1、专题专题5 DNA和蛋白质技术和蛋白质技术课题课题1 DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 实验设计实验设计（一）实验材料的选取1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取23种实验材料）2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取23种实验材料）2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更
2、大（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞的破碎：2、植物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。加入洗涤剂和食盐的作用分别是？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等（三）去除滤液中的杂质方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过
3、滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min，嫩肉粉中木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。方案三：将滤液放在60-75的恒温水浴中保温10-15，注意严格控制温度范围。-浓度可使DNA溶解；-浓度可使DNA析出。基础知识基础知识一、DNA的溶解性0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L 2mol/L0.14mol/L二、酒精是一种常用有机溶剂，但-却不能溶于酒精；三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对-没有影响四、大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而-在80以
4、上才会变性DNADNADNA五、洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响（四）DNA的析出与鉴定1、DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液（体积分数为95%），静置23min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。2、DNA的鉴定：取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管
5、中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。六、DNA的鉴定DNA与-（沸水浴加热）会被染成-，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。-二苯胺蓝色甲基绿（绿色）操作提示2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。1.以血液为实验材料，每100ml加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。方法步骤方法步骤 加入物质加入物质 目的目的 1 1.制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 2 2.提取鸡血细胞细胞核物质提取鸡血细胞细胞核物质 20 m120 m1蒸馏水蒸馏水 3 3.溶解细胞
6、核内的溶解细胞核内的DNADNA 2 m12 m1L L 的的NaCINaCI溶液溶液4040mLmL 4 4.析出含析出含DNADNA的黏稠物的黏稠物 蒸馏水蒸馏水 5 5.滤取含滤取含DNADNA的黏稠物的黏稠物 6 6.将将DNADNA的黏稠物再溶解的黏稠物再溶解 2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 7 7.过滤含过滤含DNADNA的的NaCNaCl l 溶液溶液 8 8.提取含有杂质较少的提取含有杂质较少的 DNADNA 冷却的冷却的9595的酒精的酒精50 mL50 mL A A:(1)(1)向试管中加入向试管中加入0 0.015 mol01
7、5 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)(2)加入加入DNADNA (3)4 mL(3)4 mL二苯胺试剂二苯胺试剂 9 9.DNADNA的鉴定的鉴定 B B:(1)(1)向试管中加入向试管中加入0 0.015mol015molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)4 m(2)4 mL L 二苯胺试剂二苯胺试剂 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地释出最大限度地释出 使含使含DN
8、A的黏稠物被留在纱布上的黏稠物被留在纱布上 使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 除去含除去含DNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质 提取提取DNA A出现蓝色出现蓝色 B无变化无变化2、实验中、实验中NaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为2 molL和和0.14 molL对对DNA有何影响有何影响?1、在、在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaCl浓度使浓度使DNA析出析出C.使血细胞破裂、增大使血
9、细胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答：答：B答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出3 3、DNADNA遇二苯胺遇二苯胺(沸水浴沸水浴)会染成会染成()()A.A.砖红色砖红色 B.B.橘黄色橘黄色 C.C.紫色紫色 D.D.蓝色蓝色4、提取鸡血中的、提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液时，为什么要除去血液中的上清液中的上清液?答：答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以，所以要除去上清液要
10、除去上清液(含有蛋白质含有蛋白质)。答：答：D1.怀古思今，激发科技报国热情，科技创新助推中华民族伟大复兴的梦想早日实现2 2、欧共体形成、日本成为经济大国、不结盟运动兴起和中国的振兴，这些共同构成了世界的多极化趋势。、欧共体形成、日本成为经济大国、不结盟运动兴起和中国的振兴，这些共同构成了世界的多极化趋势。3 3、多极化趋势还只是一种趋势和方向，不是一种成熟的国际关系格局。、多极化趋势还只是一种趋势和方向，不是一种成熟的国际关系格局。4 4、两极格局虽然受到多极化的冲击，在当时仍是国际关系格局的总体的、基本的特征，因而多极化趋势是两极格局下的多极化趋势。、两极格局虽然受到多极化的冲击，在当时
11、仍是国际关系格局的总体的、基本的特征，因而多极化趋势是两极格局下的多极化趋势。5 5、苏联解体后，两极格局虽然瓦解，但多极化的世界格局并没有最终形成，直到今天，仍处于向、苏联解体后，两极格局虽然瓦解，但多极化的世界格局并没有最终形成，直到今天，仍处于向.6.这首题画诗写景兼抒情，并未刻意进行雕琢，却能够于简淡中见新奇。这首题画诗写景兼抒情，并未刻意进行雕琢，却能够于简淡中见新奇。7.山水是这幅画的主要元素，特别是江水，占据了画面上大部分的篇幅。山水是这幅画的主要元素，特别是江水，占据了画面上大部分的篇幅。8.诗人透过一扇小窗远距离欣赏这幅画作，领略其表现的辽阔万里之势。诗人透过一扇小窗远距离欣赏这幅画作，领略其表现的辽阔万里之势。9.颈联具体写到苍茫暮色中的树木与浮云，也蕴含了欣赏者的主观感受。颈联具体写到苍茫暮色中的树木与浮云，也蕴含了欣赏者的主观感受。
