1、食品中菌落总数和大肠菌群的检测菌落总数与大肠菌群的测定菌落总数与大肠菌群的测定二、二、大肠菌群的检测大肠菌群的检测一、一、菌落总数测定法菌落总数测定法太仓市产品质量监督检验所 主讲人：詹克航主讲人：詹克航 2011.09.15 目前，食品卫生标准中的微生物指标一般分为目前，食品卫生标准中的微生物指标一般分为菌落菌落总数总数、大肠菌群和致病菌大肠菌群和致病菌三项。三项。细菌计数细菌计数 食品中菌落总数通常指食品中菌落总数通常指1g，1ml或或1cm2面积食品上的面积食品上的细菌数目而言的，而不考虑其种类。细菌数目而言的，而不考虑其种类。由于检测计数方法的不同由于检测计数方法的不同,一般有两种表示
2、方法（菌落一般有两种表示方法（菌落总数和细菌总数）。总数和细菌总数）。食品卫生标准中的微生物指标概论食品卫生标准中的微生物指标概论菌落总数:菌落（Colony）菌落菌落(colony)：生长在固：生长在固体培养基上，来源于一个体培养基上，来源于一个细胞，肉眼可见的细胞群细胞，肉眼可见的细胞群体。体。一种是在严格规定条件下（样品处一种是在严格规定条件下（样品处理，培养基及其理，培养基及其pH培养温度与时间、计培养温度与时间、计数方法等），使适应这些条件的每一个数方法等），使适应这些条件的每一个活菌细胞必须而且只能生成一个肉眼可活菌细胞必须而且只能生成一个肉眼可见的菌落，经过计数所获得的结果称为见
3、的菌落，经过计数所获得的结果称为该该食品的菌落总数食品的菌落总数。另一种是将食品经过适当处理（溶解和稀另一种是将食品经过适当处理（溶解和稀释）后，在显微镜下对细菌细胞数进行直释）后，在显微镜下对细菌细胞数进行直接计数，这样计数的结果，既包括活菌，接计数，这样计数的结果，既包括活菌，也包括尚未被分解的死菌体，因此称为也包括尚未被分解的死菌体，因此称为细细菌总数菌总数。目前我国食品卫生标准中规定的细菌总目前我国食品卫生标准中规定的细菌总数实际上是指菌落总数。即指的是在平板数实际上是指菌落总数。即指的是在平板计数培养基上长出的菌落数。计数培养基上长出的菌落数。那么检测食品中的菌落总数有何卫生学意义呢
4、？那么检测食品中的菌落总数有何卫生学意义呢？一方面，它可以作为食品被污染程度的标志。一方面，它可以作为食品被污染程度的标志。检测食检测食品中的菌落总数，可以了解食品在生产中，从原料加工品中的菌落总数，可以了解食品在生产中，从原料加工到成品包装受外界污染的情况从而反映食品的卫生质到成品包装受外界污染的情况从而反映食品的卫生质量。一般来说、菌落总数越多，说明食品的卫生质量越量。一般来说、菌落总数越多，说明食品的卫生质量越差，遭受病原菌污染的可能性越大。而菌落总数仅少量差，遭受病原菌污染的可能性越大。而菌落总数仅少量存在时，病原菌污染的可能性就会降低或者几乎不存在存在时，病原菌污染的可能性就会降低或
5、者几乎不存在。许多实验结果表明，食品中细菌总数能够反映出食许多实验结果表明，食品中细菌总数能够反映出食品的新鲜程度、是否变质以及生产过程的一般卫生状况品的新鲜程度、是否变质以及生产过程的一般卫生状况等。一般来讲，食品中细菌总数越多，则表明该食品污等。一般来讲，食品中细菌总数越多，则表明该食品污染程度越重，腐败变质的可能性越大。染程度越重，腐败变质的可能性越大。另一方面，它可以用来预测食品可能存另一方面，它可以用来预测食品可能存放的期限程度。如实验表明，菌数为放的期限程度。如实验表明，菌数为105cfu/cm2的鱼，在的鱼，在0下可保持下可保持6d，而，而菌数为菌数为103cfu/cm2时，保存
6、期可达时，保存期可达12d。但上述规则也有例外，有些食品成品但上述规则也有例外，有些食品成品的菌落总数并不高，但由于已有细菌繁殖的菌落总数并不高，但由于已有细菌繁殖并已产生了毒素，且毒素性状稳定，仍存并已产生了毒素，且毒素性状稳定，仍存留于食品中；再有一些食品如酸泡菜和酸留于食品中；再有一些食品如酸泡菜和酸乳等，本身就是通过微生物的作用而制成乳等，本身就是通过微生物的作用而制成的，且是活菌制品。的，且是活菌制品。自然界细菌的类很多，各种细菌的生理特性和所要求的生自然界细菌的类很多，各种细菌的生理特性和所要求的生活条件不尽相同，（如嗜温菌活条件不尽相同，（如嗜温菌30-37，4.83hr；嗜冷菌
7、；嗜冷菌 20-25 5-7d或或5-10 10-14d；嗜热菌；嗜热菌 45-55 2-3天）如果要检天）如果要检验样品中所有种类，必须用不同培养基及不同培养条件去满足验样品中所有种类，必须用不同培养基及不同培养条件去满足其要求，才能把各种细菌都检验出来，这样工作量将会很大。其要求，才能把各种细菌都检验出来，这样工作量将会很大。我们也知道，自然界尽管细菌种类很多，但异养、中温、我们也知道，自然界尽管细菌种类很多，但异养、中温、好气性细菌占绝大多数。因此，严格讲，用这种方法所得到的好气性细菌占绝大多数。因此，严格讲，用这种方法所得到的结果，主要是一些能在平板计数琼脂培养基上生长的，好氧性结果，
8、主要是一些能在平板计数琼脂培养基上生长的，好氧性嗜温细菌的菌落总数。但是把它们作为细菌总数已得到公认。嗜温细菌的菌落总数。但是把它们作为细菌总数已得到公认。这不仅在食品的卫生检验中，而且在一切微生物区系分析中，这不仅在食品的卫生检验中，而且在一切微生物区系分析中，都把它们作为了细菌总数的指标。都把它们作为了细菌总数的指标。注意：是并不是所有食品都规定细菌指标，如酸乳、酸泡注意：是并不是所有食品都规定细菌指标，如酸乳、酸泡菜等。菜等。因此，菌落总数的测定对评价食品的新鲜因此，菌落总数的测定对评价食品的新鲜度和卫生质量有着一定的卫生指标的作用，度和卫生质量有着一定的卫生指标的作用，但本能单凭此一项
9、指标来判定食品的卫生但本能单凭此一项指标来判定食品的卫生质量，还必须配合大肠菌群和致病菌等检质量，还必须配合大肠菌群和致病菌等检验，才能作出比较全面、准确的评价。验，才能作出比较全面、准确的评价。选取菌落数在15 CFU150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。未产气者为大肠菌群阴性。修改了菌落总数计算公式中的解释；5氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 高压灭菌15 min。5），用蒸馏水稀释到975 mL，调节pH，再加入0.牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液 200 mL若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘
10、2，代表全平板菌落数。N=C/(n1+0.2 冰箱：2 5。1平板计数琼脂培养基(Plate count agar PCA)，见附录A中A.85生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min10000 r/min均质1min2min，制成1:10样品匀液；琼脂 15 g18 g2 冰箱：2 5。3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，即将每条链作为一个菌落计数。1 琼脂凝固后，将平板翻转，361培养箱内培养48h2h。一般来说、菌落总数越多，说明食品的卫生质量越差，遭受病原菌污染的可能性越大。一、菌落总数测定法一、菌落总数测定法菌落总数（菌落总数（aerobic plate count）食
11、品检样经过处理，在一定条件下培养后食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培养如培养基成分、培养温度和时间、基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等、需氧性质等)，所得，所得1mL(或或1g)检样中形成菌落的总数。本标准规定的培检样中形成菌落的总数。本标准规定的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。本标准与本标准与GB/T 4789.22008相比主要修改如下相比主要修改如下 修改了标准的中英文名称；修改了标准的中英文名称；(食品安全国家标准食品安全国
12、家标准 食品微生物学检验食品微生物学检验 菌落总数测定菌落总数测定/食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 菌落总数测定菌落总数测定)修改了菌落总数计算公式中的解释；修改了菌落总数计算公式中的解释；修改了培养基和试剂；修改了培养基和试剂；删除了第二法删除了第二法 菌落总数菌落总数PetrifilmTM 测试片法。测试片法。(培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂；培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂；菌落总数计算公式进行了修改；菌落总数计算公式进行了修改；增加了第二法增加了第二法“菌落总数菌落总数PetrifilmTM测试片测试片法法”；)2008 3.1恒温培养箱361 301。3.2冰箱25。3.
13、3恒温水浴箱461。3.4天平感量0.1g。3.5 均质器3.6 振荡器3.7无菌吸管1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及其吸头。3.8无菌锥形瓶容量为250mL、500mL。3.9无菌培养皿直径为90mm。3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11放大镜或/和菌落计数器或PetrifilmTM自动判读仪。3.12无菌刀、剪子、镊子等。4.1平板计数琼脂培养基平板计数琼脂培养基(Plate count agar PCA)，见附录见附录A中中A.1。pH 7.00.2 4.2磷酸盐缓冲稀释液，见附录磷酸盐缓冲稀释液，见附录A中中A.2。pH 7.24.
14、3 无菌生理盐水无菌生理盐水,见附录见附录A中中A.3 称取称取8.5g氯化钠溶于氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，蒸馏水中，121高压灭菌高压灭菌15min。(4.4 1 mol/L 氢氧化钠（氢氧化钠（NaOH）称取）称取40g氢氧化钠溶氢氧化钠溶于于1000mL水中。水中。4.5 1 mol/L 盐酸（盐酸（HCl）移取浓盐酸）移取浓盐酸90mL，用蒸馏，用蒸馏水稀释至水稀释至1000mL 4.6 PetrifilmTM菌落总数测试片（菌落总数测试片（aerobic count plate）和压板。）和压板。)4.7 75%乙醇。乙醇。区别：区别：pH值（值（08：pH 7.00.2；03
15、：pH 7.27.4）细细 菌菌 学学 检检 验验 程程 序序-细菌总数细菌总数 5、第一法第一法 平板菌落计数法平板菌落计数法 6.1.1固体和半固体食品以无菌操作称取固体和半固体食品以无菌操作称取25g样样品，放入于装有品，放入于装有225 mL磷酸盐缓冲稀释液或磷酸盐缓冲稀释液或0.85生理盐水的无菌均质杯内，于生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min10000 r/min均质均质1min2min，制成，制成1:10样品匀液；样品匀液；或放入于或放入于225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打式均质器拍打1min2min制成制成1:10的样品匀液
16、。的样品匀液。6.1.2液体样品以无菌吸管吸取样品液体样品以无菌吸管吸取样品25mL放入放入装有装有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充中，充分混匀，制成分混匀，制成1:10的样品匀液（表面取样的样品的样品匀液（表面取样的样品按一定的比例制成按一定的比例制成1:1样品匀液和样品匀液和/或或1:10样品匀样品匀液。）。液。）。另一方面，它可以作为肠道致病菌污染食品的指标菌。4 27 11 5 270 270或2.将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。每个稀释度的菌落数应采用两个平板
17、平均数。3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。1 1,365 164 20 16，400 16，000或1.1 选取2个3个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。5 无菌落 无菌落 无菌落 1 10 300 或 30 取最接近的 X 稀释倍数7无菌吸管1mL（具0.每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤/乳糖胆盐发酵管，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），361 培养24 h2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h2 h产气者进行
18、复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h2 h，产气者进行复发酵试验。中性红 0.经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.4另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，如此每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。修改了标准的中英文名称；1 琼脂凝固后，将平板翻转，361培养箱内培养48h2h。如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。选取菌落数在15 CFU150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。6.1.3用用1mL无菌吸管或微量移液器吸取无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀样品匀液液1.0 mL，沿管壁缓慢注
19、于装有，沿管壁缓慢注于装有9mL稀释液的无菌试稀释液的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样的样品匀液。品匀液。6.1.4另取另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做操作顺序，做10倍递增样品匀液，如此每递增稀释一次，倍递增样品匀液，如此每递增稀释一次，即换用即换用1次次1mL灭菌吸管或吸头。灭菌吸管或吸头。6.1.5根据对样品污染情况的估计，选择根据对样品污染情况的估计，选择23个适宜个适宜稀
20、释度的样品匀液（液体样品可包括原液），分别在做稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），分别在做10倍递增稀释的同时，吸取倍递增稀释的同时，吸取1.0 mL样品匀液于无菌平样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时分别取皿内，每个稀释度做两个平皿。同时分别取1mL稀释液稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。加入两个无菌平皿作空白对照。6.1.6样品匀液移入平皿后，应及时将凉至样品匀液移入平皿后，应及时将凉至46平板平板计数琼脂培养基计数琼脂培养基(可放置于可放置于461恒温水浴箱中保温恒温水浴箱中保温)注入平皿约注入平皿约15mL20mL，并转动平皿使混合均匀。，并转动平皿使混合均匀。同时将平
21、板计数琼脂培养基倾入加有同时将平板计数琼脂培养基倾入加有1.0 mL空白稀释空白稀释液的无菌平皿内作对照。液的无菌平皿内作对照。6.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，琼脂凝固后，将平板翻转，361培培养箱内培养养箱内培养48h2h。水产品采用。水产品采用301培培养养72h3h(08新增新增)。6.2.2 琼脂凝固后，如果怀疑样品中含有在琼脂琼脂凝固后，如果怀疑样品中含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在表面覆盖一培养基表面弥漫生长的菌落时，可在表面覆盖一薄层琼脂培养基（约薄层琼脂培养基（约4mL），并在报告上记录该），并在报告上记录该操作，待覆盖层凝固，翻转平板，按操作，待覆盖层凝固，翻转
22、平板，按6.2.1条件条件进行操作进行操作 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录相应的菌落数量和稀释倍数。菌落计数器，记录相应的菌落数量和稀释倍数。菌落计数以菌落形成单位（以菌落形成单位（colony forming units,CFU）表示。表示。6.3.1平板菌落数的选择平板菌落数的选择 选取菌落数在选取菌落数在30CFU300CFU个之间、无个之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU个菌落的平板记录具体菌落数，大于个菌落的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应
23、采的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板平均数。用两个平板平均数。6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘平板后乘2，代表全平板菌落数。，代表全平板菌落数。6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，即将每条链作为一个菌落计数。如有链生长
24、时，即将每条链作为一个菌落计数。如有链状菌落生长时状菌落生长时(菌落之间无明显界线菌落之间无明显界线)，若仅有一，若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。链，则应将每条链作为一个菌落计。1、平皿分、平皿分4部分点数（见图）部分点数（见图）2、求同一、求同一稀释度的平均菌落数稀释度的平均菌落数 如：如：A1数数 +A2数数 26.4、菌落计数方法、菌落计数方法 1.若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀
25、释倍数，作为每个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（毫升）中菌落总数结果。克（毫升）中菌落总数结果。（见表例（见表例1）。）。2.若有两个连续稀释度在适宜计数范围内（若有两个连续稀释度在适宜计数范围内（30300个菌落）个菌落）时，按如下公式计算时，按如下公式计算 N=C/(n1+0.1n2)d 式中式中 N 样品中菌落数；样品中菌落数；C 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1 第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2 适宜范围菌落数的第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；适宜范围菌落数的第二
26、稀释度（高稀释倍数）平板个数；d 稀释因子（第一稀释度）；稀释因子（第一稀释度）；7.结果的表述结果的表述7.1菌落总数的计算方法：菌落总数的计算方法：示例示例 稀释度稀释度 1:100（第一稀释度）（第一稀释度）1:1000（第二稀释度）（第二稀释度）菌落数菌落数 232，244 33，35 N=C/(n1+0.1n2)d(232+244+33+35)/(2+0.12)102=544/0.022=24727 上述数据经上述数据经“四舍五入四舍五入”后，表示为后，表示为25000 或或 2.5104。3.若所有平均菌落数均大于若所有平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平，则应按稀释度最高
27、的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例4）。）。4.若所有稀释度的平均菌落数均小于若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例（见表例5）5.若所有稀释度的平均菌落数均不在若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一之间，其中一 部分大于部分大于300或小于或小于30时，则以最接时，则以最接近近30或或300的平均菌的平均菌 落数乘以稀释倍数报告之落数乘以稀释倍数报告之 （见表例（见表例6）。）。6.若所有稀释度的菌落数均不可计数，则以若所有稀释度的菌落数均
28、不可计数，则以最高稀释倍数无法计数最高稀释倍数无法计数 报告之（见表例报告之（见表例7）。）。8000 r/min10000 r/min 均质1 min2 min,或放入盛有225 mL 磷酸一方面，它可以作为食品被污染程度的标志。许多实验结果表明，食品中细菌总数能够反映出食品的新鲜程度、是否变质以及生产过程的一般卫生状况等。6.若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2，代表全平板菌落数。2 取较小稀释倍数取较小稀释倍数；300 最高稀释度平均菌落数最高稀释度平均菌落数 X 最高稀释倍数最高稀释倍数 4、300 或或 30 取最接近的取最接近的 X 稀释倍
29、数稀释倍数 6、无法计数无法计数 报告无法计数报告无法计数 稀释度选择及细菌总数报告方法（表稀释度选择及细菌总数报告方法（表7）稀释液及菌落数稀释液及菌落数 10-1 10-2 10-3 1 1,365 164 20 16，400 16，000或或1.6104 2 2,760 295 46 37，750 3.1000或或3.1103 2,890 271 60 27，100 3 不可计不可计 4，650 513 513，000 510，000或或5.1 105 4 27 11 5 270 270或或2.7 102 5 无菌落无菌落 无菌落无菌落 无菌落无菌落 1 10 2 取较小稀释倍数；增加了
30、第二法“菌落总数PetrifilmTM测试片法”；3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1.7 1 mol/L HCl若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例5）氯化钠 5.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。3 恒温水浴箱：46 1。实际上包括埃希氏菌属、柠檬酸细菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等，其中以埃希氏菌属为主，称为典型大肠杆菌，其它三属称为非典型大肠杆菌。食品卫生标准中的微生物指标概论用蒸馏水补足到1 000 mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。3 恒温水浴箱：46 1。1mL刻度）或微量移液器及
31、其吸头。2,890 271 60 27，100嗜冷菌 20-25 5-7d或5-10 10-14d；3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。由于检测计数方法的不同,一般有两种表示方法（菌落总数和细菌总数）。3 无菌生理盐水,见附录A中A.食品中菌落总数和大肠菌群的检测10-1 10-2 10-3蒸馏水 1 000 mL5.2 2,760 295 46 37，750 3.2 冰箱：2 5。若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2，代表全平板菌落数。若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均
32、匀，即可计算半个平板后乘2，代表全平板菌落数。二、食品微生物学检验 大肠菌群计数每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤/乳糖胆盐发酵管，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），361 培养24 h2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h2 h，产气者进行复发酵试验。5 大肠菌群平板计数的报告85生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min10000 r/min均质1min2min，制成1:10样品匀液；一种是在严格规定条件下（样品处理
33、，培养基及其pH培养温度与时间、计数方法等），使适应这些条件的每一个活菌细胞必须而且只能生成一个肉眼可见的菌落，经过计数所获得的结果称为该食品的菌落总数。1 琼脂凝固后，将平板翻转，361培养箱内培养48h2h。一般来讲，食品中细菌总数越多，则表明该食品污染程度越重，腐败变质的可能性越大。水产品采用301培养72h3h(08新增)。3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。另一种是将食品经过适当处理（溶解和稀释）后，在显微镜下对细菌细胞数进行直接计数，这样计数的结果，既包括活菌，也包括尚未被分解的死菌体，因此称为细菌总数。食品卫生标准中的微生物指标概论11放大镜或/和菌落计数器或PetrifilmTM自动判读仪。
