1、 酶型 （Isoenzyme)酶型的定义又称同工酶：分子结构不同，但催化同一 生化反应的一组酶。酶型的分类n多位点基因控制的同工酶：如 LDH,PGM。n单位点复等位基因控制的同工酶：如 EAP，EsD。n遗传变异体同工酶：点突变所致。如G6PD。n次级同工酶（修饰同工酶）：脱氨、乙酰化等所致。酶的一些特点n酶的本质是蛋白质n酶促反应的高度专一性：催化特定的底物。n酶反应的最适PHn酶反应的最适温度n酶多为水溶性n酶多不耐热电泳检测酶型的基本原理n传统电泳：等电点、分子大小。n等电聚焦电泳：等电点。n影响电泳的因素：电场强度、缓冲液（PH值、离子强度）、胶浓度、电泳时间、产热等。红细胞酸性磷酸
2、酶（Erythrocyte Acid Phosphatase.EAP)概况 EAP（ACP1）、PAP、ACP2 EAP是第一个被报道具有多态的酶。单亚基结构，基因定位于2P25，等电点为5-7，酶反应的最适PH为5.5。分型 1963年（Hopkinson),Nature杂志上报导EAP可分为A、BA、B、CA、CB五种型。进行了家系调查，有三个共显性等位基因：P(A）、P（B）、P（C）。在东方人群中，常见的基因为：P（A）、P（B）；常见的表型为：A、BA、B。另有多个稀有基因的报导。EAP表型的检测 1、1%琼脂糖凝胶电泳 2、聚丙烯酰胺凝胶电泳 显色：4-甲基伞形酮磷酸盐（EAP）-
3、4-甲基伞形酮（长波紫外灯下）-兰色荧光。磷酸葡萄糖变位酶（Phosphoglucomutase,PGM)概况 PGM1（其基因在1号染色体）PGM2（其基因在4号染色体）PGM3（其基因在6号染色体）PGM4（其基因未详）红细胞中只有PGM1与PGM2，活性各半。PGM3主要在胎盘中。PGM4在哺乳期女性乳汁中。PGM1的等电点为5-7。酶反应最适PH为8。分型 1964年（Spencer),淀粉凝胶电泳，PGM可分出a,b,c,d,e,f,g七条带。分为三型：PGM1（a,c)、PGM2（b,d)PGM2-1(a,b,c,d)。e,f,g几乎每人都一样。1965年（Hopkinson),发
4、现e,f,g带亦存在变异。前者称为 PGM1，由PGM1（1）、PGM2（2）二个共显性等位基因控制，三种常见表型。后者称为PGM2。1976年（Bark)，用等电聚焦电泳，将PGM1分出十种常见的表型。分别由PGM1（1+）、PGM1（1-）、PGM1（2+）、PGM1（2-）四个共显性等位基因控制。PGM1表型的检测 1、淀粉凝胶电泳 2、聚丙稀酰胺凝胶等电聚胶电泳 显色：G1P（PGM、G16P）-G6P（G6PD、NADP）-6PG+NADP2 NADP2+MTT（PMS）-兰色。脂酶D（EsteraseD,EsD）概况 脂酶共有二十余种，可分为特异性脂酶和非特异性脂酶。红细胞中的脂酶
5、有A、B、C、D四种，只有EsD具有多态性。等电点为4-6，酶反应的最适PH5.5。分型 1973年（Hopkinson），分为三种常见表型。由ESD1、ESD2二个共显性等位基因控制。ESD表型的检测 1、1%琼脂糖凝胶电泳 2、等电聚焦电泳 显色：4-甲基伞形酮醋酸盐（ESD）-4-甲基伞形酮（长波紫外灯下）-兰色荧光。乙二醛酶I（GlyoxalaseI,GLOI)概况 双亚基结构，分布广泛，红细胞中活性最高。等电点为4.3左右。酶反应的最适PH为6.5。基因位点与HLA基因毗邻（6P213）。分型 1975年（Kompf）报导，三种常见表型。由GLOI（1）、GLOI（2）二个共显性等位
6、基因控制。GLOI表型的检测 琼脂糖/可溶性淀粉混和凝胶电泳（1/0.7)显色：甲基乙二醛（GLOI、还原型GSH）-氧化型GHS。淀粉+碘-兰色（还原型GSH可使兰色褪掉）。谷丙转氨酶Glutamic Pyruvic Transaminase GPT概况 催化谷氨酸与丙氨酸互换。双亚基结构。酶反应的最适PH为8左右。三种常见表型，由GPT（1）、GPT（2）二个共显性等位基因控制。GPT表型的检测 混合淀粉凝胶电泳 显色：1、丙氨酸（GPT）-谷氨酸（GLD、NADP）-NADPH2（MTT、PMS）-兰色。2、丙氨酸（GPT）-谷氨酸+丙酮酸（LDH、NADH）-乳酸+NAD（无荧光）。血
7、痕酶型检测血痕酶的改变有三方面：1、酶活性丧失（不可逆）。2、潮湿环境下，脱氨，蛋白负电荷增加，无法正确分型（仍有活性）。3、-SH被氧化，形成二硫化合物，可逆性 失活（可用巯基还原剂复活）。0.18M巯基乙醇；0.05M二硫苏糖醇。血清蛋白型Protein Polymorphism结合珠蛋白（Haptoglobin,Hp)概况 糖蛋白，三种常见表型：Hp1-1,Hp2-2,Hp2-1 另有一种变异型为 HP0型，在人群中的比率为0.81-2.32%。等电点为4.1-4.2。Hp表型的检测 5%聚丙烯酰氨凝胶圆盘电泳 标本处理：血清+血红蛋白液+蔗糖 显色：Hp*珠蛋白+联苯胺、过氧化氢-兰色
8、。血痕Hp表型的检测 1、氯仿抽提血痕标本 分三层：上层（Hp-Hb复合物）中层（变性Hb）下层（氯仿）取上层液体加样。2、不连续电泳 上层为4.5%的浓缩胶，下层为8%的分离胶。3、用抗Hp抗体沉淀血痕Hp。型特异性成分(Group Specific Component,Gc)概况 球蛋白，三种常见表型：Gc1-1，Gc2-2，Gc2-1 等电点为4.8-5.1 与维生素D结合，参与钙离子的代谢。与肌动蛋白结合，纤维状球状，防止其在血液中聚合。Gc表型的检测 5%聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳 标本处理：血清+蔗糖（内含溴酚兰）。显色：氨基黑染色 考马斯亮兰染色 银染血痕Gc表型的检测 1、免疫电泳
9、 凝胶电泳后，在胶一侧挖槽，加抗体，形成沉淀弧。2、免疫固定 抗体浸泡电泳后的凝胶，生理盐水洗去全部可溶性蛋白，蛋白染色法染色。转铁蛋白(transferrin,Tf)概况 球蛋白，只有TfC具有多态性，三种常见的表型：TfC 1-1，TfC 2-2，TfC 2-1。等电点为5.5左右。参与铁离子的代谢。TfC表型的检测 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳 标本处理：1、血清+神经氨酸酶 2、血清+硫酸亚铁铵 显色：蛋白染色。Gm(Gamma Chain Marker,Gm)概况 Gm是IgG H链C区上的抗原类型。至少有25种抗原。1956年（Grubb），发现抗D抗体致敏的红细胞与类风湿关节炎患者的血清发生凝集反应，且可被60%正常人的血清抑制。检测方法 1、抗D抗体致敏O型、D阳性红细胞。2、证实红细胞已被致敏（用抗人球蛋白 抗体）3、测抗Gm抗体的效价（节约抗体）。4、血清Gm检测：血清+抗Gm抗体+致敏红细胞 凝集阴性；不凝集阳性
