1、南京医科大学南京医科大学 作为两栖类动物蟾蜍或蛙心起搏点的静脉窦能自动产生节律性兴奋。将失去神经支配的离体蛙心保持在适宜的理化环境中（用任氏液灌流），在一定时间内仍能保持节律性兴奋，产生节律性收缩。心脏正常的节律性活动依赖于内环境理化因素的相对稳定，因此，改变灌流液的成份，可以引起心脏活动的改变。工作细胞 静息电位：K+平衡电位 动作电位：Na+、K+、Ca2+心脏的神经支配 心交感神经：递质去甲肾上腺素 心迷走神经：递质是乙酰胆碱 体液调节例如：血儿茶酚胺（肾上腺素、去甲肾上腺素）本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法，并观察钠、钾、钙三种离子、肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。破坏脑
2、和脊髓 开胸，暴露心脏 在两根主动脉下方穿两根线备用，另在左主动脉下方穿一根线，接扎左主动脉 左主动脉根部剪口，插管：先入主动脉圆锥，插管稍稍后退，旋转约90度，在心室收缩期将插管插入心室，此时瓣膜打开，容易进入。如插好，插管内的任氏液面会随心室的舒缩而上下波动。任氏液简单换洗（防止血凝，产生小的血块堵塞插管）结扎，绕侧勾，剪断两根主动脉 在静脉窦下方结扎，剪断静脉。换洗数次，直至蛙心变黄。蛙心插管内的任氏液面保持在合适的高度。连接装置。蛙心夹在舒张期夹住心尖，线绕过滑轮连接换能器（可防止损坏换能器，还可防止蛙心不被拉穿，拉破）蛙心插管蛙心插管 插管切忌用力过大，和插管过深，插入肌肉。第3根结
3、扎线尽量下压，以免伤及静脉窦。游离蛙心时，勿伤及静脉窦，要连静脉窦 一起取下。在心脏收缩期插入插管 在心脏舒张期夹蛙心夹 蛙心插管中的液面应保持恒定，以免影响实验 结果 吸新鲜任氏液的滴管要与吸插管内液体的滴管 要分开，以免影响实验现象的观察和结果分析 进行各观察项目时，作用明显后应立即用新 鲜任氏液换洗，以免心肌受损，心跳难以恢复 待心跳恢复正常频率和幅度后，方能进行下一 步实验。滴加药品时，要及时标记，以方便观察分析1)描记正常曲线，观察收缩与舒张相2)蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65的NaCl3)全部更换为新鲜任氏液，反复换洗数次，待曲线恢复正常，滴加2%CaCl 1-2滴4)任氏液
4、反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加1%KCl 1-2滴5)任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加1:10000肾上腺素(Adr)1-2滴6)任氏液反复换洗，曲线恢复正常，在任氏液中滴加1:10000乙酰胆碱(Ach)1-2滴 正常蛙心收缩曲线 曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。曲线密度：代表心跳频率。曲线的规律性：代表心跳的节律性。曲线的基线：代表心室舒张的程度。曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65的NaCl后，曲线（观察收缩幅度，舒张程度以及心率）有什么变化？为什么？滴加2%CaCl 1-2滴后曲线有什么变化？为什么？在任氏液中滴加1%KCl 1-2
5、滴曲线有什么变化？为什么？在任氏液中滴加1:10000肾上腺素(Adr)1-2滴后曲线有什么变化？为什么？在任氏液中滴加1:10000乙酰胆碱(Ach)1-2滴后曲线有什么变化？为什么？1.低钙低钙：心肌的收缩活动是由Ca2+触发的，由于心肌细胞的肌浆网不发达，故心肌收缩的强弱与细胞外Ca2+的浓度成正比。任氏液中含有0.65%的NaCl，也含有Ca2+，但全部换成0.65%NaCl，没有Ca2+，造成灌流液中缺少钙离子缺少钙离子，以致心肌细胞动作电位2期内流的Ca2+减少，胞浆内Ca2+浓度减少，所以心肌的收缩活动减弱。如果长时间用0.65的NaCl溶液灌注蛙心，心脏最终会停止收缩，但心肌仍
6、能产生动作电位，这种现象称为兴奋收缩脱耦联，是心肌细胞内缺少Ca2+的表现。2.高钙：高钙：蛙心收缩力增强，但舒张不完全，收缩基线上移。在Ca2+浓度较高的情况下，心脏会停止在收缩状态，称为钙僵。心肌的舒缩活动与肌浆中的Ca2+浓度高低有关，当Ca2+浓度升高至10-5mol/l时，作为钙受体的肌钙蛋白结合了足够的Ca2+，这就引起肌钙蛋白分子构型的改变，从而触发肌丝滑行，肌纤维收缩。当肌浆中的Ca2+浓度降至10-7mol/l时，Ca2+与肌钙蛋白解离，心肌随之舒张。当用高Ca2+任氏液灌注蛙心，使得肌浆中的Ca2+浓度不断升高，Ca2+与肌钙蛋白结合数量不断增加，甚至达到只结合而不解离的程
7、度，于是，心肌将持续收缩，出现钙僵。3.高高K+：心跳明显减弱，甚至出现心脏停止于舒张状态的现象。一：细胞外K浓度升高时，K+与Ca2+有竞争性拮抗作用，K+可以抑制细胞膜对Ca2+的转运，使进入细胞内的Ca2+减少，心肌的兴奋收缩耦联过程减弱，心肌收缩力降低。二：细胞外K+浓度升高时，膜内外的K+浓度梯度减小，静息电位的绝对值减小，当轻微的高K+时，细胞的静息电位抬高，使得容易达到阈电位，兴奋性提高。但当细胞外K+浓度显著升高时，静息电位的绝对值过度减小，Na+离子通道失活，心肌的兴奋性丧失，不能兴奋和收缩，停止于舒张状态。4.加入肾上腺素肾上腺素后，可见曲线幅度明显加大，蛙心收缩增强，基线下降，心脏舒张完全。肾上腺具有正性变力，正性变时，正性变传导作用。机理为：肾上腺与心肌细胞上的受体相结合，提高心肌细胞与肌浆网膜Ca2+通透性，导致肌浆中Ca2+浓度升高，心肌收缩增强。另外，肾上腺还有降低肌钙蛋白与Ca2+的亲和力，促使肌钙蛋白对Ca2+的释放速率增加，提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度，使复极期向细胞外排出Ca2+的作用加速。这样，使心肌舒张速度增快，舒张完全。5乙酰胆碱：乙酰胆碱：使得蛙心收缩减弱，收缩曲线基线下移，心率减慢。与心肌细胞膜M受体结合，可以使腺甘酸环化酶抑制，细胞内CAMP浓度降低，肌浆网释放Ca2+减少，收缩力减弱。
