1、2021/7/261(最新整理)1.1DNA重组技术的基本工具(精校版)2021/7/262专题专题1 基因工程基因工程 1-1 DNA1-1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具2021/7/263设想？设想？能否培养出具有抗虫能否培养出具有抗虫性状的抗虫棉呢？性状的抗虫棉呢？2021/7/2642021/7/2652021/7/2662021/7/2672021/7/2682021/7/269 1-1 DNA1-1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具“分子手术刀分子手术刀”限制酶限制酶“分子缝合针分子缝合针”DNADNA连接酶连接酶“分子运输车分子运输车”基因进入受体细胞的载
2、体基因进入受体细胞的载体 2021/7/2610黏性末端黏性末端平末端平末端4 4、切割方式：、切割方式：错位切和平切错位切和平切2021/7/2611ATGCATGC限制酶切割磷酸二酯键限制酶切割磷酸二酯键2021/7/2612限制性内切酶作用过程2021/7/2613 1 1、大肠杆菌的一种限制酶大肠杆菌的一种限制酶（EcoR)EcoR)能识别能识别GAATTCGAATTC序列，并在序列，并在G G和和A A之间切开形成之间切开形成黏性黏性末端。末端。2 2、SmaSma能识别能识别CCCGGGCCCGGG序列，序列，并在并在C C和和G G之间切割形成之间切割形成平平末端末端 。常见的两
3、种限制酶2021/7/26142021/7/2615黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端2021/7/26162021/7/26172021/7/2618基因的针线：DNADNA连接酶G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同种限制酶切割用同种限制酶切割2021/7/2619ATGCATGC连接酶连接连接酶连接磷酸二酯键磷酸二酯键DNADNA连接酶的作用过程：连接酶的作用过程：二、分子缝合针二、分子缝合针DNA连
4、接酶连接酶2021/7/2620 T磷酸二酯键1234512345 A2021/7/2621作用部位：作用部位：（扶手）（扶手）（梯子）（梯子）2021/7/2622连接连接黏性黏性末端末端连接连接黏性黏性末端和末端和平平末端末端分类分类作用作用E.coli DNA连接酶连接酶连接酶种类：连接酶种类：T4DNA连接酶连接酶2021/7/2623两两DNADNA片段要具有片段要具有互补互补的黏性末端的黏性末端才能拼起来才能拼起来DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的可把黏性末端之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来起来，注意：注意：DNADNA连接酶可连接双链连接酶可连接双链DN
5、ADNA中的中的DNADNA单链缺口，单链缺口，但不能连接单链但不能连接单链DNADNA！2021/7/2624DNADNA连接酶与连接酶与DNADNA聚合酶是一回事吗？聚合酶是一回事吗？T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用2021/7/2625A A T T GA A T T GC CA AA AT TT TA AA AT TT TDNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶的作用聚合酶的作用返回返回2021/7/2626核苷酸分子的连接核苷酸分子的连接：ATGC
6、ATGCDNADNA聚合酶连接单链聚合酶连接单链DNADNA把单个脱氧核苷酸连接到把单个脱氧核苷酸连接到DNADNA片段上片段上2021/7/2627DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶相相同同点点作用实质作用实质化学本质化学本质不不同同点点模板模板作用对象作用对象 作用结果作用结果用途用途都能催化形成都能催化形成磷酸二酯键磷酸二酯键都是蛋白质都是蛋白质不需要不需要需要需要形成完整的重形成完整的重组组DNA分子分子形成形成DNA的一条的一条链链基因工程基因工程DNA复制复制DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶的比较聚合酶的比较只能将单个核苷酸只能将单个核苷酸连接到已有的连接到已有的DNADNA片
7、段上，形片段上，形成磷酸二酯键成磷酸二酯键在两个在两个DNADNA片片段之间形成磷段之间形成磷酸二酯键酸二酯键2021/7/2628三、基因进入受体细胞的载体 1 1、基因工程的载体被喻为、基因工程的载体被喻为：分子运输车分子运输车2 2、常用载体的种类、常用载体的种类：衍生物衍生物2021/7/26292021/7/2630作为载体的必要条件1.1.能够自我复制能够自我复制能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；2.2.有一个至多个限制酶切位点有一个至多个限制酶切位点能与目的基因结合能与目的基因结合3.3.有遗传标记基因有遗传标记基因便于观察便于观察4.4.对受体细胞无害对受体细胞无害安全、比较容易得到安全、比较容易得到2021/7/26312021/7/2632
