1、自身抗体研究进展及临床应用自身抗体研究进展及临床应用总论总论自身抗体的分类自身抗体的分类 一、细胞内一、细胞内 1、细胞核：抗核抗体（ANAs）2、细胞浆：抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）二、细胞膜二、细胞膜 HLADR2、DR3、DR4 HLAB27 三、细胞外三、细胞外 类风湿性因子（RF）、抗甲状腺球蛋白抗体、抗血浆成分（如凝血因子）抗体、抗磷脂抗体等。壹、细胞核：抗核抗体（壹、细胞核：抗核抗体（ANAs）抗核抗体的定义抗核抗体的定义 是指针对核酸和核蛋白抗体的总称，其靶抗原包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞周期蛋白等全部细胞成分。抗核抗体的分类抗核抗体的分类u抗DNA抗体 抗双链DNA
2、、抗单链DNA、抗左旋DNA。u抗组蛋白抗体 总组蛋白抗体：H1、H2a、H2b、H3、H4 抗DNP抗体 抗核小抗体u抗非组蛋白抗体 ENA抗体（ENA抗体谱）、抗着丝点抗体u抗核仁抗体 抗5rRNA、核小体、Nor-90、U3nRNPu抗其他细胞成分 线粒体、中心体ANA的荧光染色型别的荧光染色型别 细胞核：细胞核：核均质型（核均质型（DNA、组蛋白和核小体等）、组蛋白和核小体等）核颗粒型（核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和和型周期蛋白）型周期蛋白）核膜型（板层素、核膜型（板层素、gp120等）等）核仁型（核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等
3、）多聚酶、原纤维蛋白等）核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）细胞浆：细胞浆：胞浆颗粒型（线粒体、胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等）、核糖体等）胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等 分裂期细胞阳性：分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等纺垂体、中间体、中心体等根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：ANA常见五种核型及临床意义u核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者u均质型与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性
4、狼疮u斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体u核仁型多见于硬皮病u着丝点型多见于CREST综合征 核膜型核膜型 与抗与抗ds-DNA有关，有关，多见于多见于SLE，特别是有肾炎者，特别是有肾炎者 均质型均质型与与AHAAHA（抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体）、抗、抗DNADNA有关，有关，引起引起LELE形成主要见于形成主要见于SLESLE、药物性狼疮、药物性狼疮 斑点型斑点型 与抗与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体有关，应进一步查特异性抗体核仁型核仁型多见于硬皮病多见于硬皮病 着丝点型着丝点型多见于多见于CREST综合征综合征细胞核细胞核均质性均质性（homogeneous）荧光显微镜下的
5、ANA模型：斑点型斑点型（speckled）荧光显微镜下的ANA模型：核颗粒型：核粗颗粒型核颗粒型：核粗颗粒型 抗核抗体染色类型 核仁型核仁型（nucleolar）荧光显微镜下的ANA模型荧光显微镜下的ANA模型荧光显微镜下的ANA模型荧光显微镜下的ANA模型细胞浆细胞浆抗中性粒细胞浆抗体在显微镜下的荧光模型:分裂期细胞阳性分裂期细胞阳性荧光显微镜下的ANA模型ANA的的 荧光类型荧光类型 ANA试验的结果中一般会报告其分型，这些分型可能与某一特定的抗原反应活性相关。分型分型 相关疾病相关疾病 核仁型核仁型硬皮病硬皮病着丝点型着丝点型CREST综合征综合征周边型周边型SLE斑点型斑点型/弥弥散
6、型散型混合性结缔组织病混合性结缔组织病（MCTD）一、抗一、抗DNA抗体抗体已确认出两大类抗体特异性：已确认出两大类抗体特异性：天然的天然的双链双链DNA（dsDNA）：对诊断）：对诊断SLE特异性高特异性高 变性的变性的单链单链DNA（ssDNA）多数实验室采用以下方法进行多数实验室采用以下方法进行测定测定：放射免疫分析法（放射免疫分析法（RIA，Farr分析法）：定量分析法）：定量 酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法（ELISA）：定量）：定量 间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIF，短膜虫法）：半定量，短膜虫法）：半定量抗体水平与抗体水平与疾病活动度相关疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗
7、，随着疾病活动的控制，抗dsDNA抗体抗体滴度可以下降或消失。滴度可以下降或消失。抗抗dsDNA抗体与抗体与SLE肾损伤有关：肾损伤有关：DNA形成免疫复合物在肾小球基形成免疫复合物在肾小球基底膜沉积，或抗底膜沉积，或抗dsDNA抗体直接作用于肾小球抗原。强烈提示其抗体直接作用于肾小球抗原。强烈提示其致致病病作用。作用。抗DNA抗体分类：1、天然的双链DNA2、变性的单链DNA 双链DNA抗体针对的是DNA（外围区）脱氧核糖核酸骨架 单链DNA抗体针对的是嘌呤及嘧啶碱基抗抗ds-DNA抗体抗体u临床意义临床意义 对对SLESLE的诊断有较高特异性的诊断有较高特异性 滴度与滴度与SLESLE活动
8、相关，可作为病情监测及疗效观察指标活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 与与SLESLE肾损害有关肾损害有关u检测方法检测方法 放免法（放免法（Farr)Farr)敏感，有利于早期预测敏感，有利于早期预测 检测高亲合力的抗检测高亲合力的抗ds-DNAds-DNA 间接免疫荧光法间接免疫荧光法(IF)(IF)特异特异 ELISAELISA可检测低亲合力的抗可检测低亲合力的抗ds-DNAds-DNA 有助于中枢狼疮的病情监测有助于中枢狼疮的病情监测 金标免疫斑点法金标免疫斑点法 抗双链DNA的检测方法：多数实验室采用以下三种方法：一.RIA 二.ELISA 三.IIF 抗双链DNA在荧光显微镜下
9、的模型（绿蝇短膜虫基质）：抗DNA的临床意义：在SLE患者的肾脏病变处发现了抗DNA抗体，这强烈提示其致病作用。在具有抗DNA抗体的人中，有85%会在5年内发展成SLE 抗体水平与疾病活动度相关 二、抗组蛋白抗体二、抗组蛋白抗体（Anti-Histone Antibody，AHA）组蛋白是染色质基本结构-核小体的重要组成部分；在药物性狼疮的患者中出现率很高（78-95%）；在多种结缔组织病中出现。服用异烟肼的病人中最高，但临床上并没有出现狼疮的临床症状，其它肼苯哒嗪、普鲁卡因酰胺。抗组蛋白抗体抗组蛋白的定义：组蛋白是(histones)为主要的DNA相关蛋白,其分子量介于11.2-21.5kD
10、a之间,作用为稳定DNA双螺旋,也可能在基因调节中起作用.组蛋白可分为五种:H1、H2A、H2B、H3和H4，这五种组蛋白都有各自对应的自身抗体。组蛋白与DNA一起形成高度有序的核小体。中心由H3-H3-H4-H4四聚体组成，H2A-H2B二聚体位于其两侧。组蛋白核心被两圈DNA双螺旋（共146对碱基对）环绕。核小体象串珠样连接在一起，在结合区，DNA（连接DNA）与组蛋白H1相联。抗组蛋白的临床意义:抗组蛋白抗体主要用于药物性狼疮的诊断,95%的药物性狼疮患者抗组蛋白抗体阳性，另外，抗组蛋白抗体还见于30-70的非药物诱导的红斑狼疮以及15-50的类风湿关节炎患者。抗核小体抗体（AnuA）u
11、核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要作用u对SLE的早期诊断有重要意义比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现阳性率：50%90%特异性98%抗核小体抗体（抗核小体抗体（antinucleosome antibodies,AnuA）核小体是染色体的功能亚单位，是核小体是染色体的功能亚单位，是DNA与组蛋白形与组蛋白形成的复合体，存在于细胞核中，核小体是成的复合体，存在于细胞核中，核小体是SLE主要主要的自身抗原；的自身抗原；AnuA对对SLE诊断的敏感性和特异性分别为诊断的敏感性和特异性分别为56.0%-64.2%和和97.0%
12、-98.8%，敏感性优于抗，敏感性优于抗dsDNA，是，是SLE的标记抗体之一。的标记抗体之一。AnuA可出现于可出现于SLE疾病进程的各个时期，并且是狼疾病进程的各个时期，并且是狼疮肾炎的标记性抗体，与疮肾炎的标记性抗体，与SLE病情活动的生物标志病情活动的生物标志物。物。AnuA与抗与抗dsDNA抗体可不同时出现，抗体可不同时出现，AnuA出现早出现早于抗于抗dsDNA抗体，这对抗体，这对SLE的早期诊断更为有利的早期诊断更为有利,目前我科已展开了第二代目前我科已展开了第二代AnuA的检测。的检测。抗核小体抗体抗核小体的定义：组蛋白与dsDNA的复合物。组蛋白与DNA一起形成高度有序的核小
13、体，中心由H3-H3-H4-H4四聚体组成，H2A-H2B二聚体组成，H2A-H2B二聚体位于其两侧。组蛋白部分被DNA双链围绕两圈（共146个碱基对）。核小体象串珠样连接在一起，在结合区，DNA（连接DNA）与组蛋白H1相联。抗核小体的临床意义:抗核小体抗体(AnuA)的检测主要用于SLE的诊断，特异性较高，特异性98%。在SLE中的阳性率为7090。在非活动期的检出率为62，其阳性率均高于抗dsDNA抗体，尤其对于非活动期的患者，且该抗体的出现比dsDNA抗体早，因此，不但有助于提高SLE的诊断率，还有助于早期诊断。此外，该抗体还是SLE病情恶化的早期标志，定期检测有助于病情观察。该抗体因
14、其也可见于药物性狼疮，特异性不及抗dsDNA抗体。三、抗非组蛋白抗体三、抗非组蛋白抗体（一）抗ENA抗体（二）抗着丝点抗体（ACA）（一）抗核酸结合蛋白（一）抗核酸结合蛋白/可提取性核抗原可提取性核抗原（Extractable Nuclear Antigen,ENA）抗体抗体抗抗ENA抗体的类型抗体的类型 抗抗U1RNP抗体抗体 抗抗Sm抗体抗体 抗抗Ro/抗抗SSA抗体抗体 抗抗La/抗抗SSB抗体抗体 肌炎特异性抗体（肌炎特异性抗体（MSA）与系统性硬化相关的抗体与系统性硬化相关的抗体抗ENA抗体的类型:抗U1RNP抗SM抗SSA抗SSB抗JO-1抗SCL-70抗rRNP抗体（抗核糖体P蛋
15、白）抗抗ENAENA抗体抗体u 抗RNP MCTD100%阳性，且滴度高双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化肾脏保护性抗体？u 抗Sm SLE的标记性抗体，阳性率30%有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在u 抗SSA 原发性SS：60-75%SLE:40-50%与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、血管炎、紫癜相关 可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞u 抗SSB原发性SS：40%，较抗SSA更特异其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS抗抗ENAENA抗体抗体u抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎标记性抗体u抗Scl-70 硬皮病标记性
16、抗体u抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞浆内 抗Rib阳性+其它自身抗体阴性=ANA阴性 临床意义 是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%多见于SLE活动期 与抗ds-DNA抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失 可持续1-2年后才转阴抗抗ENA抗体的检测及临床意义抗体的检测及临床意义 采用免疫扩散法；采用免疫扩散法；ELISA和和免疫印迹法。免疫印迹法。几乎几乎仅仅出现于患有结缔组织病的患者中。出现于患有结缔组织病的患者中。如果如果无症状者无症状者中出现高滴度的抗中出现高滴度的抗ENA抗体，常预示着抗体，常预示着未来可能发展成未来可能发展成结缔组织病结缔组织病。抗体常在疾病的抗体常在疾病
17、的整个整个病程中均能够被检测到。病程中均能够被检测到。滴度与疾病活动度并滴度与疾病活动度并无无一致的关系。一致的关系。抗抗U1RNP抗体抗体 抗nRNP(nuclear RNP)：以抗核内的核糖核蛋白而得名。临床上应用较多的是u1RNP抗体。通常又把nRNP称之为u1RNP。抗u1RNP抗体在混合性结缔组织病（MCTD）中几乎均为阳性，且其滴度很高；是区分结缔组织病和非结缔组织病的有力指标。抗u1RNP抗体阳性的病人，常有双手肿胀、雷诺现象、肌炎和指（趾）端硬化。2530的SLE患者存在该抗体，一般与抗Sm抗体一同出现。抗U1RNP抗体：混合性结缔组织病有高滴度的抗U1RNP抗体，是其特异指标
18、。25%-30%的SLE患者存在该抗体，一般与抗SM抗体一同出现。也出现于干燥综合征、RA、硬皮病、多发性肌炎。SM抗体:是SLE的诊断标准之一.30%左右SLE存在该抗体.与临床的相关性并不强,但有证据显示其与中枢神经系统受累、肾脏病变、肺纤维化、心包炎有关。与ds-DNA一起，是SLE的特异性指标，但仅见于20%-40%病人中。抗抗Sm抗体抗体（Smith）ACRSLE诊断标准中，抗Sm抗体是诊断标准标准之一。抗Sm抗体非常有助于作出SLE的诊断。30左右SLE存在该抗体。SLE患者中，常与抗U1RNP抗体一同出现 与临床的相关性并不强，但有证据显示其与中枢神经系统受累、肾脏病变、肺纤维化
19、、心包炎有关。有人认为可以作为疾病活动度的指标。抗抗Sm/nRNP抗体抗体 Sm和和nRNP是同一分子复合物（是同一分子复合物（RNA-蛋白颗粒蛋白颗粒）中的不同抗原位点，）中的不同抗原位点，Sm含有含有u1、u2和和u4-u6，而，而nRNP(u1RNP)仅含仅含u1RNA。也即抗。也即抗Sm抗体阳性均伴有抗抗体阳性均伴有抗u1RNP抗抗体，而抗体，而抗u1RNP抗体可以单独存在。抗体可以单独存在。抗抗u2RNP抗体在系统性硬化症伴多发性肌炎的重抗体在系统性硬化症伴多发性肌炎的重叠综合征中阳性频率较高。银屑病及雷诺现象的叠综合征中阳性频率较高。银屑病及雷诺现象的病人也可呈阳性。病人也可呈阳性
20、。抗抗u3RNP抗体常与系统性硬化相关，且常伴有肺抗体常与系统性硬化相关，且常伴有肺动脉高压、骨骼肌和小肠受累。动脉高压、骨骼肌和小肠受累。SS-A抗体：常见于干燥综合症，也见于SLE，偶见于慢活肝。100%新生儿SLE出现SS-A抗体，以胎盘传给胎儿引起炎症反应。其也可导致新生儿先天性心脏传导阻滞。抗抗SS-A/Ro抗体抗体 抗抗SSA/RO抗体：由于该抗体与干燥综合征抗体：由于该抗体与干燥综合征（Sjogren Syndromes，SS）相关，故取）相关，故取名为名为SSA；SSA与与Ro的抗原性、生化特点一致。的抗原性、生化特点一致。在以鼠肝为底物的在以鼠肝为底物的ANA检测中，抗检测中
21、，抗SSA抗抗体常呈阴性反应，而以体常呈阴性反应，而以Hep-2细胞为底物，细胞为底物，则则ANA阳性时阳性时SSA也常呈阳性。也常呈阳性。抗抗Ro抗体阳性的临床相关性抗体阳性的临床相关性 正常健康人正常健康人 干燥综合征干燥综合征 淋巴结病淋巴结病 白细胞减少白细胞减少 抗抗La抗体抗体 RF ANA SLE 光过敏性皮疹光过敏性皮疹 血小板减少血小板减少 间质性肺炎间质性肺炎 ANA（）（）亚急性皮肤型红斑狼疮亚急性皮肤型红斑狼疮 抗抗La抗体抗体 其它风湿性疾病其它风湿性疾病 RA 多发性肌炎多发性肌炎 系统性硬化系统性硬化 原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化 新生儿狼疮综合征新生儿狼
22、疮综合征 先天性完全性心脏传先天性完全性心脏传导阻滞导阻滞 新生儿狼疮性皮炎新生儿狼疮性皮炎 Ro反应针对反应针对52kD抗抗原而非原而非60kD抗原。抗原。抗SS-B抗体：仅见于干燥综合症（40-80%）和SLE（10-20%）女性患者中。男女比例为29：1。SS常同时出现SS-A抗体和SS-B抗体 抗抗SSB/La抗体抗体 在原发性在原发性SS病人中，抗病人中，抗SSA/Ro和抗和抗SSB/La阳性阳性率分别为率分别为60%和和40%，它们是诊断它们是诊断干燥综合征干燥综合征的血清学标志。的血清学标志。抗抗SSB抗体较抗抗体较抗SSA抗体诊断干燥综合征更为特抗体诊断干燥综合征更为特异。异。
23、免疫扩散法与免疫印迹法（免疫扩散法与免疫印迹法（Western Blot）得出的结果常常得出的结果常常不一致不一致。SSA和抗和抗SSB抗体阳性可造成抗体阳性可造成新生儿狼疮新生儿狼疮及婴儿及婴儿心脏传导阻滞等先天性心脏病。心脏传导阻滞等先天性心脏病。抗抗SSA和抗和抗SSB抗体常与血管炎、淋巴结肿大、抗体常与血管炎、淋巴结肿大、白细胞减少、光过敏、皮损、紫癜等临床症状相白细胞减少、光过敏、皮损、紫癜等临床症状相关。关。抗SCL-70抗体：见于25%-75%的进行性系统性硬化症患者中。不出现于局限性的硬皮病。约40%的系统性硬皮病和70%的弥漫性硬皮病中SCL-70抗体阳性与系统性硬化相关的抗
24、体与系统性硬化相关的抗体 抗拓扑异构酶抗拓扑异构酶1抗体（抗抗体（抗scl 70抗体）：抗体）：存在于25的患者；主要见于患有弥漫型硬皮病以及存在系统性损害（特别是肺间质变）的患者。抗着丝点抗体：抗着丝点抗体：存在于30的患者中；90的CREST综合征患者存在该抗体；见于患有原发性或继发性雷诺病的患者。抗核仁抗原的抗体：抗核仁抗原的抗体：见于5的患者中，患者常常患有严重的弥漫型疾病。JO 1抗体：见于多发性皮肌炎，发生率为25%-35%。常与肺间质纤维化相关 “肌炎特异性自身抗体肌炎特异性自身抗体”（Myositis-Specific Antibody,MSA）抗合成酶抗体抗合成酶抗体（20）
25、：）：Jo-1抗体抗体占所有抗合成酶占所有抗合成酶抗体的抗体的80%，其它还有：抗其它还有：抗PL-7抗体、抗抗体、抗PL-12抗抗体、抗体、抗OJ抗体等。抗体等。抗抗SRP抗体抗体（抗信号识别颗粒抗体）（抗信号识别颗粒抗体）（5）与肌炎）与肌炎、心脏扩大、对治疗的抵抗相关、心脏扩大、对治疗的抵抗相关,5年生存率为年生存率为20 抗抗Mi2抗体抗体（10）：）：5年生存率为年生存率为100 几乎几乎仅见仅见于或于或最常见最常见于多发性肌炎于多发性肌炎/皮肌炎（皮肌炎（PM/DM）或）或PM/DM重叠综合征。重叠综合征。存在于存在于35至至40的肌炎患者中。的肌炎患者中。一个人出现一个人出现一种
26、以上一种以上MSA的情况的情况很少见很少见。抗合成酶综合征抗合成酶综合征 临床表现为临床表现为：肌炎：肌炎、间质性肺疾病、关节炎以及常出、间质性肺疾病、关节炎以及常出现雷诺现象的一组临床表现的特征性；现雷诺现象的一组临床表现的特征性；患者的手指侧面常出现角化过度，并伴有脱屑、裂纹患者的手指侧面常出现角化过度，并伴有脱屑、裂纹和色素沉着，从而形成许多肮脏的横纹。即和色素沉着，从而形成许多肮脏的横纹。即“技工手技工手”。50至至70发生间质性发生间质性肺肺疾病（就肌炎总体而言，为疾病（就肌炎总体而言，为10至至20）。）。血清中含多有血清中含多有抗合成酶抗合成酶抗体（抗体（Jo-1抗体）。抗体）。
27、肌炎常常肌炎常常难以难以通过治疗达到完全缓解。通过治疗达到完全缓解。核糖体P蛋白：主要见于SLE 抗核糖体抗核糖体P抗体抗体（又称为：抗（又称为：抗rRNP抗体）抗体）针对3磷蛋白P0、P1和P2的抗体。诊断SLE的高度特异性标记物。在1015的SLE患者中出现。抗体水平与疾病的活动度相关。与狼疮脑病有关。（二）抗着丝点抗体（二）抗着丝点抗体（ACA）四、抗核仁抗体四、抗核仁抗体 抗RNA多聚酶/原纤维蛋白抗体五、抗其他细胞成分五、抗其他细胞成分 抗线粒体抗体 抗高尔基抗体 抗肌动蛋白抗体 抗溶酶体抗体 抗角蛋白抗体抗线粒体抗体抗线粒体的定义：是一种抗细胞浆成分的自身抗体，是非特异性抗体，其靶
28、抗原可分为九种亚型(M1到M9)抗线粒体在荧光显微镜下的模型:抗线粒体的临床意义:.AMA-M2:阳性率96%PBC 特异性97%早期甚至肝功能正常无症状期即可阳性AMA-M4和M9:诊断价值还有待进一步评价.现有的数据表明:M4为预后差的指标,M9抗体阳性可能提示预后良好.抗体对应的抗原抗体对应的抗原 相关疾病相关疾病M1 梅毒（提示活动性）系统性红斑狼疮 进行性系统性硬化症，干燥综合征 夏普综合征，类风湿性关节炎M2 原发性胆汁性肝硬化（高滴度）其它慢性肝病 进行性系统性硬化症M3 假性狼疮综合征M4 原发性胆汁性肝硬化M5 非特异性胶原病M6 肝炎（异丙异烟肼引起）M7 急性心肌炎 心肌
29、病M8 原发性胆汁性肝硬化M9 原发性胆汁性肝硬化 其它类型的肝炎 抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体的定义:抗角蛋白抗体在显微镜下的模型:抗角蛋白抗体的临床意义:抗角蛋白抗体是类风湿性关节炎患者的特异性抗体，而特异性为95%-99%。并且抗角蛋白抗体罕见于其它非类风湿关节炎的炎症性风湿病以及非炎症性风湿病。抗角蛋白抗体的出现可以先于疾病的临床表现，有时可提前几年的时间，对于血清学检测可疑的RA患者，在早期检测到抗角蛋白抗体为疾病进行性发展的标志，抗体滴度与疾病活动性相关，高滴度的抗体对类风湿性关节炎有确诊价值。故对RA的早期预防、早期诊断起到关键性作用。抗角蛋白的临床意义:抗角蛋白抗体是类风湿性关节炎
30、患者的特异性抗体，特异性为95%-99%抗体滴度与疾病活动性相关，高滴度的抗体对类风湿性关节炎有确诊价值 高抗体滴度可能预示着较严重的类风湿性关节炎类型。贰、细胞浆：抗中性粒细胞胞浆抗体贰、细胞浆：抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗中性粒细胞浆抗体抗中性粒细胞浆抗体的定义:是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体.其靶抗原主要为PR3、MPO、弹性蛋白酶、乳铁蛋白酶、组织蛋白酶、溶菌酶、杀菌/膜通透性境高蛋白等.抗中性粒细胞浆抗体抗中性粒细胞浆抗体 ANCA包括核周型（PANCA）和细胞浆型（CANCA）两种。前者为针对髓过氧化物（MPO）、弹力酶和乳铁蛋白的抗体；后者针对的抗原
31、为分布在细胞浆的丝氨酸蛋白3（PR3）。抗中性粒细胞浆抗体的分类:C-ANCA(胞浆型),主要抗原PR3 P-ANCA(核周型),主要抗原MP0 抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）荧光图谱分型荧光图谱分型主要抗原成分主要抗原成分胞浆型胞浆型cANCA核周型核周型pANCA蛋白酶蛋白酶3（PR3）髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）非典型型（非典型型（cANCA）不清不清ANCA的临床意义uc-ANCA和PR3-ANCA 对韦格纳肉芽肿有高度特异性（95%），敏感性80%与病情活动性相关 常作为判断药物疗效和病情复发的指标up-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有
32、诊断特异性 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关抗中性粒细胞浆抗体在显微镜下的荧光模型:抗中性粒细胞浆抗体的临床意义:cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wegeners肉芽肿，约占ANCA阳性率的80%-95%。cANCA被认为是活动性Wegeners肉芽肿及微动脉炎的特异和敏感的标志抗体 pANCA对UC（溃疡性结肠炎）的敏感性为70%，特异性为90%，可作为对UC和CD（过敏性肠炎）的鉴别诊断及UC的早期诊断。pANCA见于多种系统性血管炎。该抗体也可见于Wegeners肉芽肿，但仅占ANCA阳性率
33、的5%-20%，不同疾病中出现的ANCA抗体及其可能对应的抗原各论各论u疾病标志性自身抗体非常少见 SLE：抗Sm、抗rRNP、抗pANCA。u疾病特异性自身抗体：SLE：抗双链dSDNAu疾病相关性自身抗体：PSS：抗SSA、抗SSBu疾病非特异性自身抗体u生理性自身抗体低滴度非特异性自身抗体一.根据临床意义分类u抗核抗体谱u抗中性粒细胞浆抗体谱u抗磷脂抗体谱u类风湿因子抗体谱u不育不孕抗体谱u恶性贫血抗体谱u重症肌无力抗体谱等。国外临床常规自身抗体检测项目达百种以上，而我室现开展项目不足20项。二.根据疾病的类别分类2酶联免疫吸附法（ELISA）1间接免疫荧光法（IFA Indirect
34、Fluorescent Assay）3免疫印迹法（IB）WesternblotLIA4其它：IDA、RIA等全自动自身抗体分析仪全自动自身抗体分析仪u自动化检测自动化检测u检测定量化检测定量化u单个项目随时检测单个项目随时检测u多个项目同时检测多个项目同时检测u45-90分钟报告结果分钟报告结果u原厂质控和校正血清原厂质控和校正血清u精确温度调控系统精确温度调控系统u五点定标、三重检测五点定标、三重检测25wash 2wash 3read 3wash 1read 1read 2disp15101520风湿病的实验室诊断u血清学检查血清学检查 自身抗体自身抗体特异性特异性 非特异的免疫相关指标非
35、特异的免疫相关指标u滑液分析滑液分析u一般的实验室检查项目一般的实验室检查项目项目项目检验方法检验方法SLE四项四项ANA间接免疫荧光抗DSDNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列系列抗RNP免疫印迹、ELISA抗SM免疫印迹、ELISA抗SSA免疫印迹、ELISA抗SSB免疫印迹、ELISA抗JO-1免疫印迹、ELISA抗SCL-70免疫印迹、ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、ELISARA三项三项AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-
36、ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法(1)(2)自身免疫肝炎七项自身免疫肝炎七项ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（抗磷脂综合征三项（ASP）
37、ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗体ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法抗Ku抗体（Ku)抗Mi抗体（Mi-2）抗PM-Scl抗体抗JO-1抗体（JO-1）多发性肌炎、皮肌炎抗线粒体抗体M2型（AMA-M2）原发性胆汁性肝硬化抗nRNP抗体（U1-snRNP）混合性结缔组织病（MCTD）抗Scl-70抗体（Scl-70）抗着丝点B抗体（CENP-B）系统性硬化抗SSB/La抗体抗SSA/R052抗体抗SS-A/R060抗体干燥综合征/系统性红斑狼疮抗核糖体P蛋白（PO）抗增殖细胞核抗原抗体（PCNA)抗Sm抗体抗组蛋白
38、抗体抗核小体抗体抗双链DNA抗体IgG抗体系统性红斑狼疮项项 目目 名名 称称 疾疾 病病ANA谱谱17项（免疫印迹法）项（免疫印迹法）(3)常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法类风湿关节炎类风湿关节炎 RF 60RA中出现，量与中出现，量与RA活动性及活动性及 严重性呈正相关。亦在其它严重性呈正相关。亦在其它CTD出现出现 抗抗CCP 在在50RA中出现中出现（聚角蛋白微丝聚角蛋白微丝 蛋白）蛋白）特异性较高特异性较高 AKA（抗角蛋白抗体）抗角蛋白抗体）在在40RA阳性阳性 APF（抗核周因子）抗核周因子）在在52RA阳性阳性 抗抗RA33RA阳性率为阳性率为35 抗抗Sa
39、在部分在部分RA阳性阳性类风湿关节炎（类风湿关节炎（RARA）u类风湿因子（RF）u早期诊断的系列指标抗RA33/36抗体抗核周因子（APF）抗角蛋白抗体（AKA）抗Sa抗体抗环瓜氨酸抗体（抗CCP）类风湿因子（类风湿因子（RFRF）u抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为IgM、G、A、E型uRF在RA中的阳性率为70%，是诊断RA的重要标准之一uRF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良类风湿因子（RF）uRF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性 SLE 30%SS
40、70%90%SSc 20%30%MCTD 50%60%非风湿性疾病 5%以下的正常人uRF阳性不等于一定就是RAuRF阴性也不等于一定就不是RARF常用检测方法uRF 1：40阳性 乳胶凝集法（测IgM-RF）uRF 256 Iu/ml 双抗夹心ElISA法(测总RF）uRF-IgG 110IU/ml-IgA 18IU/ml ELISA法-IgM 200IU/mlRARA早期诊断的系列指标早期诊断的系列指标 敏感性 特异性抗RA33/36抗体 35.8%99.6%APF 40%-80%70%-90%AKA 40%-55%85%-95%抗Sa抗体 40%-60%98.6%抗CCP 46%-70%
41、96%抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）u瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关 抗体的主要抗原决定簇u对RA诊断具有高度特异性（98%）u可在RA早期出现u预测早期关节炎发展为RAuRA关节侵蚀破坏的早期识别及预测系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮（SLE）u是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体u自身抗体（1）抗核抗体谱ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体（2）抗磷脂抗体（3）抗组织细胞抗体抗RBC抗体 抗血小板相关抗体 抗神经元抗体（4）其它RF、p-ANCA抗核抗体（抗核抗体（ANA）u定义以细胞核内物质为抗原的抗体u临床
42、意义SLE的筛查抗体:95%阳性，但滴度与SLE活动性无相关 阴性基本可排除SLE阳性并非SLE特异 阳性并非风湿病特异:风湿病（SLE、SSc、SS、RA)非风湿性疾病（感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤）服用某些药物（INH、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺）抗核抗体（抗核抗体（ANAANA）u方法间接免疫荧光法u结果判断:滴度1：100为阳性 常见核型5种 不同核型的临床意义不同ANA常见五种核型及临床意义u核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者u均质型与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮u斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体u核仁型多见于硬皮
43、病u着丝点型多见于CREST综合征 核膜型核膜型 与抗与抗ds-DNA有关，有关，多见于多见于SLE，特别是有肾炎者，特别是有肾炎者 均质型均质型与与AHAAHA（抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体）、抗、抗DNADNA有关，有关，引起引起LELE形成主要见于形成主要见于SLESLE、药物性狼疮、药物性狼疮 斑点型斑点型 与抗与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体有关，应进一步查特异性抗体核仁型核仁型多见于硬皮病多见于硬皮病 着丝点型着丝点型多见于多见于CREST综合征综合征ANA检测方法u间接免疫荧光法u印迹法uELISA法 抗核抗体谱（ANAs）定义：以细胞核内物质为抗原的抗体定义：以细胞核内物质为
44、抗原的抗体u 抗抗DNADNA抗体抗体抗抗ss-DNAss-DNA 抗抗ds-DNAds-DNAu 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体HH1 1，HH2A2A，HH2B2B，H H3 3，H H4 4u 抗非组蛋白抗体抗非组蛋白抗体抗抗ENAENA抗体抗体 抗着丝点抗体抗着丝点抗体u 抗核仁抗体抗核仁抗体 u 其它其它线粒体、溶酶体、高尔基体等线粒体、溶酶体、高尔基体等 抗抗ds-DNA抗体抗体u临床意义临床意义 对对SLESLE的诊断有较高特异性的诊断有较高特异性 滴度与滴度与SLESLE活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 与与SLESLE肾损害有关肾损害有关
45、u检测方法检测方法 放免法（放免法（Farr)Farr)敏感，有利于早期预测敏感，有利于早期预测 检测高亲合力的抗检测高亲合力的抗ds-DNAds-DNA 间接免疫荧光法间接免疫荧光法(IF)(IF)特异特异 ELISAELISA可检测低亲合力的抗可检测低亲合力的抗ds-DNAds-DNA 有助于中枢狼疮的病情监测有助于中枢狼疮的病情监测 金标免疫斑点法金标免疫斑点法抗抗ENAENA抗体抗体u 抗RNP MCTD100%阳性，且滴度高双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化肾脏保护性抗体？u 抗Sm SLE的标记性抗体，阳性率30%有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断抗Sm阳性一定
46、伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在u 抗SSA 原发性SS：60-75%SLE:40-50%与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、血管炎、紫癜相关 可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞u 抗SSB原发性SS：40%，较抗SSA更特异其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS抗抗ENAENA抗体抗体u抗Scl-70 硬皮病标记性抗体u抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎标记性抗体u抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞浆内 抗Rib阳性+其它自身抗体阴性=ANA阴性 临床意义 是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%多见于SLE活动期 与抗ds-DNA抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失 可持续1-2年后
47、才转阴抗核小体抗体（AnuA）u核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要作用u对SLE的早期诊断有重要意义比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现阳性率：50%90%特异性98%血管炎血管炎血管炎血管炎 抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）荧光图谱分型荧光图谱分型主要抗原成分主要抗原成分胞浆型胞浆型cANCA核周型核周型pANCA蛋白酶蛋白酶3（PR3）髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）非典型型（非典型型（cANCA）不清不清ANCA的临床意义uc-ANCA和PR3-ANCA 对韦格纳肉芽肿有高度特异性（95%）
48、，敏感性80%与病情活动性相关 常作为判断药物疗效和病情复发的指标up-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有诊断特异性 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关血管炎相关抗体血管炎相关抗体疾病频率（%）Wegeners 肉芽肿90显微镜下多动脉炎50结节性多动脉炎5-10变应性肉芽肿性血管炎10过敏性血管炎Rare光敏性紫癜RareIgA肾病Rare感染后肾小球肾炎Rare系统性红斑狼疮Rare川崎病+对照疾病疾病频率（频率（%）显微镜下多动脉炎50-70特发性坏死性肾小球肾炎50-85变应性肉芽肿性血
49、管炎70-85Goodpasture综合征10-30Wegener肉芽肿5-10结节性多动脉炎+多血管炎重叠+系统性红斑狼疮+肼苯哒嗪诱导的肾炎+川崎病+pANCA(核周型）1、髓过氧化物酶2、弹力酶3、组织蛋白酶G4、乳铁蛋白5、溶酶体6、细菌增透蛋白7、Azurocidin8、自身免疫性肝病我科开展的自身免疫肝炎系列抗体包括：我科开展的自身免疫肝炎系列抗体包括：抗核抗体（ANA）抗肝细胞膜抗体(抗LMA)抗平滑肌抗体（ASMA）抗肝肾微粒体抗体（抗LKM抗体）抗肝-胰抗体(抗LPLP抗体)抗可溶性肝细胞抗体（抗SLA）抗线粒体抗体（AMA）u自身免疫性肝炎（AIH）ANA 抗平滑肌抗体（S
50、MA）抗肝肾微粒体抗体u原发性胆汁性肝硬化（PBC）抗线粒体抗体（AMA）M2u原发性硬化性胆管炎 ANCA阳性自身免疫性肝病自身免疫性肝病其他其他(一)皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）u免疫学检查免疫学检查 ANA ENA抗抗Jo-1阳性阳性u其它检查其它检查肌酶谱肌酶谱 肌酸磷酸激酶（肌酸磷酸激酶（CPK）:MM-心肌和骨骼肌心肌和骨骼肌 MB-心肌心肌 BB-平滑肌和脑内平滑肌和脑内 乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（LDH）谷草转氨酶（谷草转氨酶（AST）谷丙转氨酶（谷丙转氨酶（ALT）碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（ALP）(二)干燥综合征（SS）uANA阳性率40%70%uENA抗SSA抗体阳性率7
