1、第七单元 超敏反应性疾病的免疫学检测实验一实验一 血清的检测血清的检测一、血清总的检测一、血清总的检测 实验目的实验目的1.1.掌握双抗体夹心法测定血清总的方法。掌握双抗体夹心法测定血清总的方法。2.2.熟悉在熟悉在I I型超敏反应中的作用和临床意型超敏反应中的作用和临床意义。义。EE EE洗涤洗涤待测抗原待测抗原包被抗体包被抗体酶标抗体酶标抗体实验原理实验原理 双抗体夹心法双抗体夹心法 实验材料实验材料1.1.羊抗人抗体、标记的羊抗人抗体、校羊抗人抗体、标记的羊抗人抗体、校准品、（四甲基联苯胺）。准品、（四甲基联苯胺）。2.2.标本：待测血清。标本：待测血清。3.3.包被缓冲液、洗涤缓冲液、
2、反应终止包被缓冲液、洗涤缓冲液、反应终止液（液（2 H242 H24）等。）等。4.4.酶标板、微量加样器、酶标仪、温箱酶标板、微量加样器、酶标仪、温箱等。等。1.包被羊抗人抗体包被羊抗人抗体（4过夜，洗涤）过夜，洗涤）2.封闭（封闭（0.5%的小牛血清或牛血清清蛋白）的小牛血清或牛血清清蛋白）3.加样（梯度稀释的校准品、待测血清、阳性对照、阴加样（梯度稀释的校准品、待测血清、阳性对照、阴性对照、空白对照性对照、空白对照）4.37温育温育2h，洗涤，洗涤 5.加入工作浓度的标记的羊抗人加入工作浓度的标记的羊抗人 6.37温育温育2h，洗涤，洗涤 EE EE操作步骤操作步骤8.加入终止液，终止反
3、应加入终止液，终止反应 9.492波长测各孔吸光度值（波长测各孔吸光度值（A值）值）7.加入底物，加入底物，37温育温育15分钟分钟 注意事项注意事项1.1.包被抗体量、酶标抗体的加入量等可影包被抗体量、酶标抗体的加入量等可影响测定结果，需预先摸索最佳条件。响测定结果，需预先摸索最佳条件。2.2.洗涤要彻底，必要时可加大洗涤液的浓洗涤要彻底，必要时可加大洗涤液的浓度。度。3.3.结果判断须在结果判断须在1010分钟内完成。分钟内完成。4 4含量与吸光度值在一定范围内呈线性关系，含量与吸光度值在一定范围内呈线性关系，如果样品的测定结果超出此范围，应对如果样品的测定结果超出此范围，应对样品进行适当
4、的稀释，使样品中的浓度样品进行适当的稀释，使样品中的浓度在线性范围内再行测定。在线性范围内再行测定。结果分析结果分析 以校准品的参考含量（）为横坐标，以以校准品的参考含量（）为横坐标，以对应对应A A值为纵坐标，绘制标准曲线。根据待值为纵坐标，绘制标准曲线。根据待测样品的测样品的A A值，在标准曲线中查出稀释后样值，在标准曲线中查出稀释后样品中的浓度，再乘以稀释倍数，即为原样品品中的浓度，再乘以稀释倍数，即为原样品中的浓度。中的浓度。12.412.4。临床意义临床意义 血清总水平一般用国际单位（）或表示，血清总水平一般用国际单位（）或表示，1 12.42.4，相当于标准冻干血清制剂，相当于标准
5、冻干血清制剂0.009280.00928内所内所含的量。正常人群水平受环境、种族、遗传、含的量。正常人群水平受环境、种族、遗传、年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，以年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，以致各家报道的正常值相差甚远。婴儿脐带血水致各家报道的正常值相差甚远。婴儿脐带血水平小于平小于0.50.5，出生后随年龄增长而逐渐升高，出生后随年龄增长而逐渐升高，1212岁时达成人水平。成人血清水平约在岁时达成人水平。成人血清水平约在2020200200之之间，一般认为大于间，一般认为大于333333（800800）时为异常升高。）时为异常升高。升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季升高相关
6、的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物性间质性节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。上述疾病时升高的程度并不些寄生虫感染等。上述疾病时升高的程度并不一致，在过敏性支气管肺曲菌病时最为显著，一致，在过敏性支气管肺曲菌病时最为显著，其值可达其值可达500050002000020000，除了此病和特应性皮炎，除了此病和特应性皮炎以及在花粉季节之外，任何血清总水平大于以及在花粉季节之外，任何血清总水平大于50005000的患者均应考虑寄生虫感染的可能性。的患者均应考虑寄生虫感染的可能
7、性。思考题1.双抗体夹心法定量测定血清总的原理及应注意的问题有哪些？2.测定血清总的临床意义？二、血清特异性的检测二、血清特异性的检测 实验目的实验目的1.1.掌握斑点酶免疫印迹法检测的原理掌握斑点酶免疫印迹法检测的原理和方法。和方法。2.2.熟悉在熟悉在I I型超敏反应中的作用和临床型超敏反应中的作用和临床意义。意义。实验原理实验原理 斑点酶免疫印迹法：用膜作为固相支持物，检测区的不同区域包被有特异性的过敏原，质控区包被有兔抗鼠抗体。检测时将稀释的病人血清加入反应槽内，血清中的与膜上的相应过敏原结合。通过洗涤去掉未结合的游离物质，再加入酶标记的抗人抗体，此抗体会与检测区膜上的结合，同时会与质
8、控区上的兔抗鼠抗体结合。如标本中无，酶标抗体不能结合在检测区相应过敏原区带上。通过洗涤去掉未结合的标记物，然后加入底物显色。通过显色区带确定血清中含有哪种，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。实验材料实验材料1.1.检测条检测条 包被有特异性过敏原包被有特异性过敏原的膜的膜2.2.碱性磷酸酶标记的抗人碱性磷酸酶标记的抗人 3.3.标本稀释液标本稀释液4.4.碱性磷酸酶底物碱性磷酸酶底物5.5.浓缩洗液（浓缩洗液（10X10X）洗液按照洗液按照1:101:10倍稀释倍稀释6.6.标本标本 待测血清用标本稀释液待测血清用标本稀释液按照按照1:101:10倍稀释。倍稀释。稀释好的洗液将检测条要充分浸透，
9、放在摇床上摇稀释好的洗液将检测条要充分浸透，放在摇床上摇10分钟分钟倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应1.5小时小时 倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡10分钟，重复三次分钟，重复三次 每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人，放于摇床上室温反应每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人，放于摇床上室温反应30分钟分钟将碱性磷酸酶标记的抗人倒掉，用洗液洗三次，每次将碱性磷酸酶标记的抗人倒掉，用洗液洗三次，每次10分钟分钟 加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，避光反应约加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，避光反应约10分钟分钟 去
10、掉底物溶液，用纯水洗三次，每次去掉底物溶液，用纯水洗三次，每次5分钟分钟操作步骤操作步骤将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果 注意事项1.不同批次的组分不可混用，且只能在效期内使用。2.检测标本只限于人血清、血浆。3.如果样本在3天内检测，可以保存在28，否则应冷冻保存，避免反复冻溶。4.如果标本含有不溶物，离心去除。溶血、浑浊或含有叠氮钠的标本不可用。5.加样器枪头不可混用，避免交叉污染。结果分析结果分析 通过显色区带确定血清中含有哪种，进而判断待检通过显色区带确定血清中含有哪种，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。者对哪种过敏
11、原过敏。临床意义临床意义 测定是体外检测变应原的重要手测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于段，主要用于型超敏反应的诊断。该检测型超敏反应的诊断。该检测条包被有多种特异性过敏原，通过检测血浆条包被有多种特异性过敏原，通过检测血浆（血清）中过敏原，筛查待检者对何种过敏（血清）中过敏原，筛查待检者对何种过敏原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。小结和讨论小结和讨论1.人类人类I型超敏反应可表现为全身性超敏反应和局部性型超敏反应可表现为全身性超敏反应和局部性超敏反应两种。超敏反应两种。2.在在5类免疫球蛋白中，是血清中含量最低，半衰期最类免疫球蛋白中，是血清中含量
12、最低，半衰期最短，分解率最高，对热最不稳定的。而在短，分解率最高，对热最不稳定的。而在I型超敏型超敏反应患者体内，含量显著增高。反应患者体内，含量显著增高。3.血清总的含量是由各种抗原的总和决定。正常人血清血清总的含量是由各种抗原的总和决定。正常人血清含量极微，约含量极微，约0.10.9水平。临床上一般采用敏感水平。临床上一般采用敏感性较高、稳定性较好的化学发光免疫测定法、酶联性较高、稳定性较好的化学发光免疫测定法、酶联免疫测定法进行检测。免疫测定法进行检测。思考题思考题1.1.测定血清的方法有哪些？各有何优缺点？测定血清的方法有哪些？各有何优缺点？2.2.测定血清的临床意义？测定血清的临床意
13、义？实验二实验二 红细胞表面不完全抗体的检测红细胞表面不完全抗体的检测一、直接试验（试管法一、直接试验（试管法）实验目的实验目的1.1.掌握直接试验的原理和操作方法。掌握直接试验的原理和操作方法。2.2.熟悉试验的临床意义。熟悉试验的临床意义。患者红细胞患者红细胞试剂试剂检测红细胞上不完全抗体检测红细胞上不完全抗体实验原理实验原理 实验材料1.诊断试剂 抗球蛋白试剂；2.待测患者红细胞；3.生理盐水、小试管、吸管、离心机等。操作步骤操作步骤用生理盐水配用生理盐水配5%5%红细胞悬液红细胞悬液取洁净小试管取洁净小试管2 2支，支，1 1管加管加1 1滴滴5%5%红细胞红细胞悬液，另一管加生理盐水
14、作对照悬液，另一管加生理盐水作对照 在生理盐水和在生理盐水和5%5%红细胞悬液中分别加入红细胞悬液中分别加入诊断试剂一滴，使其混匀，室温稍待片诊断试剂一滴，使其混匀，室温稍待片刻刻1000r1000r离心离心1 1 或或3000r3000r离心离心15s15s。取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻轻摇动试管，如有凝集，则为阳性结果；轻摇动试管，如有凝集，则为阳性结果；如无凝集，应在室温延长如无凝集，应在室温延长1530 1530 的反应的反应时间，再离心看结果。时间，再离心看结果。注意事项注意事项1.1.每次试验均须设阴、阳性对照，如阴每次试验均须设阴、阳性对照
15、，如阴性对照发生自凝，实验无效。性对照发生自凝，实验无效。2.2.受检血标本必须新鲜。受检血标本必须新鲜。3.3.洗涤后的红细胞和器材都不能残留有洗涤后的红细胞和器材都不能残留有血浆蛋白，以免出现假阴性。血浆蛋白，以免出现假阴性。4.4.操作过程中动作轻柔，特别是观察反操作过程中动作轻柔，特别是观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力过大。过大。5.5.判定结果时，溶血与凝集有同样意义。判定结果时，溶血与凝集有同样意义。6.6.试验后应将玻片即时放入消毒缸内。试验后应将玻片即时放入消毒缸内。结果分析结果分析 生理盐水对照不应发生凝集，为均匀生理盐水对照不应发生
16、凝集，为均匀浑浊的乳状液。在红细胞悬液中，如红细浑浊的乳状液。在红细胞悬液中，如红细胞凝集成片状，边缘皱褶如花边状或边缘胞凝集成片状，边缘皱褶如花边状或边缘松散为阳性。如与对照相同，为阴性。松散为阳性。如与对照相同，为阴性。临床意义 直接试验用于检测患者红细胞上不完全抗体，试验阳性可见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤等。思考题 直接试验的原理及临床意义？二、间接试验（微柱凝胶法二、间接试验（微柱凝胶法）实验目的实验目的1.1.掌握间接试验的原理和操作方法。掌握间接试验的原理和操作
17、方法。2.2.熟悉试验的临床意义。熟悉试验的临床意义。患者血清靶红细胞致敏红细胞试剂检测血清中的抗红细胞抗体检测血清中的抗红细胞抗体实验原理实验原理 实验材料实验材料1.1.微柱凝胶卡微柱凝胶卡 内含抗球蛋白试内含抗球蛋白试剂；剂；2.2.筛选红细胞筛选红细胞 一般由一般由2323人份人份O O型红细胞型红细胞组成一套试剂组成一套试剂3.3.待测患者血清；待测患者血清；4.4.生理盐水、小试管、吸管、试管生理盐水、小试管、吸管、试管架、离心机、温箱等。架、离心机、温箱等。操作步骤操作步骤撕开微柱凝胶卡密封纸，标记撕开微柱凝胶卡密封纸，标记加加1%筛选红细胞筛选红细胞50l及受检者血清及受检者血
18、清25l37孵育孵育15离心机离心离心机离心10，1000 观察结果，如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳观察结果，如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳性结果；反之，如红细胞沉于凝胶底部（管底尖部），则为性结果；反之，如红细胞沉于凝胶底部（管底尖部），则为阴性结果。阴性结果。注意事项1.反应卡封口有损坏，管中干涸或有气泡时，不可使用。使用前必须清楚标记试剂卡,一定要空离心一次后备用。2.不要将试剂卡长期保存4，在此温度下，试剂卡中液体蒸发凝集于封口铝箔下，胶易干涸，应将试剂卡保存在1822。3.细胞浓度为0.81%，浓度过高或过低，均可减弱凝集强度。4.纤维蛋白可吸附部分红细胞，导致假
19、阳性结果。5.细菌污染、不适宜储存或过期都能使试剂失效。6.须设阴、阳性对照。7.微柱凝胶管中出现溶血现象，特别提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其它原因所致溶血，对此标本一定要认真分析。结果分析结果分析-100%的红细胞沉在微管的底部的红细胞沉在微管的底部 100%的红细胞沉在微管的下端的红细胞沉在微管的下端1/3之内之内1+80%的红细胞沉在微管的下端的红细胞沉在微管的下端2/3之内之内2+80%的红细胞沉在微管的上端的红细胞沉在微管的上端2/3之内之内3+80%的红细胞沉在微管的上端的红细胞沉在微管的上端1/3之内之内4+凝集的细胞全部处于微管的顶部凝集的细胞全部处于微管的顶部.双群
20、双群.溶血溶血反应格局及判断标准反应格局及判断标准 临床意义 间接试验用于检测患者游离血清中的不完全抗体。此实验多用于检测母体（D）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生，亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。小结和讨论小结和讨论1.检测抗红细胞不完全抗体的常用方法为抗球蛋白试验，检测抗红细胞不完全抗体的常用方法为抗球蛋白试验，又称为试验，直接试验用于检测患者红细胞上不完全抗又称为试验，直接试验用于检测患者红细胞上不完全抗体；间接试验用于检测患者游离血清中的不完全抗体。体；间接试验用于检测患者游离血清中的不完全抗体。2试验阳性可见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合试验阳性可见
21、于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼性溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤等。疮、类风湿、恶性肿瘤等。思考题 1.新生儿溶血症发生的机制是什么？2.微柱凝胶免疫试验可能出现的结果有哪些，试分析原因？实验三实验三 循环免疫复合物的检测循环免疫复合物的检测 实验目的实验目的1.1.掌握比浊法检测循环免疫复合物的原理掌握比浊法检测循环免疫复合物的原理和方法。和方法。2.2.熟悉循环免疫复合物检测的临床意义。熟悉循环免疫复合物检测的临床意
22、义。实验原理实验原理 本试验是检测抗原非特异性循环免疫复合物本试验是检测抗原非特异性循环免疫复合物的一种方法。是环氧乙烷和水的多聚物，为一种的一种方法。是环氧乙烷和水的多聚物，为一种不带电荷的直链大分子多糖。终浓度为不带电荷的直链大分子多糖。终浓度为3%3%4%4%的的能相对选择性地沉淀。用分光光度计测定浊度，能相对选择性地沉淀。用分光光度计测定浊度，反应沉淀物含量。反应沉淀物含量。实验材料18.4 0.1 硼酸盐缓冲液（）硼砂4.29g、硼酸3.40g，蒸馏水加至1000，溶解后用G3或G4号玻璃滤器过滤；2稀释液 6000 40.0g、10.0g、加至1000，溶解后用G3或G4号玻璃滤器
23、过滤；3.待检血清、微量加样器、试管、吸管及橡皮滴头等；4.分光光度计。加入物加入物测试管测试管对照管对照管（）（）2.0稀释液（）稀释液（）2.0待检血清（）待检血清（）0.20.237水浴水浴60分光光度计测分光光度计测A495值值 操作步骤操作步骤 注意事项1.4能沉淀较小的，2只能沉淀较大的，但浓度大于5%，选择性沉淀的特性即行消失，导致假阳性的出现。2.应注意实验温度变化对结果的影响，离心速度与时间也应严格掌握。3.低密度脂蛋白可引起浊度增加，故应空腹采血。4.高球蛋白血症以及血清标本反复冻融，均易造成假阳性。结果分析 待检血清浊度值=（测定管吸光度-对照管吸光度）100，以大于正常
24、人浊度值均值加2个标准差为阳性。参考值：正常人血清的A值为4.32.0，以8.3为免疫复合物阳性。临床意义 循环免疫复合物（，）又称可溶性免疫复合物，分子量为50万100万，沉降系数8.819S，它不易被吞噬细胞吞噬，又不能经肾小球排出，可较长时间在血液中循环，一旦大量循环免疫复合物沉积于组织中，则引起组织损伤及相关的免疫复合物病。阳性常见于：1.部分自身免疫性疾病，如，类风湿关节炎等；2.膜增殖性肾炎，链球菌感染后肾炎；3.传染病，如慢性乙型肝炎，疟疾，麻风等；4.恶性肿瘤。小结和讨论小结和讨论1.循环免疫复合物的检测有助于辅助诊断某些免疫复合物疾病，如血循环免疫复合物的检测有助于辅助诊断某
25、些免疫复合物疾病，如血清病、慢性活动性肝炎时，往往较高；此外，对的动态检测有清病、慢性活动性肝炎时，往往较高；此外，对的动态检测有助于监视某些疾病的发展，协助判断疗效和预后；有助于探讨研助于监视某些疾病的发展，协助判断疗效和预后；有助于探讨研究型变态反应疾病的发病机制。究型变态反应疾病的发病机制。2.此法快速简便，但特异性较差，仅适于筛选。检测方法较多，原理此法快速简便，但特异性较差，仅适于筛选。检测方法较多，原理各不相同，结果也不尽一样，因此最好采用多种方法同时进行，以各不相同，结果也不尽一样，因此最好采用多种方法同时进行，以提高阳性检出率。由于在病理状态下往往是单一种类抗原抗体复合提高阳性
26、检出率。由于在病理状态下往往是单一种类抗原抗体复合物增高，这种增高只有达到影响总水平才能被检出，所以有时检测物增高，这种增高只有达到影响总水平才能被检出，所以有时检测抗原特异性更为重要。抗原特异性更为重要。思考题思考题 循环免疫复合物检测的临床意义？循环免疫复合物检测的临床意义？病案讨论病案讨论 超敏反应性疾病超敏反应性疾病实验目的实验目的 通过病案讨论、提出问题、应用通过病案讨论、提出问题、应用免疫学技术检测有关免疫学指标，将免疫免疫学技术检测有关免疫学指标，将免疫学技术应用于临床实践，对临床疾病做出学技术应用于临床实践，对临床疾病做出诊断或医疗建议，进而对有关问题产生深诊断或医疗建议，进而
27、对有关问题产生深入研究的学习动机。入研究的学习动机。病案讨论一病案讨论一 患者王患者王X X，女，女2828岁。因上呼吸道感岁。因上呼吸道感染前来我院就诊。按医嘱作青霉素皮试阴性，染前来我院就诊。按医嘱作青霉素皮试阴性，给静滴青霉素给静滴青霉素800800万万U U加加52505250。患者上午。患者上午9 9点左点左右开始输液，约右开始输液，约1 1点点4040分左右输液毕，无任何分左右输液毕，无任何不适反应，下午不适反应，下午3 3点左右患者感觉全身不适，点左右患者感觉全身不适，似有好多虫子、蚂蚁在身上爬，全身紧困，似有好多虫子、蚂蚁在身上爬，全身紧困，随即出现心慌等不适前来复诊。一般尚可
28、，随即出现心慌等不适前来复诊。一般尚可，痛苦面容，测痛苦面容，测100/70100/70、P128P128次次/分、心电监护分、心电监护提示频繁室早、提示频繁室早、R30R30次次/分、明显缺氧症。遵分、明显缺氧症。遵医嘱给肌注肾上腺素医嘱给肌注肾上腺素1 1，52505250，地塞米松，地塞米松1010静静滴；第二组滴；第二组10250 10250，利多卡因，利多卡因100100，给氧等处，给氧等处理后症状仍无明显改善转入入院治疗，入院理后症状仍无明显改善转入入院治疗，入院后给抗过敏、抗心律失常治疗，一周后病人后给抗过敏、抗心律失常治疗，一周后病人自觉症状消失，痊愈出院。自觉症状消失，痊愈出
29、院。问题：问题：1.1.该患者有可能属于哪型超敏反应？该患者有可能属于哪型超敏反应？2.2.如何进行免疫学诊断？如何进行免疫学诊断？病案讨论二病案讨论二 第一胎足月儿，顺产无窒息，体重第一胎足月儿，顺产无窒息，体重32003200克，生后母乳喂养。第克，生后母乳喂养。第2 2天出现黄疸，天出现黄疸，第第3 3天加重，测总胆红素天加重，测总胆红素1818，患儿精神较差，患儿精神较差，有贫血貌。体查：除黄疸外，无其他阳性体有贫血貌。体查：除黄疸外，无其他阳性体征。母亲为阴性血型，胎儿为阳性血型。征。母亲为阴性血型，胎儿为阳性血型。问题：问题：1.1.如何进行诊断和鉴别诊断？如何进行诊断和鉴别诊断？
30、2.2.还须做哪些实验室检查？还须做哪些实验室检查？病案讨论三病案讨论三 患者何患者何X X，女，女，1919岁，自岁，自3 3年前有间断年前有间断关节疼痛，曾服用解热止痛的西药无明显好转，关节疼痛，曾服用解热止痛的西药无明显好转，半年前出现面部红斑，发热，关节疼痛加重，半年前出现面部红斑，发热，关节疼痛加重，诊断为诊断为“系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮”，应用强的松及环，应用强的松及环磷酰胺等药物治疗，半年来面部红斑时轻时重，磷酰胺等药物治疗，半年来面部红斑时轻时重，就诊时口服强的松每日就诊时口服强的松每日1515，面部蝶形红斑呈暗，面部蝶形红斑呈暗红色，双手红斑色鲜，自觉发热，五心烦热，红色
31、，双手红斑色鲜，自觉发热，五心烦热，体温正常，口干咽燥，失眠盗汗，口腔溃疡，体温正常，口干咽燥，失眠盗汗，口腔溃疡，脱发，疲乏，多关节疼痛，下肢皮下见数个紫脱发，疲乏，多关节疼痛，下肢皮下见数个紫斑，刷牙时偶有牙龈出血，腰部有酸痛感，饮斑，刷牙时偶有牙龈出血，腰部有酸痛感，饮食及二便正常，月经量少，色淡，舌淡红，苔食及二便正常，月经量少，色淡，舌淡红，苔薄黄，脉弦细，心肺无明显阳性体征。初步判薄黄，脉弦细，心肺无明显阳性体征。初步判断为型超敏反应。化验血红蛋白断为型超敏反应。化验血红蛋白103103，血白细，血白细胞胞5.05.0109109，血小板，血小板6060109109，尿蛋白，尿蛋白
32、，2424小小时尿蛋白定量时尿蛋白定量3.0g3.0g，尿中红细胞，尿中红细胞+，血沉，血沉3434，肝肾功能正常，抗核抗体阳性，滴度为肝肾功能正常，抗核抗体阳性，滴度为1:1601:160，抗抗体阳性，血免疫球蛋白系在正常范围，补抗抗体阳性，血免疫球蛋白系在正常范围，补体体C3C3稍低于正常。稍低于正常。问题：试分析还须做哪些实验室检查以进问题：试分析还须做哪些实验室检查以进一步明确诊断？一步明确诊断？病案讨论四病案讨论四 女性，女性，5959岁，间断咳嗽、咳痰岁，间断咳嗽、咳痰5 5年，加重伴咯血年，加重伴咯血2 2个月。患者个月。患者5 5年前受凉后年前受凉后低热、咳嗽、咳白色粘痰，给予
33、抗生素及低热、咳嗽、咳白色粘痰，给予抗生素及祛痰治疗，祛痰治疗，1 1个月后症状不见好转，体重个月后症状不见好转，体重逐渐下降，后拍胸片诊为逐渐下降，后拍胸片诊为“浸润型肺结浸润型肺结核核”，肌注链霉素，肌注链霉素1 1个月，口服利福平、个月，口服利福平、雷米封雷米封3 3个月，症状逐渐减轻，遂自行停个月，症状逐渐减轻，遂自行停药，此后一直咳嗽，少量白痰，未再复查药，此后一直咳嗽，少量白痰，未再复查胸片。胸片。2 2个月前劳累后咳嗽加重，少量咯个月前劳累后咳嗽加重，少量咯血伴低热、盗汗、胸闷、乏力又来诊。体血伴低热、盗汗、胸闷、乏力又来诊。体查：两上肺呼吸音稍减低，并闻及少量湿查：两上肺呼吸音
34、稍减低，并闻及少量湿罗音，心叩不大，心率罗音，心叩不大，心率9494次次/分，律齐，分，律齐，无杂音。结核菌素皮试阳性。无杂音。结核菌素皮试阳性。问题：问题：1 1、该患者属于哪一型超敏反应？、该患者属于哪一型超敏反应？2 2、还须做哪些实验室检查？、还须做哪些实验室检查？病案讨论提示病案讨论提示病案讨论一：病案讨论一：1.该患者属于该患者属于I型超敏反应。型超敏反应。2.免疫学诊断免疫学诊断 分为体内检测（如皮肤试验）分为体内检测（如皮肤试验）和体外测定，详见实验一和临床见习。和体外测定，详见实验一和临床见习。病案讨论二：病案讨论二：1.诊断和鉴别诊断诊断和鉴别诊断（1）生理性黄疸：生后）生
35、理性黄疸：生后23d出现，出现，45d达到高峰，达到高峰，总胆红素值总胆红素值12.9，710d消退。消退。本例特点：总胆红素本例特点：总胆红素18，超过峰值。，超过峰值。（2）感染性黄疸：先天感染：查血）感染性黄疸：先天感染：查血“”“”后天感染：有没有感染病灶后天感染：有没有感染病灶 本例无症状、无感染病灶、母亲无感染史，本例无症状、无感染病灶、母亲无感染史，可排除感染性黄疸。可排除感染性黄疸。因胎儿总胆红素因胎儿总胆红素18，精神较差，有贫血貌，精神较差，有贫血貌，母亲为阴性血型，胎儿为阳性血型。母亲为阴性血型，胎儿为阳性血型。是否为血型不合引起的新生儿溶血？是否为血型不合引起的新生儿溶
36、血？2.实验室检查实验室检查（1）血常规）血常规（2）抗体检测）抗体检测（3）直接试验和间接试验（须检测母亲血清中抗）直接试验和间接试验（须检测母亲血清中抗体效价）体效价）病案讨论三：病案讨论三：实验室检查：实验室检查：1.血常规血常规2.尿常规尿常规3.肝、肾功能、腹部肝、肾功能、腹部B超超4 谱及其他免疫抗体检查谱及其他免疫抗体检查5.血清免疫球蛋白，补体血清免疫球蛋白，补体C3、C4检查检查6.循环免疫复合物检测并结合局部免疫复合循环免疫复合物检测并结合局部免疫复合物的免疫组化检测结果以明确病变是否与型物的免疫组化检测结果以明确病变是否与型超敏反应有关。超敏反应有关。病案讨论四：病案讨论
37、四：该患者属于型超敏反应。该患者属于型超敏反应。实验室检查：实验室检查：1线胸片线胸片 2.化学发光法测结核分枝杆菌化学发光法测结核分枝杆菌3.痰找结核菌，必要时经纤维支气管镜取分泌痰找结核菌，必要时经纤维支气管镜取分泌物找结核菌，支气管内膜活检，血清结核抗物找结核菌，支气管内膜活检，血清结核抗体检测。体检测。4.化验：血常规、尿常规化验：血常规、尿常规 临床见习临床见习 临床常用超敏反应性疾病临床常用超敏反应性疾病 免疫学检测项目与临床应用免疫学检测项目与临床应用实验目的实验目的 掌握各型超敏反应常用的掌握各型超敏反应常用的免疫学检测项目及临床应用免疫学检测项目及临床应用一、一、I I型超敏
38、反应免疫学检测项目及临床应用型超敏反应免疫学检测项目及临床应用1型超敏反应常见的免疫学检测项目型超敏反应常见的免疫学检测项目2.临床应用临床应用（1）寻找变应原：（2）预防药物或疫苗过敏：（3）评价宿主细胞免疫状态：（4）传染病的诊断：二、型超敏反应免疫学检测项目及临床应用二、型超敏反应免疫学检测项目及临床应用1型超敏反应常见的免疫学检测项目型超敏反应常见的免疫学检测项目2.临床应用临床应用 通过检测孕妇血清或胎儿羊水抗体可防止血型不合所致死通过检测孕妇血清或胎儿羊水抗体可防止血型不合所致死胎或新生儿溶血症的发生。试验临床应用同前。胎或新生儿溶血症的发生。试验临床应用同前。三、型超敏反应免疫学
39、检测项目及临床应用三、型超敏反应免疫学检测项目及临床应用1型超敏反应常见的免疫学检测项目型超敏反应常见的免疫学检测项目2.临床应用临床应用 抗原特异性免疫复合物检测方法的优点抗原特异性免疫复合物检测方法的优点是特异性高，通过检测可以了解引起免疫复合是特异性高，通过检测可以了解引起免疫复合物病的抗原，但在大多数情况下，免疫复合物物病的抗原，但在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂，所以抗原中的抗原性质不太清楚或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。抗原非特异性免疫复合特异性方法并不常用。抗原非特异性免疫复合物的检测仅是检测血清中循环免疫复合物，方物的检测仅是检测血清中循环免疫复
40、合物，方法很多，其原理各不相同，用一种方法测定为法很多，其原理各不相同，用一种方法测定为阳性，另一种方法检测可能为阴性；但与免疫阳性，另一种方法检测可能为阴性；但与免疫组化法一起检测，其意义就大得多。组化法一起检测，其意义就大得多。四、型超敏反应免疫学检测项目及临床应用四、型超敏反应免疫学检测项目及临床应用1型超敏反应常见的免疫学检测项目型超敏反应常见的免疫学检测项目 皮肤试验，常用的方法是结核菌素皮试和斑贴皮肤试验，常用的方法是结核菌素皮试和斑贴试验试验 （）。）。2.临床应用临床应用 1）寻找变应原：斑贴试验主要用于寻找接触性）寻找变应原：斑贴试验主要用于寻找接触性皮炎变应原。皮炎变应原。2）结核菌素皮试目的：了解机体是否对结核）结核菌素皮试目的：了解机体是否对结核杆菌有免疫力；接种卡介苗后的免疫效果杆菌有免疫力；接种卡介苗后的免疫效果观察；排除结核杆菌感染；了解机体细观察；排除结核杆菌感染；了解机体细胞免疫功能状况。胞免疫功能状况。3）传染病的诊断）传染病的诊断 中南大学中南大学 张文玲张文玲.（.）成立于2004年，专注于企业管理培训。提供60万企业管理资料下载，详情查看：http:/
