1、精品课件 中南大学湘雅二医院 邓军卫生物安全系列讲座23.1.92生物安全生物安全 大致分为三个方面：大致分为三个方面：一.指人类的健康安全；二.指人类赖以生存的农业生物安全；三.指与人类生存有关的环境生物安全 广义生物安全涉及到多个学科和领域：医学、环境保护、植物保护、野生动物保护、生态、农药、林业等，而管理工作分属各个不同的行政管理部门23.1.93实验室特点实验室特点实验室实验室 是人类认识自然，利用自然界中与人 类生产生活相关的(物理、化学、生物、辐射等各种)因素，按照科学规律经特殊技术进行 实验研究活动的场所特特 点：点：1.多专业、多部门 2.接触的有毒有害物质繁多 3.对实验人员
2、产生各种危害 4.专业性强，管理难度大23.1.94 应根据各种实验室的专业特点及接触的有害因子进行分类管理，采取不同的安全防护措施，但其消防工作具有共同性(如:防火、防盗、防水)，实验室的安全防护主要有：1.生物安全防护 2.化学物品安全防护 3.压力、放射（辐射）安全防护 4.动物安全防护，实验室安全管理范围实验室安全管理范围23.1.95泄漏n1967年德国马尔堡病毒实验室感染事件n1979年前苏联斯维尔德洛夫斯克炭疽菌泄漏事件n新加坡实验室sars感染事件nH2N2流感病毒样本风波23.1.96中国疾病预防控制所实验室中国疾病预防控制所实验室实验人员感染非典病毒事故实验人员感染非典病毒
3、事故 2004年4月中国CDC腹泻病毒室两名研究生在做病毒实验时感染sars 病毒（后患者又引发北京与安徽各1人感染）,事故系实验人员多次违规将未完全灭活的sars病毒从P3实验室带出至普通实验室操作而引起台湾实验人员感染非典病毒事故台湾实验人员感染非典病毒事故 2003年12月台湾一位实验人员在P4实验室做病毒实验时，因清理废弃物操作疏忽，安全程序处理不当而感染病毒23.1.97 发生事故的后果发生事故的后果安全事故安全事故受伤者感染受伤者感染 发病发病 死亡死亡痊愈痊愈 发病发病家庭传播社会传播医院内传播同事、好友 亲朋医护人员23.1.98实验室获得性感染的因素n80%是不明原因的感染n
4、20%原因明确,其中:80%工作操作失误引起,20%是设备故障引起.n导致感染最多的4种实验室事故:1.溢出和泼洒2.针头和注射器3.锐器碎玻璃4.动物或动物体外寄生虫咬伤或抓伤23.1.99生物安全防护原则n实质:通过规范的实验室设计建造、实验设备的配置、个人防护装备的使用（硬件），严格遵从SOPSOP及管理制度和规程（软件）n确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害n确保周围环境不受其污染n确保实验因子保持原有本性所采取综合措施的实验室 23.1.910 生物安全实验室安全管理体系的建立生物安全实验室安全管理体系的建立 安全管理手册安全管理手册 “程序文件程序文件”（组）、（族）（
5、组）、（族）工作文件（族）、（手册）工作文件（族）、（手册）-1 标准操作规程标准操作规程 -2 制式表格、记录表格等制式表格、记录表格等-1-223.1.911实验室制度、生物安全规范、手册实验室制度、生物安全规范、手册23.1.912生物安全实验室生物安全实验室(BSL)三项技术及措施n样品隔离技术（机械、气幕），防止传染因子 进入环境接触人体n定向流技术（三级负压系统），防止传染因子 扩散n消毒灭菌技术（物理、化学），灭活传染因子23.1.913一级屏障23.1.914二级屏障(secondary barrier)生物安全实验室和外部环境的隔离 23.1.915生物安全实验室生物安全实验
6、室n生物安全防护水平 BSL 1-4(Biosafety level)n物理屏障水平(Physical Containment)P1、P2；P3、P423.1.916从事病原微生物操作遵循原则从事病原微生物操作遵循原则、所有操作人员必须经过培训，通过考核(获得上岗证书)、对所从事的病原微生物及相关操作进行危险评估并制定防护措施、熟悉实验室运行规则，正确操作和使用仪器和设备、掌握各种感染性物质操作准则和技术要点23.1.917门禁制度23.1.918病原微生物根据危害不同分为四类(条例)I I类病原微生物:指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物 以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物 II
7、II类病原微生物:指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直 接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间 传播的微生物。IIIIII类病原微生物:指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下 对人动物或者环境不构成严重危害，传播风险 有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且 具备有效治疗和预防措施的微生物。IVIV类病原微生物:是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病 的微生物23.1.919生物安全实验室的分级生物安全实验室的分级实验室实验室分级分级处理对象处理对象危险危险等级等级BSL-1BSL-1对人体和环境危害较低，不会引发健康成人疾病 级(GB/WHO)四类(条例)BSL-2BSL-2对
8、人体和环境有中等危害或具有潜在危险的致病因子级三类BSL-3BSL-3主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致命疾病的致病因子，通常有预防治疗措施 级二类BSL-4BSL-4对人体有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明的微生物，尚无预防治疗措施 级一类23.1.92023.1.921 病原微生物实验室的生物危险病原微生物实验室的生物危险n气溶胶(aerosol)：固体或液体微粒稳定地悬浮于气体介质中 形成的分散体，粒径一般为0.001100mn微生物气溶胶(microbial aerosol)：微粒中含有微生物n感染性气溶胶(infectious aerosol)：微粒中含有致病微生物
9、n飞沫(droplet)：由于动物打喷嚏、咳嗽等产生的以唾液、粘 液和微生物等为主要成分的气溶胶n飞沫核(deoplet core)：当飞沫中的水分蒸发后剩余的粘液蛋 白和微生物等 飞沫有90以上的直径小于5m，飞沫核的直径一般为12m，均能长期飘浮在空气中，是引起动物疾病传播的重要途径23.1.922气溶胶粒子的大小不同，经呼吸气溶胶粒子的大小不同，经呼吸 道到达体内的深度和归宿不同道到达体内的深度和归宿不同 粒 径n10m，一般被阻留在鼻腔内n510m，可到达支气管n5m，可进入细支气管和肺泡 气溶胶粒子越小，进入的部位就越深：n1m的在肺泡内沉积率最高n0.4m的粒子能较自由地进出肺泡并
10、可随呼气排出体外，沉积较少23.1.923有可能产生微生物气溶胶的操作有可能产生微生物气溶胶的操作n 离心n 组织研磨n 混合培养液（用移液管反复吹吸混合）n 真空抽滤n 使用匀浆器、摇床和超声处理器23.1.924实验室中有可能产生微生物气溶胶的操作n 打开装有冻干物的安瓿管n 收集微生物培养物n 热的接种环放在菌液或菌苔上（推荐使用一次性接种环）n 液体从吸管掉落到工作台面上n 从吸管中将最后一滴液体吹出（推荐使用不需要吹出最 后一滴液体的移液管）n 磨口瓶子打开瓶塞时（推荐使用螺口瓶）n 快速地脱实验服23.1.925临床实验室相关生物危险等级分布临床实验室相关生物危险等级分布23.1.
11、926一一、生物安全实验室生物安全实验室 个人防护装备必要性个人防护装备必要性 个人防护装备（PPE）是指用于防止工作人员受到物理、化学及生物等有害因子伤害的器材和用品。在操作感染性材料时采取科学合理的个人防护对避免实验室相关感染非常必要和有效，因为：1.感染性材料实验室操作难免溢洒，发生身体暴露；2.任何物理防护设备的保护功能都有一定限度，都不是绝对的；3.实验室生物安全防护是一项受制于多环节多因素的系统工程，在长期的运转中难免有意外发生，此时个人防护就是保障安全的关键23.1.927 1.1.BSLBSL1 1 实验室实验室n工作人员在实验时应穿工作服n戴手套（不得戴着手套离开实验室）n必
12、要时戴防护眼镜23.1.928BSL-1生物安全防护 适用于实验对象已知对健康成年人无致病作用，对实验室工作人员和环境的潜在危害很小。举例：n 枯草芽孢杆菌n Naegleria gruberi（耐格里原虫）n 大肠杆菌23.1.929n符合BSL1的要求n在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，离开时防护服必须留在实验室内；用过 的工作服应先消毒，再统一洗涤或丢弃n接触感染材料、污染的表面或设备应戴两副手套 2 2.BSLBSL2 2 实验室实验室23.1.930BSL-II生物安全防护 适用于实验对象对人和环境具有中等潜在危害，举例：n 沙门氏菌n 麻疹病毒、EV71n 弓形虫n 乙肝病毒含
13、有效的疫苗或抗生素治疗有效*特别要警惕污染的针头或者锐器23.1.931BSL-2实验室布局23.1.932n一次性手套不得重复使用n不能在BSC中进行的操作，必须采取外部操作时，为防止感染性材料溅出或雾化危害，必须使用面部保护装置（如：护目镜、面罩、个体呼吸保护用品或其他防溅出保护设备）BSL2实验室23.1.9333.BSL-3实验室n符合BSL2的要求n使用个体防护设备：在进行感染性组织培养或可 能产生感染性气溶胶的操作时n使用呼吸保护装置：当不能安全有效地将气溶胶限 定在一定范围内时n可再次使用的工作服必须先消毒后清洗23.1.934BSL-III生物安全防护 适用于实验对象是通过呼吸
14、途径（气溶胶）使人感染导致严重的甚至是致死性疾病的感染性材料；例如：结核杆菌 SARS病毒 狂犬V（街毒）H5N1等23.1.935BSL-3 实验室平面示意图-30Pa 主实验室（-40Pa)半污染区(-20Pa)内更衣室（-10Pa)缓冲间(-10pa)女外更衣室洗消间安全通道男外更衣室外走廊缓冲间淋浴间淋浴间23.1.936BSL3实验室清洗室男淋浴更衣室女淋浴更衣室细胞、毒株保存室实验室公共区实验室实验室实验室空调机房门厅监控室换鞋脱外衣-40-30-20-40-40-10-0-0-0-000-30-30-0平面布局23.1.937n工作时必须戴两付手套为宜，一次性手套必须先消毒后再丢
15、弃n在实验室中必须备有效的消毒剂、清洗剂生理盐水及应急药品BSL3实验室23.1.938n在使用传染性物质或已被污染的仪器时，必需戴手套n严禁带着手套离开BSL-3实验室，离开BSL-3实验室的所有物品必须正确消除污染，并放在干净的容器中BSL3实验室23.1.939n对有可能溅出或喷出传染性物质、危险试剂时，需使用面部和眼部防护器具n有的操作不能在BSC内处理时，要组合使用适当的操作防护设备（如面罩、呼吸器）或物理容器设备BSL3实验室23.1.940n符合BSL3的要求n所有工作人员进入BSL4实验室时都必须换上全套实验室服装（包括内衣、内裤、衬衣或连衫裤、鞋和手套等）；工作后脱下所有保护
16、服，淋浴后才能离开实验室n所有感染性材料的操作，必须在BSC-IIIBSC-III中进行，如果穿着整体的由生命维持系统供气的正压工作服，则可在B-II型BSC中进行4.BSL4 实验室23.1.941BSL-IV生物安全防护n实验对象是非常危险和新的感染性材料，有暴露于通过气溶胶传播或者传播途径不明确的致病菌潜在可能,感染可能致死 例如：n埃波拉病毒n黄热病n马尔堡病毒青猴病23.1.942n与动物接触（传染性灵长类动物）时，应考虑其粘膜暴露对人的感染危险，要戴防护眼镜和面部防护器具（如：护目镜、面罩、个体呼吸保护用品等防溅出保护设备）BSL4实验室23.1.943n进行易产生高危险气溶胶的操
17、作时（体液的收集、动物接种）要同时使用生物安全柜或物理防护设备和个人防护器具n当不能安全有效地将气溶胶限定在一定范围内时，应使用呼吸保护装置BSL4实验室23.1.944 不同类别的BSL-4实验室 个人防护装备有所不同*BSC型BSL-4实验室：个人防护装备同BSL-3 *防护型BSL-4实验室：个人防护装备配备正压防护服*混合型BSL-4实验室：个人防护装备是前两项的组合BSL4实验室23.1.945 在BSL，主要是保护实验人员免于暴露的生物危害物质（气溶胶、喷濺物以及意外接种）等危险的一种物理屏障 23.1.946防护部位包括防护部位包括 眼睛、头面部、躯体、手、足、耳（听力）、呼吸道
18、防护装备包括防护装备包括 眼镜（安全镜、护目镜）、口罩、面罩、防毒面具、帽子、防 护衣(实验服、隔离衣、连体衣、围群)、手套、鞋套、听力保 护器等23.1.947穿戴个人防护装备的顺序穿戴个人防护装备的顺序戴口罩戴帽子穿防护服戴防护眼镜穿鞋套戴手套23.1.948 脱卸个人防护装备的顺序脱卸个人防护装备的顺序外层手套面罩或面罩或防护眼镜隔离衣防护帽鞋套（可再戴新手套）（可再戴新手套）口口罩或防毒面具罩或防毒面具内层手套23.1.949（一）（一）眼睛防护装备眼睛防护装备1、安全眼镜、护目镜n 达到防护的目的（物理、化学和生物因素）n 在进行有可能发生化学和生物污染物质溅出的实 验时，必须佩戴护
19、目镜n 有潜在爆裂的反应和使用或混合强腐蚀性和强酸 溶液时，必须佩戴面罩或同时佩戴面罩和护目镜 或安全眼镜n 不得戴眼镜防护装备离开实验室区域 23.1.950 安全眼镜 安全护目镜23.1.951建议：在生物安全实验室中工作时，不要配戴隐型眼镜（长发必须束在脑 后，操作人员不佩戴戒指、手镯、腕表、耳环 等）安全眼镜 对某些特殊的操作如腐蚀性液体喷 溅出或细小颗粒飞溅出时还不够安全 23.1.952 眼镜配戴和卸下方法如：*使用酸类溶液洗涤玻璃器皿、碾磨物品 *在使用玻璃器皿进行极具爆裂或破损危 害（如在压力或温度突然增加或降低情况下）的实验操作时 -有必要保护整个面部和喉部，应该佩戴护目镜(
20、或面罩)23.1.9532、洗眼装置 GB19489-2008 规定:BSL-2应配备 紧急洗眼装置 （当腐蚀性液体或生物危害液体喷溅至眼睛时）用大量缓流清水冲洗眼睛表面至 少15-3023.1.954UMDNJ-USA23.1.955 洗眼装置-要求 1、洗眼装置应安装在室内明显和易取的 地方，并保持洗眼水管的通畅，便于 工作人员紧急时使用 2、工作人员应掌握其操作方法 23.1.9563.淋浴装置和应急消毒喷淋装置淋浴装置和应急消毒喷淋装置 GB19489-2008 没有规定：BSL-2应设置应急喷淋装置、BSL-3应 (在清洁区）设置淋浴装置和应急喷淋装 置(在半污染区)要求：保持管道的
21、通畅、必须告知工作人员应 急消毒喷淋装置的摆放位置、培训其操 作方法 23.1.957 在使用中，可用大量冷水淋洗污染的部位，淋洗时间至少需要20；如果为化学物品溅出污染，用大量急水冲洗 使用紧急淋浴装置后，必须立刻填写事故报告单，并立即报告主管领导 23.1.958UMDNJ-USA23.1.959UMDNJ -USA23.1.960Decontaminating Shower23.1.961（二）（二）头面部防护装备头面部防护装备 1.1.口 罩 仅可以保护部分面部免受生物危害物质（如血液、体液、分泌液以及排泄物等喷溅物）的污染 仅适用于仅适用于:BSL-1BSL-1或或BSL-2BSL-
22、2 中使用中使用 23.1.962 一般在使用时可同时佩戴面罩，以组 合使用的方法保护整个面部,注意：单独使用不能对工作人员提供保护 正确佩戴和卸下外科口罩示意图 23.1.963 2.防护面罩 n对整个脸部进行防护：使用一种标准的防 护面罩或使用口罩加护目镜 注注 意：意：n在使用防护面罩时常常同时佩带安全镜或护目镜或口罩在使用防护面罩时常常同时佩带安全镜或护目镜或口罩n实验完毕后必须先摘下手套，后用手卸下防护面罩实验完毕后必须先摘下手套，后用手卸下防护面罩23.1.964 防护面罩23.1.9653.防 护 帽 在生物安全实验室中佩戴防护帽可以保护工作人员避免化学和生物危害物质飞溅至头部所
23、造成的污染 要求：工作人员在实验操作时应佩带防护帽 一次性简易防护帽 23.1.966(三)呼吸防护装备 当实验室操作不能安全有效的将气溶胶限 定在一定的范围内，要求使用呼吸防护 装备 呼吸防护的有效装备-防护面具（面 具、个人呼吸器和正压防护服）使用范围：使用范围：在进行高度危险性的操作时 根据危险类型来选择防毒面具 23.1.967 佩戴时选择合适和合格的防毒面具 遮盖住鼻子、口和下颚 用橡皮筋（松紧带）固定在头部 调整在合适的面部位置并加以检验 吸气时防毒面具应该有塌陷状 呼气时在面具周围不应该漏气1.一次性防护具使用要点23.1.968注意：一次性防毒面具使用完毕后应 先消毒再丢弃卸下
24、口罩时：首先提起面具下方松紧带越过头部，然后提起面具上方松紧带使面具脱离面部23.1.969 罩式防毒面具及其佩戴方式 23.1.970 正压防护服 全罩式防毒具23.1.971 2.2.正压面罩 也称头盔正压式呼吸防护系统，除对呼吸系统防护外，还可提供眼睛、面部和头部防护n正压呼吸防护系统：包括普通头盔、安全帽头盔正压呼吸防护系统：包括普通头盔、安全帽头盔n双管供气式呼吸防护系统：前置式、背置式、全、半面具双管供气式呼吸防护系统：前置式、背置式、全、半面具n电动式呼吸防护系统：包括电动式送风过滤系统、电动式送电动式呼吸防护系统：包括电动式送风过滤系统、电动式送 风防尘系统；其可提供高等级安全
25、防风防尘系统；其可提供高等级安全防 护，电动送风无呼吸阻力，无压缩空护，电动送风无呼吸阻力，无压缩空 气管限制活动空间气管限制活动空间23.1.972正压面罩23.1.973(四四)手部防护装备（手套）（手套）1、手套应在实验室工作时使用 2、在接触感染性物质(如:血液、体液、分泌液、渗出 液)以及接触粘膜和受损皮肤时，必须使用 合适的手套以避免受到损害3、一次性手套不得重复使用，手套被污染时尽 早脱下，消毒后丢弃23.1.9744、应按所从事操作的性质配戴使用合适 的手套(强酸、碱、有机溶剂、冷热和生物危害物质)5、实验前的配戴、检查（是否退色、穿孔或 有裂缝）及使用后的摘除23.1.975
26、 手套的使用 a.一般情况下，佩戴一副手套即可 （BSL-1实验室）b.若在BSC中操作感染性物质时应该佩戴 两副手套（BSL-2和BSL-3实验室）23.1.976聚氯乙烯手套 c.在操作中，外层手套被污染立即用消毒 剂喷洒手套，脱下后丢弃在BSC中的高压灭菌袋中,立即戴上新手套继续实验 d.戴好手套后应完全遮住手及腕 部，必要时可覆盖实验服袖 23.1.977 手套的清洗和更换a.一次性手套使用后，不可再次使用,并经高压灭菌后丢弃b.不得戴着手套离开实验区域c.在脱去手套之前，应该用自来水或肥皂加以彻底清洗、摘除并消毒（BSL-1实验室）；脱去手套后,拉下袖口将手遮住 23.1.978a.
27、戴手套的手避免触摸鼻子、面部和避免触摸其他个人防护装备（如眼镜、灯开关、门或把手）b.如果手套撕破应该脱去，在换戴新手套前应清洗手部，尽量不去触摸工作台面和其他物品c.工作中保持戴手套状态并选择正确尺寸的手套，将手套口遮盖实验服袖；戴手套的手要远离面部 避免手套“触摸污染”（戴手套注意要点）23.1.979 脱手套的注意要点 用一手捏起另一近手腕部处的手套外缘,将手套从手上脱下并将手套外表面翻转入内；用戴着手套的手拿住该手套；用脱去手套的手指插入另一手套腕部处内面；脱下该手套使其内面向外并形成一个由两个手套组成的袋状；丢弃在高温消毒袋中并进行消毒处理 23.1.98023.1.981 洗 手
28、根据(GB 19489-2008）要求:n安装洗手装置：脚控、红外控制的洗手池或配 置酒精擦手器 n要经常洗手，减少有害物质侵害的有效措施 a）在处理活体病原材料或动物等生物危害物质后 b）在脱去手套之后和离开实验室之前 c）在脱卸个人防护装备时发生手部的污染时 d）在继续脱卸其他个人防护设备之前 23.1.982(五)身体防护装备 防护服-实验服、隔离衣、连体衣、围 裙以及正压防护服n在实验室中工作人员应该一直或持续穿上防护服n清洁的应放置在专用存放处n污染的应放置在有标志的防漏消毒袋中n每隔适当的时间应更换防护服n被危险材料污染的应立即更换n离开实验室区域之前应脱去防护服 23.1.983
29、实验服 隔离衣 连体防护 23.1.984n实验服（BSL-1 Lab）-前面能完全扣住n隔离衣和连体衣（BSL-2、BSL-3 Lab）-当有可能发生危险物质喷溅时，应该 在实验服或隔离衣外面再穿上塑料高 颈保护的围裙 禁止在实验室中穿短袖衬衫、短裤或短裙!23.1.985隔离衣穿戴方式 23.1.986隔离衣脱去方式 23.1.987n 正压防护服（BSL-4 Lab）a、具有内置式或外置式生命支持系统（超量清 洁呼吸气体的正压供气装置）b、防护服内气压相对周围环境为持续正压23.1.988正压防护服23.1.989BL4 Labs23.1.990(六)足部防护装置 n BSL-2BSL-
30、2和和BSL-3BSL-3实验室实验室 要坚持穿鞋套或靴套n BSL-3BSL-3和和BSL-4BSL-4实验室实验室 要求使用专用鞋 禁止在生物安全实验室中穿禁止在生物安全实验室中穿 凉鞋、拖鞋、露趾和机织物鞋面的鞋凉鞋、拖鞋、露趾和机织物鞋面的鞋 ！23.1.991使用方法示意图 23.1.992(七)听力防护装备 御寒式防噪音耳罩 一次性防噪音耳塞23.1.993五、个人防护用品的去污消毒n塑料（不耐热的可用过氧乙酸，环氧乙烷）、橡胶手套、布制品n使用中的手套n正压服和正压面罩（环氧乙烷、H2O2）n鞋 袜23.1.994六、工作人员的自我防护意识n在实验室内必须穿着反背衣、连体衣、隔离
31、服或工作服（BSL-1和BSL-2）n在进行可能直接或意外接触到感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套；手套用后，应先消毒再摘除，灭菌处理（BSL-3和BSL-4）n在离开实验室工作区域前，都必须洗手23.1.995n必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备，防止受到泼溅物或人工紫外线辐射的伤害n在实验室内不穿露脚趾的鞋子n只在实验室区域穿着实验室防护服23.1.996n禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜n在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内n所有污染废弃物在处理之前先高压灭菌n工作人员每年接受对规程更改部分的知识更新和追加培训 23.1.997七、实验室感染可控制的条件1.领导重视:意识、态度、责任2.科学管理：条例、完善及提高3.可靠的硬件：过硬、齐全、验证4.高素质的科技队伍：坚持培养、提高5.不断完善的技术及SOP23.1.998 6.6.工作人员应掌握的要点n 必须十分了解和掌握自己工作性质和特点 n 涉及的实验工作及需要使用个人防护装备的 类型 n 正确的使用方法23.1.99923.1.910023.1.9101
