1、 血液病诊断分型 定量监测MRD 白血病预后 靶向治疗 耐药及疾病进展监测 范可尼贫血 嗜血细胞综合症等融合基因检测基因突变检测血液遗传病检测大多数情况下，某一患者只有一种融合基因阳性46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21)BM morphology:APL FCM:M3 QPCR:PML/RARA+BCR/ABL(190)+多重巢式RT-PCR 筛查 定性检测 用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因。荧光定量RT-PCR 定量检测 内参基因 c-abl 结果以比值表示，全程动态监测 融合基因的拷贝数/内参基因 c-ablPCR-测序筛查 每月定量监测
2、 3-6月定量监测 每月定量监测 CML慢性粒细胞白血病Ph染色体t(9;22)(q34;q11)ET原发性血小板增多症JAK2 V617F*PV真性红细胞增多症JAK2 V617F*CIMF慢性特发性骨髓纤维化JAK2 V617F*HES特发性高嗜酸性粒细胞白血病FIP1L1-PDGFR4q12缺失CMML慢性粒单核细胞白血病TEL/PDGFR:t(5;12)(q33;p13)*William V,Stefan N.A unique activating mutation in JAK2(V617F)is at the origin of polycythemia vera and allo
3、ws a new classification of myeloproliferative diseases.Hematology.2005,10-13:195-200约95%的CML5%的儿童ALL15%-30%的成人ALLBCR/ABLBCR/ABLJAK2V617FJAK2V617FPV(-)65%-97%(+)纯合子多见少数JAK2V617F(-)12Exon突变ET(-)50%(+)CIMF(-)50%(+)JAK2V617F(-)5%MPL W515L/K(+)Molecular Pathology：the molecular basis of human disease by W
4、illam B.Coleman,Gregory J.Tsongalis激活JAK2基因使细胞对生长因子敏感性增高 PV、ET、CIMF 不是独立的诊断指标 MDS、3%CMMLFISHFISH内参内参缺失缺失预后预后5q-5p15.25q31差7q-7p11.1-q11.17q31差20q-20q12好+88p11-q11MDS转AML的几率为50%-Yq11好分子方面的理论有限，但发现有5q31,7q31，20q12的反复缺失，提示可能这些区域存在肿瘤抑制基因。55%L型5%V型 体外对ATRA的敏感度低 40%S型 低分化M3其他融合基因t(5;17)(q32;q21)t(11;17)(q
5、13;q21)t(11;17)(q23;q21)t(15;17)(q22;q21)PML-RARaPLZF-RARaNPM-RARaNuMA-RARa 95%A(p.E255K)和c.944CT(p.T315I)。WT1表达量检测*约75%AML患者可检测到WT1高水平表达，WT1是AML患者常用的MRD检测标志融合基因定量检测*Current Opinion in Oncology 2010,22:656663WT1 (WT1 (WilmsWilms tumor gene)tumor gene)1.WT1基因在各类型白血病中均能表达(ALL，AML，CML，MDS).2.表达水平与白血病的进
6、程相关，可作为化疗和骨髓移植后MRD检测敏感指标。3.鉴别白血病与反应性白细胞增高。初诊 B-ALL;MLL-AF4 t(4;11)(q21;q23)WT1 (WT1 (WilmsWilms tumor gene)tumor gene)08.80%0.068%90%00.20.40.60.811.21.41.6+59d +96d +106dWT1 MLL-AF4血液学复发 FCM MRD+弟供姐异基因 造血干细胞移植+14d白细胞植活+27d血小板植活嗜血细胞综合征相关基因突变 PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAP LYST、AP3B1、RAB27A范可尼贫
7、血基因突变FANCA 60%、FANCC 15%、FANCG 10%WASP综合征纯红再障 RPS19先天性角化不良 DKC1、NHP2、TERC、TERT、NOP10、TINF2PRF1 10q21-10q22 细胞杀伤功能缺陷 FANCA 16q24.3FANCC 9q22.3 Exon1Exon1Itron4 Itron4 Exon5Exon5Exon6Exon6Exon14Exon14Q13XIVS4+4ATc.637_643delTACCGCCR185XR548XL554PRPS19 19q13.2 hot spot of missense mutations-codons 52 a
8、nd 62常染色体1岁 女 Exon4发现点突变：c.184CT(p.R62W)，其他外显子未发现突变DKC1 Xq28X-连锁隐性7岁 男 DKC1基因Exon11发现错义突变：c.1058CT(p.A353V)PCR Secquence标本要求标本要求EDTAEDTA抗凝、抗凝、快速送达快速送达实验室实验室EDTAEDTA抗凝、抗凝、DNADNA or or cDNAcDNA灵敏度灵敏度最高最高大于大于15-20%15-20%分辨率分辨率bpbpbpbp报告时间报告时间3-53-5天天5-75-7天天Molecular platformMolecular platform 谢谢！17P13-11q22-12 13q14-Simple genetic diagnosis of hairy cell leukemia by sensitive detection of the BRAFV600E mutation 2012 119:192-195
