1、哈尔滨医科大学公共卫生学院哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室卫生毒理学教研室任锐任锐毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课 当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。具有这种能和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。因力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化此，应用小鼠骨髓细胞染
2、色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。的性质和强弱。二、原理二、原理毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课动物选择动物选择 选用选用18g18g24g24g雄性健康小鼠，每组雄性健康小鼠，每组6 61010只。只。染毒与取样时间染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。末一般染毒一次或多次，多次更为合理。末次染毒后次染毒后24h24h处死动物，收获细胞。处死动物，收获细胞。剂量剂量 最高剂量最大耐受剂量或，最高剂量最大耐受剂量或，1/31/31/8LD501/8L
3、D50；最低剂量应为最大给药量或人使用量的最低剂量应为最大给药量或人使用量的5050100100倍；倍；阴性对照组给予阴性对照组给予40mg/kg40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；环磷酰胺（腹腔注射）；阴性对照给予溶剂。阴性对照给予溶剂。4.4.给药途径给药途径 原则上采用与人接触受试物相同的途径。原则上采用与人接触受试物相同的途径。四、实验设计四、实验设计毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课注射秋水仙素注射秋水仙素骨髓细胞制备：骨髓细胞制备：取股骨，取股骨，PBS5ml冲洗骨髓细胞，冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心，离心10min，弃去上清。，弃去上清。低
4、渗：低渗：0.4%氯化钾水溶液氯化钾水溶液5ml，37低渗低渗30min，1000r/min，离心，离心10min，弃去上清。弃去上清。固定：固定：加入加入3：1甲醇和冰醋酸溶液甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以后，以1000r/min离心离心10min，弃上清。，弃上清。制片制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每处滴片，每张片子滴张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。滴细胞悬液，使细胞自然分散。干燥：干燥：将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记将制好的片子置空
5、气中自然干燥，并做好标记染色：染色：Giemsa染色染色15min水冲水冲干燥，阅片干燥，阅片毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课低倍镜、高倍镜和油镜。染色体数目和染色体结构。染色：Giemsa染色15min最低剂量应为最大给药量或人使用量的50100倍；了解动物体内染毒及染色体畸变类型。低倍镜、高倍镜和油镜。了解动物体内染毒及染色体畸变类型。了解动物体内染毒及染色体畸变类型。制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1
6、000r/min离心10min，弃上清。具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。哈尔滨医科大学公共卫
7、生学院动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。%100%100%分析的染色体总数畸变染色体总数）染色体畸变率（分析染色体的细胞总数有染色体畸变的细胞数）细胞畸变率（毒理学基础实验课毒理学基础实验课八、组织分工八、组织分工毒理学基础实验课毒理学基础实验课八、总八、总 结结毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课毒理学基础实验课制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm
8、5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。哈尔滨医科大学公共卫生学院低渗时间十分重要，时间太短则染色体分散不开，无破裂，染色体丢失。低倍镜、高倍镜和油镜。染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。染色体数目和染色体结构。动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。当某种化学物质作用于染色体并
9、使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。骨髓细胞制备：取股骨，PBS5ml冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心10min，弃去上清。具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。染色体数目和染色体结构。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。每只小鼠分析100个骨髓细胞。掌握正常小鼠的骨髓染色体数目和形态。阴性对
10、照给予溶剂。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。学习动物骨髓细胞标本制作。染色体数目和染色体结构。当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱
11、。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。染色体畸变分析（Chromosome Aberration Analysis)因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能
12、否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验末次染毒后24h处死动物，收获细胞。染色：Giemsa染色15min哈尔滨医科大学公共卫生学院阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；染色：Giemsa染色15min阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；末次染毒后24h处死动物，收获细胞。染色体数目和染色体结构。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳
13、头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。骨髓细胞制备：取股骨，PBS5ml冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心10min，弃去上清。染色体数目和染色体结构。干燥：将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清
14、。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。染色体数目和染色体结构。低倍镜、高倍镜和油镜。具有这种能力的化学物质可能对生物体产生潜在性的远期危害。干燥：将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。染色体数目和染色体结构。制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时
15、剩余的细胞数过少。干燥：将制好的片子置空气中自然干燥，并做好标记固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。哈尔滨医科大学公共卫生学院阴性对照组给予40mg/kg环磷酰胺（腹腔注射）；低倍镜、高倍镜和油镜。动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。给药途径 原则上采用与人接触受试物相同的途径。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过
16、少。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。动物选择 选用18g24g雄性健康小鼠，每组610只。染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。了解动物体内染毒及染色体畸变类型。最低剂量应为最大给药量或人使用量的50100倍；低倍镜、高倍镜
17、和油镜。制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。了解动物体内染毒及染色体畸变类型。最低剂量应为最大给药量或人使用量的50100倍；因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起
18、哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。给药途径 原则上采用与人接触受试物相同的途径。最低剂量应为最大给药量或人使用量的50100倍；当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。低倍镜、高倍镜和油镜。哈尔滨医科大学公共卫生学院固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少
19、。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。剂量 最高剂量最大耐受剂量或，1/31/8LD50；每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。低倍镜、高倍镜和油镜。低倍镜、高倍镜和油镜。最低剂量应为最大给药量或人使用量的50100倍；学习动物骨髓细胞标本制作。染毒与取样时间 一般染毒
20、一次或多次，多次更为合理。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。染毒与取样时间 一般染毒一次或多次，多次更为合理。染色体数目和染色体结构。每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。因此，应用小鼠骨髓细胞染色体畸变分析实验可以检测化学物质能否引起哺乳动物体细胞染色体畸变，以及畸变的性质和强弱。哈尔滨医科大学公共卫生学院每次离心后弃上清时应仔细，注意不要将管底的沉渣吸出，以免最后分析时剩余的细胞数过少。
21、固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳头吸管反复吹打，静止15min后，以1000r/min离心10min，弃上清。骨髓细胞制备：取股骨，PBS5ml冲洗骨髓细胞，1500r/min，离心10min，弃去上清。末次染毒后24h处死动物，收获细胞。4%氯化钾水溶液5ml，37低渗30min，1000r/min，离心10min，弃去上清。当某种化学物质作用于染色体并使其固有的数目和形态结构发生改变时，称为染色体畸变。制片：用乳头吸管吸取混匀的细胞悬液，从玻片上方3cm5cm处滴片，每张片子滴23滴细胞悬液，使细胞自然分散。p 阳性结果的判定：阳性结果的判定：每只小鼠分析每只小鼠分析100100个个骨髓细胞。骨髓细胞。实验组畸变率与阴性对照组比较，并进行统计分析，如果实实验组畸变率与阴性对照组比较，并进行统计分析，如果实验组的畸变率验组的畸变率显著显著高于阴性对照组，并有高于阴性对照组，并有剂量反应关系剂量反应关系，则，则可认为该受试物对小鼠骨髓细胞有致染色体畸变的作用。可认为该受试物对小鼠骨髓细胞有致染色体畸变的作用。毒理学基础实验课毒理学基础实验课
