生长的指标。为生长的指标。n=n=lgBlgBt t lgB lgB0 0/0.301/0.301生长曲线：生长曲线：将少量纯种非丝状单细胞微生物接种到恒定容积将少量纯种非丝状单细胞微
13、生物接种到恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜的温度、通气等条的新鲜液体培养基中，在适宜的温度、通气等条件下培养，定时取样测定单位体积里的细胞数，件下培养，定时取样测定单位体积里的细胞数，以单位体积里的细胞数的对数为纵坐标，以培养以单位体积里的细胞数的对数为纵坐标，以培养时间为横坐标，画出的曲线。时间为横坐标，画出的曲线。生长曲线描述了单细胞微生物生长曲线描述了单细胞微生物在新的适宜环境条件中，生长在新的适宜环境条件中，生长繁殖直至衰老死亡全过程的动繁殖直至衰老死亡全过程的动态变化。态变化。生长曲线可分：生长曲线可分：迟缓期迟缓期对数期对数期 衰亡期衰亡期 稳定期稳定期 1.迟缓期迟缓期将少量菌
14、种接入新鲜培养基后，在开始一段时间内菌将少量菌种接入新鲜培养基后，在开始一段时间内菌数不立即增加，或增加很少，生长速度接近于零。也数不立即增加，或增加很少，生长速度接近于零。也称称延迟期、适应期延迟期、适应期。迟缓期的特点迟缓期的特点：分裂迟缓、代谢活跃分裂迟缓、代谢活跃通过遗传学方法改变种的遗传特性使迟缓期缩短；通过遗传学方法改变种的遗传特性使迟缓期缩短；利用对数生长期的细胞作为利用对数生长期的细胞作为“种子种子”；尽量使接种前后所使用的培养基组成不要相差太大；尽量使接种前后所使用的培养基组成不要相差太大；适当扩大接种量等方式缩短迟缓期，克服不良的影响。适当扩大接种量等方式缩短迟缓期，克服不
15、良的影响。在工业发酵和科研中通常采取一定的措施缩短迟缓期在工业发酵和科研中通常采取一定的措施缩短迟缓期2.对数期对数期 对数生长期的细菌个体形态、化学组成和生理特性对数生长期的细菌个体形态、化学组成和生理特性等均较一致，代谢旺盛、生长迅速、代时稳定，所等均较一致，代谢旺盛、生长迅速、代时稳定，所以是研究微生物基本代谢的良好材料。它也常在生以是研究微生物基本代谢的良好材料。它也常在生产上用作种子，使微生物发酵的迟缓期缩短，提高产上用作种子，使微生物发酵的迟缓期缩短，提高经济效益。经济效益。以最大的速率生长和分裂，细菌数量呈对数增加。以最大的速率生长和分裂，细菌数量呈对数增加。细菌内各成分按比例有
16、规律地增加，表现为平衡生细菌内各成分按比例有规律地增加，表现为平衡生长。长。3.稳定期稳定期 由于营养物质消耗，代谢产物积累和由于营养物质消耗，代谢产物积累和pH等环境变等环境变化，逐步不适宜于细菌生长，导致生长速率降低化，逐步不适宜于细菌生长，导致生长速率降低直至零直至零(即细菌分裂增加的数量等于细菌死亡数即细菌分裂增加的数量等于细菌死亡数量量)，结束对数生长期，进入稳定生长期。，结束对数生长期，进入稳定生长期。原因：原因：获得更多的菌体物质或代谢产物采取措施：获得更多的菌体物质或代谢产物采取措施：补充营养物质或取走代谢产物或改善培养条件，补充营养物质或取走代谢产物或改善培养条件，如对好氧菌
17、进行通气、搅拌或振荡等如对好氧菌进行通气、搅拌或振荡等。4.衰亡期衰亡期 细菌代谢活性降低，细菌衰老并出现自溶，产生或释放出一细菌代谢活性降低，细菌衰老并出现自溶，产生或释放出一些产物，如氨基酸、转化酶、外肽酶或抗生素等。细胞呈现些产物，如氨基酸、转化酶、外肽酶或抗生素等。细胞呈现多种形态，有时产生畸形，细胞大小悬殊，有些革兰氏染色多种形态，有时产生畸形，细胞大小悬殊，有些革兰氏染色反应阳性菌变成阴性反应等。反应阳性菌变成阴性反应等。该时期死亡的细菌以对数方式增加，但在衰亡期的后期，由该时期死亡的细菌以对数方式增加，但在衰亡期的后期，由于部分细菌产生抗性也会使细菌死亡的速率降低。于部分细菌产生
18、抗性也会使细菌死亡的速率降低。现象：现象：特点：特点：1.1.特性：特性：丝状微生物在液体培养基中大多数情况下是以丝状微生物在液体培养基中大多数情况下是以分散的沉淀物方式分散的沉淀物方式,形态从松散的絮状沉淀到形态从松散的絮状沉淀到堆积紧密的菌丝球不等堆积紧密的菌丝球不等.丝状微生物的生长通常以单位时间内微生物细丝状微生物的生长通常以单位时间内微生物细胞的物质量（主要是干重胞的物质量（主要是干重)的变化来表示的变化来表示.丝状丝状微生物在液体培养基中的生长方式在工业生产微生物在液体培养基中的生长方式在工业生产中很重要中很重要,它影响发酵过程中的通气性、生长它影响发酵过程中的通气性、生长速率、搅
19、拌能耗和菌丝体与发酵液的分离难易速率、搅拌能耗和菌丝体与发酵液的分离难易等。等。丝状微生物的群体生长有着与单细胞微生丝状微生物的群体生长有着与单细胞微生物类似的规律。物类似的规律。在深层通气液体培养基中的生长曲线也显在深层通气液体培养基中的生长曲线也显示具有迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期。示具有迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期。分批培养：将微生物置于一定容积的培养基中，分批培养：将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次收获的培养方式。经过培养生长，最后一次收获的培养方式。连续培养：在一定恒定的容积的流动系统中培连续培养：在一定恒定的容积的流动系统中培养微生物，一方面以一定速率不断地
20、加入新的养微生物，一方面以一定速率不断地加入新的培养基，另一方面又以相同的速率流出培养物培养基，另一方面又以相同的速率流出培养物（菌体和代谢产物），以使培养系统中的细胞（菌体和代谢产物），以使培养系统中的细胞数量和营养状态保持恒定。数量和营养状态保持恒定。连续培养类型连续培养类型恒浊连续培养恒浊连续培养恒化连续培养恒化连续培养连续培养的基本原则：微生物培养过程中不断的补充营养连续培养的基本原则：微生物培养过程中不断的补充营养物质和以同样的速率移出培养物。物质和以同样的速率移出培养物。(一一)恒化连续培养恒化连续培养在整个培养过程中通过控制培养基中某种营养物质在整个培养过程中通过控制培养基中某种
21、营养物质的浓度基本恒定的方式，保持细菌的比生长速率恒的浓度基本恒定的方式，保持细菌的比生长速率恒定，使生长定，使生长“不断不断”进行。进行。生长速率的控制因子：一般是氨基酸、氨和铵盐等生长速率的控制因子：一般是氨基酸、氨和铵盐等氮源，或是葡萄糖、麦芽糖等碳源或者是无机盐，氮源，或是葡萄糖、麦芽糖等碳源或者是无机盐，生长因子等物质生长因子等物质 恒化器连续培养通常用于实验室的科研工作，尤其恒化器连续培养通常用于实验室的科研工作，尤其适用于与生长速率相关的各种理论研究。适用于与生长速率相关的各种理论研究。(二二)恒浊连续培养恒浊连续培养通过连通过连续培养续培养装置中装置中的光电的光电系统控系统控制
22、培养制培养液中菌液中菌体浓度体浓度恒定、恒定、使细菌使细菌生长连生长连续进行续进行的一种的一种培养方培养方式。式。用于获用于获得大量得大量菌体以菌体以及与菌及与菌体生长体生长平行的平行的代谢产代谢产物生产物生产的发酵的发酵工业中，工业中，但此法但此法不适用不适用于丝状于丝状微生物。微生物。环境条件的改变，在一定限度内，可引起微生物形环境条件的改变，在一定限度内，可引起微生物形态、生理、生长、繁殖等特征的改变，或抵抗、适态、生理、生长、繁殖等特征的改变，或抵抗、适应环境条件方面的改变。当环境条件的变化超过一应环境条件方面的改变。当环境条件的变化超过一定能够界限，则导致微生物的死亡。研究环境条件定
23、能够界限，则导致微生物的死亡。研究环境条件与微生物之间的相互关系，有助于了解微生物在自与微生物之间的相互关系，有助于了解微生物在自然界的分布与作用，并可能采取有效措施，促进有然界的分布与作用，并可能采取有效措施，促进有益微生物的生长繁殖，限制甚至完全破坏有害微生益微生物的生长繁殖，限制甚至完全破坏有害微生物的生命活动。物的生命活动。影响微生物生长的环境因素有很多，主要包括温度、影响微生物生长的环境因素有很多，主要包括温度、pHpH、氧气和营养物质的组成和浓度。、氧气和营养物质的组成和浓度。一、一、温温 度度根据微生物生长的最适温度不同，可以将微生物分根据微生物生长的最适温度不同，可以将微生物分
24、为为嗜冷、兼性嗜冷、嗜温、嗜热和超嗜热等嗜冷、兼性嗜冷、嗜温、嗜热和超嗜热等五种不五种不同的类型。它们都有各自的最低、最适和最高生长同的类型。它们都有各自的最低、最适和最高生长温度范围。温度范围。最适生长温度：某菌分裂代时最短或生最适生长温度：某菌分裂代时最短或生长速率最高时的培养温度长速率最高时的培养温度 微生物类型微生物类型 生长温度生长温度 最低最低 最适最适 最高最高 嗜冷微生物嗜冷微生物 0以下以下 15 20 兼性嗜冷微生物兼性嗜冷微生物 0 20-30 35；嗜温微生物嗜温微生物 15-20 20-45 45以上以上 嗜热微生物嗜热微生物 45 55-65 80 超嗜热或嗜高温微
25、生物超嗜热或嗜高温微生物 65 80-90 100以上以上二、二、pH微生物生长过程中机体内发生的绝大多数的反应是微生物生长过程中机体内发生的绝大多数的反应是酶促反应，而酶促反应都有一个最适酶促反应，而酶促反应都有一个最适pH范围，在此范围，在此范围内只要条件适合，酶促反应速率最高，微生物范围内只要条件适合，酶促反应速率最高，微生物生长速率最大，因此微生物生长也有一个最适生长生长速率最大，因此微生物生长也有一个最适生长的的pH范围。范围。微生物微生物pH范围范围嗜酸性嗜酸性5.4嗜中性嗜中性5.48.5嗜碱性嗜碱性7.011.5三、氧三、氧根据氧与微生物生长的关系可将微生物分为根据氧与微生物生
26、长的关系可将微生物分为好氧好氧微好氧微好氧耐氧型耐氧型兼性厌氧兼性厌氧专性厌氧专性厌氧微生物类型微生物类型最适生长的最适生长的O2体积分数体积分数好氧好氧微好氧微好氧氧的忍耐型氧的忍耐型兼性厌氧兼性厌氧专性厌氧专性厌氧等于或大于等于或大于202一一102以下以下有氧或无氧有氧或无氧不需要氧、有氧时死亡不需要氧、有氧时死亡自由基是一种强氧化剂，它与生物大分子互相作自由基是一种强氧化剂，它与生物大分子互相作用，可导致产生生物分子自由基，从而对机体产用，可导致产生生物分子自由基，从而对机体产生损伤或突变作用，直至死亡。氧之所以对专性生损伤或突变作用，直至死亡。氧之所以对专性厌氧微生物以外的其他四种类
27、型微生物不产生致厌氧微生物以外的其他四种类型微生物不产生致死作用，是因为它们具有超氧物歧化酶，可催化死作用，是因为它们具有超氧物歧化酶，可催化起氧化基化合物分解，最终分解成水。起氧化基化合物分解，最终分解成水。氧对于好氧微生物生长虽然可以通过好氧呼吸产氧对于好氧微生物生长虽然可以通过好氧呼吸产生更多的能量，满足机体的生长需要，但另一方生更多的能量，满足机体的生长需要，但另一方面，氧对一切生物都会使其产生有毒害作用的代面，氧对一切生物都会使其产生有毒害作用的代谢产物，如超氧基化合物与谢产物，如超氧基化合物与H2O2，这两种代谢产这两种代谢产物互相作用还会产生毒性很强的自由基物互相作用还会产生毒性
28、很强的自由基OH.。在微生物研究、生产实践与现实生活中，在微生物研究、生产实践与现实生活中，我们需要控制所不期望的微生物的生长。我们需要控制所不期望的微生物的生长。任何杀死或抑制微生物生长的方法都可任何杀死或抑制微生物生长的方法都可以达到控制微生物生长的目的，他们包以达到控制微生物生长的目的，他们包括加热、低温、干燥、辐射、过滤等物括加热、低温、干燥、辐射、过滤等物理方法和消毒剂、防腐剂、化学治疗等理方法和消毒剂、防腐剂、化学治疗等化学方法两大类。化学方法两大类。防腐防腐(antisepsis)：在某些化学物质或物理因子作用下，能防止在某些化学物质或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生长的一种
29、措施。或抑制微生物生长的一种措施。消毒消毒(disinfection)disinfection)：利用某种方法杀死或灭活物质或物体中利用某种方法杀死或灭活物质或物体中所有病原微生物的一种措施。所有病原微生物的一种措施。灭菌灭菌(sterilization)sterilization)：指利用某种方法杀死物体中包括芽孢指利用某种方法杀死物体中包括芽孢在内的所有微生物的一种措施。在内的所有微生物的一种措施。化疗化疗(chemotherapy)chemotherapy)：利用具有选择毒性的化学物质如磺胺、利用具有选择毒性的化学物质如磺胺、抗生素等对生物体内部被微生物感染的组织或病变细胞进行治抗生素等
30、对生物体内部被微生物感染的组织或病变细胞进行治疗，以杀死组织内的病原微生物或病变细胞，但对机体本身无疗，以杀死组织内的病原微生物或病变细胞，但对机体本身无毒害作用的治疗措施。毒害作用的治疗措施。一、物理方法的控制一、物理方法的控制 （一）（一）温温度度高温灭菌原理：高温可引起蛋白质、核算和脂肪等高温灭菌原理：高温可引起蛋白质、核算和脂肪等重要生物大分子降解或空间结构改变等，从而使它重要生物大分子降解或空间结构改变等，从而使它们的功能丧失。们的功能丧失。衡量灭菌效果的指标衡量灭菌效果的指标 十倍致死时间十倍致死时间 (decimal reduction time)：即在一定的即在一定的温度条件下
31、，微生物数量十倍减少所需要的时间。温度条件下，微生物数量十倍减少所需要的时间。热致死时间热致死时间(thennaldeathtime)：即在一定温度下杀即在一定温度下杀死所有某一浓度微生物所需要的时间死所有某一浓度微生物所需要的时间。1.1.干热灭菌：通过灼烧或烘烤等方法是蛋白质干热灭菌：通过灼烧或烘烤等方法是蛋白质变性杀死微生物。变性杀死微生物。（1）烘箱热空气法：）烘箱热空气法：171711，1h1h ；1 16060，2h2h以上以上 ；1 12020，12h12h以上；以上；对象：金属器械、玻璃器皿，油料或粉料。对象：金属器械、玻璃器皿，油料或粉料。（2）灼烧法：）灼烧法：对象：接种针
32、、接种环或带病原菌材料、动物尸体。对象：接种针、接种环或带病原菌材料、动物尸体。2.2.湿热灭菌：是利用热蒸汽灭菌，在同样的湿热灭菌：是利用热蒸汽灭菌，在同样的温度和相同作用时间下，效果要好于干热灭温度和相同作用时间下，效果要好于干热灭菌。因为：菌。因为：湿热蒸汽穿透力强湿热蒸汽穿透力强能破坏维持蛋白质空间结构和氢健的稳定能破坏维持蛋白质空间结构和氢健的稳定性，加速这一重要生命大分子物质的变性。性，加速这一重要生命大分子物质的变性。蒸汽存在潜热，当气体变为液体时可释放蒸汽存在潜热，当气体变为液体时可释放出大量热量，能迅速提高灭菌物体的温度。出大量热量，能迅速提高灭菌物体的温度。（2）高压蒸汽灭
33、菌法）高压蒸汽灭菌法 利用提高压力使水的沸点升高，以提高水蒸气的温度，利用提高压力使水的沸点升高，以提高水蒸气的温度，达到更加有效的杀死微生物。高压蒸汽灭菌的温度越达到更加有效的杀死微生物。高压蒸汽灭菌的温度越高，微生物死亡越快。在高，微生物死亡越快。在0.1013MPa0.1013MPa压力下，水蒸气压力下，水蒸气温度达到温度达到121.3，灭菌时间，灭菌时间1530min。（1）煮沸消毒）煮沸消毒 将待消毒物品如注射器、金属用具、解剖用具等在水将待消毒物品如注射器、金属用具、解剖用具等在水中煮沸中煮沸1515minmin或更长时间，以杀死细菌或其他微生物或更长时间，以杀死细菌或其他微生物的
34、营养体和少部分的芽孢或孢子。如果在水中适当加的营养体和少部分的芽孢或孢子。如果在水中适当加1 1碳酸钠或碳酸钠或2 2一一5 5的石炭酸则杀菌效果更好的石炭酸则杀菌效果更好 。高温对牛奶及其热敏感物质不适宜，因为高热破坏高温对牛奶及其热敏感物质不适宜，因为高热破坏了食品的营养与风味。该法可以使食品中的微生物了食品的营养与风味。该法可以使食品中的微生物数量下降数量下降97%99%，只能作为消毒而不能作为灭菌。，只能作为消毒而不能作为灭菌。（3）巴氏消毒法）巴氏消毒法具具体体方方法法低温维持法：在低温维持法：在63下维持下维持30min高温法：在高温法：在72下维持下维持15s超高超高瞬时瞬时温法
35、：在温法：在135-150下维持下维持2-6s保存，可以防保存，可以防止腐败。但贮藏只能维持几天。微生物止腐败。但贮藏只能维持几天。微生物菌种放置冷藏箱可保存数周至数月。菌种放置冷藏箱可保存数周至数月。鲜食品放鲜食品放-10冷冻温度，微冷冻温度，微生物基本不再生长。保存菌种需要生物基本不再生长。保存菌种需要-80低温冰箱、低温冰箱、-78 干冰中或干冰中或-196 液氮中液氮中保存。保存。（二）辐射（二）辐射(radiation Sterilization)radiation Sterilization)辐射灭菌是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数辐射灭菌是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物
36、质上的微生物的一种有效力法。物质上的微生物的一种有效力法。用于灭菌的电磁波有用于灭菌的电磁波有:微波微波:通过热产生杀死微生物的作用；通过热产生杀死微生物的作用；紫外线紫外线(UV):UV):使使DNADNA分子中相邻的嘧啶形成嘧啶二聚分子中相邻的嘧啶形成嘧啶二聚体，抑制体，抑制DNADNA复制与转录等功能，杀死微生物；复制与转录等功能，杀死微生物；X X射线和射线和y y射线射线:使其他物质氧化或产生自由基使其他物质氧化或产生自由基(OHOH、H H)破坏和改变生物大分子的结构，以抑制或杀死微破坏和改变生物大分子的结构，以抑制或杀死微生物。生物。通过降低微生物可利用水的数量或活度而影响通过降
37、低微生物可利用水的数量或活度而影响微生物的生长。微生物的生长。（四）过滤（四）过滤不不耐耐热热的的液液体体培培养养基基的的灭灭菌菌二、化学方法的控制二、化学方法的控制 一类能够杀死微生物或抑制微生物生长的化学物质一类能够杀死微生物或抑制微生物生长的化学物质。它们控制微生物生长的作用机理：它们控制微生物生长的作用机理：抑菌抑菌 杀菌杀菌 溶菌溶菌 用机理是这类物质结合到核糖体上用机理是这类物质结合到核糖体上抑制蛋白质合成，导致生长停止，抑制蛋白质合成，导致生长停止，由于它们同核糖体结合不紧，它们由于它们同核糖体结合不紧，它们在浓度降低时又会游离出来，核糖在浓度降低时又会游离出来，核糖体合成蛋白质
38、的能力恢复，使生长体合成蛋白质的能力恢复，使生长恢复恢复 它们是紧紧地结合到细胞的作用靶它们是紧紧地结合到细胞的作用靶上，即使在浓度降低时也不能游离上，即使在浓度降低时也不能游离出来，因此生长不能恢复出来，因此生长不能恢复 能抑制细胞壁合成或损伤细胞质膜能抑制细胞壁合成或损伤细胞质膜 化学药剂根据作用效果又将它们分为消毒剂、防腐化学药剂根据作用效果又将它们分为消毒剂、防腐剂和化学治疗剂。剂和化学治疗剂。消毒剂：消毒剂：可抑制或杀死微生物，通常用于非生物材料的灭菌可抑制或杀死微生物，通常用于非生物材料的灭菌或消毒。或消毒。防腐剂：防腐剂：能杀死微生物或抑制其生长，但对人及动物的体表组能杀死微生物
39、或抑制其生长，但对人及动物的体表组织无毒性或毒性低，可用于机体表面或用于食品、饮品和药品织无毒性或毒性低，可用于机体表面或用于食品、饮品和药品的防腐。的防腐。HgCl2、CuSO4、碘液、氯气、乙烯氧化物、甲醛剂、臭氧碘液、氯气、乙烯氧化物、甲醛剂、臭氧 有机汞、有机汞、0.1%1硝酸银、碘液、硝酸银、碘液、70%乙醇、乙醇、3过氧化氢过氧化氢各种化学消毒剂杀菌能力的比较方法各种化学消毒剂杀菌能力的比较方法石炭酸系数：石炭酸系数：指在一定时间内被试药剂能指在一定时间内被试药剂能杀死全部供试菌的最高稀释度和达到同效杀死全部供试菌的最高稀释度和达到同效的石炭酸的最高稀释度的比率。一般规定的石炭酸的
40、最高稀释度的比率。一般规定处理时间为处理时间为10分钟，而供试菌定为分钟，而供试菌定为Salmonella typhi（伤寒沙门氏菌）。伤寒沙门氏菌）。在临床上最早使用的消毒剂在临床上最早使用的消毒剂-石炭酸石炭酸1.生长因子类似物在结构上与微生物的生长因子相似但又有区别，它们在结构上与微生物的生长因子相似但又有区别，它们不能够在菌体细胞内起着生长因子的同样作用，但却不能够在菌体细胞内起着生长因子的同样作用，但却能够组织微生物对生长因子的利用，从而抑制微生物能够组织微生物对生长因子的利用，从而抑制微生物的生长。的生长。叶酸对抗物（叶酸对抗物（磺胺磺胺）、）、嘌呤对抗物（嘌呤对抗物（6-巯基嘌呤
41、巯基嘌呤）、）、苯丙氨酸对抗物（苯丙氨酸对抗物（对氟苯丙氨酸对氟苯丙氨酸）、）、尿嘧啶对抗物（尿嘧啶对抗物（5-氟尿嘧啶氟尿嘧啶）胸腺嘧啶对抗物（胸腺嘧啶对抗物（5-溴胸腺嘧啶溴胸腺嘧啶）磺胺药物是最早发现，也是最常见的化学疗剂，抗菌谱广，能磺胺药物是最早发现，也是最常见的化学疗剂，抗菌谱广，能治疗多种传染性疾病。治疗多种传染性疾病。大多数革兰氏阳性细菌大多数革兰氏阳性细菌（如肺炎球菌、溶血性链球菌等）（如肺炎球菌、溶血性链球菌等）某些革兰氏阴性细菌某些革兰氏阴性细菌（如痢疾杆菌、脑膜炎球菌、流感杆菌等）（如痢疾杆菌、脑膜炎球菌、流感杆菌等）对对放线菌放线菌也有一定的作用。也有一定的作用。作用
42、机理：磺胺是叶酸组成部分对氨基苯甲酸的结构类似物作用机理：磺胺是叶酸组成部分对氨基苯甲酸的结构类似物磺胺的抑菌作用是因为很多细菌需要自己合成叶酸而生长。磺胺的抑菌作用是因为很多细菌需要自己合成叶酸而生长。磺胺对人体细胞无毒性，因为人缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸磺胺对人体细胞无毒性，因为人缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶的相关酶-二氢叶酸合成酶，不能用外界提供的对氨基苯甲二氢叶酸合成酶，不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酸，酸自行合成叶酸，而必须直接利用叶酸为生长因子进行生长。而必须直接利用叶酸为生长因子进行生长。2.2.抗生素抗生素 抗生素抗生素(Antibiotic)是由某些生物合成或半
43、合成的一是由某些生物合成或半合成的一类次级代谢产物或衍生物，它们在很低浓度时就能抑类次级代谢产物或衍生物，它们在很低浓度时就能抑制或影响它种生物的生命活动，如杀死微生物或抑制制或影响它种生物的生命活动，如杀死微生物或抑制其生长。其生长。自本世纪自本世纪40年代以来，已找到上万种新抗生素，合成年代以来，已找到上万种新抗生素，合成了近了近10万种半合成抗生素，但其中在临床上常用的仅万种半合成抗生素，但其中在临床上常用的仅几十种。几十种。抗菌谱：不同微生物对不同康生物的敏感性不抗菌谱：不同微生物对不同康生物的敏感性不一样，抗生素的作用对象就有一定的范围，这一样，抗生素的作用对象就有一定的范围，这种作
44、用范围就称为抗生素的抗菌谱。种作用范围就称为抗生素的抗菌谱。广谱抗菌素：对多种类群的细菌起作用。广谱抗菌素：对多种类群的细菌起作用。如土霉素、四环素，即对如土霉素、四环素，即对G G+又对又对G G-起作用。起作用。狭谱抗菌素：只对少数几种细菌起作用。狭谱抗菌素：只对少数几种细菌起作用。如青霉素只对如青霉素只对G G+起作用。起作用。作用机制抑制细菌细胞壁合成抑制细菌细胞壁合成破坏细胞质膜破坏细胞质膜抑制蛋白质合成抑制蛋白质合成抑制核酸合成抑制核酸合成（三）微生物的抗药性（三）微生物的抗药性(四）应用抗生素注意四）应用抗生素注意(1)第一次使用的药物剂量要足；第一次使用的药物剂量要足；(2)避免在一个时期或长期多次使用同种抗生避免在一个时期或长期多次使用同种抗生素；素；(3)不同的抗生素不同的抗生素(或与其他药物或与其他药物)混合使用；混合使用；(4)对现有抗生素进行改造；对现有抗生素进行改造；(5)筛选新的更有效的抗生素；筛选新的更有效的抗生素；
