1、中心实验室实验安全常识介绍 天津和泽干细胞科技有限公司研发部2015-10内容介绍内容介绍1.分子生物学实验安全常识分子生物学实验安全常识1.1 实验室电、气、水、火1.2 化学试剂的安全使用1.3 紫外线辐射的危害及防护1.4 实验仪器的安全使用1.5 废弃物的处理2.动物实验安全常识动物实验安全常识2.1 实验动物和动物实验研究中对实验动物工作者的危害2.2动物实验研究中注意事项l1.1 实验室电、气、水、火 连线：仪器连线必须使用带有接地的三根线的护套线，不可使用普通的塑连线：仪器连线必须使用带有接地的三根线的护套线，不可使用普通的塑料绞线。电话线可用普通的塑料绞线。料绞线。电话线可用普
2、通的塑料绞线。严禁私拉乱扯。严禁私拉乱扯。接地：仪器应有良好的接地，提高仪器的稳定性及安全系数。接地：仪器应有良好的接地，提高仪器的稳定性及安全系数。维修：仪器出现故障时，应切断电源，立即向实验室负责人报告。维修仪维修：仪器出现故障时，应切断电源，立即向实验室负责人报告。维修仪器时必须切断电源，方可拆机修理。器时必须切断电源，方可拆机修理。墙电：不得私自对墙电进行维修、改造，该工作由实验室负责人进行计划，墙电：不得私自对墙电进行维修、改造，该工作由实验室负责人进行计划，由相关专业人员进行维修、改造。由相关专业人员进行维修、改造。检查：如遇线路老化或损坏应及时地更换。检查：如遇线路老化或损坏应及
3、时地更换。触电：断电或触电：断电或绝缘脱离绝缘脱离 急救急救电灯：进入实验室，有需要时打开电源开关、排气扇；离开实验室时若无电灯：进入实验室，有需要时打开电源开关、排气扇；离开实验室时若无人请关闭电灯及排气扇。人请关闭电灯及排气扇。空调：进入实验室，有需要时可打开空调，温度不得低于空调：进入实验室，有需要时可打开空调，温度不得低于27；每天下班；每天下班时实验室负责人将关闭空调。若在非上班时间内打开空调，离开时请关闭！时实验室负责人将关闭空调。若在非上班时间内打开空调，离开时请关闭！电！电！危危险险节节约约l1.1 实验室电、气、水、火气！气！搬运搬运：搬运或转动钢瓶时，不得用手执着开关阀移动
4、。：搬运或转动钢瓶时，不得用手执着开关阀移动。使用使用：按气瓶的类别选用减压器，安装时螺扣应拧紧，并检漏。：按气瓶的类别选用减压器，安装时螺扣应拧紧，并检漏。开启钢瓶：逆时针方向为开；先开总阀，后开减压阀。开启钢瓶：逆时针方向为开；先开总阀，后开减压阀。关闭钢瓶：顺时针方向为关；先关总阀，后关减压阀。关闭钢瓶：顺时针方向为关；先关总阀，后关减压阀。气嘴保护：用死扳手夹紧气嘴后再开总阀。气嘴保护：用死扳手夹紧气嘴后再开总阀。安全安全：气瓶内的气体不可用尽。：气瓶内的气体不可用尽。惰性气体：应剩余惰性气体：应剩余0.05MPa以上压力的气体。以上压力的气体。可燃气体：应剩余可燃气体：应剩余0.2M
5、pa以上压力的气体。以上压力的气体。存放存放：分类分处存放：分类分处存放 直立放置时要稳妥；气瓶要远离热源；避免曝晒和强烈振动；直立放置时要稳妥；气瓶要远离热源；避免曝晒和强烈振动；一般实验室内存放气瓶量不得超过两瓶。一般实验室内存放气瓶量不得超过两瓶。氢气瓶和氧气瓶不能同存一处。氢气瓶和氧气瓶不能同存一处。l1.1 实验室电、气、水、火水！水！上上 水：水龙头或水管漏水时，应及时向实验室负责人报告，以便及时维水：水龙头或水管漏水时，应及时向实验室负责人报告，以便及时维修。修。下下 水：水：水池内不得倒入培养基、琼脂糖胶等凝胶物质；清洗废液缸时请水池内不得倒入培养基、琼脂糖胶等凝胶物质；清洗废
6、液缸时请注意将其中的固体物质倒入到垃圾桶后才能冲洗，特别是注意将其中的固体物质倒入到垃圾桶后才能冲洗，特别是tip和和eppendorf管。管。下水道排水不畅时，应及时向实验室负责人报告，以便及时疏通。下水道排水不畅时，应及时向实验室负责人报告，以便及时疏通。纯净水：应按照纯净水：应按照“操作规程操作规程”进行操作；取水时应注意及时地关闭取水开进行操作；取水时应注意及时地关闭取水开关，防止溢流。关，防止溢流。l1.1 实验室电、气、水、火火火报警：报警：119（说明火源、火情、单位名称、地理位置，或明显标志）（说明火源、火情、单位名称、地理位置，或明显标志）措施：早发现、早处理、早报告措施：早
7、发现、早处理、早报告 灭火：灭火：学会使用灭火器（一拔、二握、三瞄、四扫）学会使用灭火器（一拔、二握、三瞄、四扫）沉着、冷静沉着、冷静 易燃固体、易燃气体、易燃液体和带电物体着火时，可用易燃固体、易燃气体、易燃液体和带电物体着火时，可用 干粉灭火器灭火干粉灭火器灭火；导线或电器着火时，应先断电，再用导线或电器着火时，应先断电，再用干粉干粉灭火器灭火。灭火器灭火。切不可用泡沫灭火器，此灭火器导电。切不可用泡沫灭火器，此灭火器导电。衣服着火时，应尽快地脱掉衣服，并用水灭火。或就地滚动，衣服着火时，应尽快地脱掉衣服，并用水灭火。或就地滚动，切忌外跑。切忌外跑。防火：火灾不能预期、不能杜绝、只能预防防
8、火：火灾不能预期、不能杜绝、只能预防 消除消除火灾火灾隐患（电、火、气、试剂）隐患（电、火、气、试剂）备逃生四件宝（灭火器、绳、手电筒、防毒面具）备逃生四件宝（灭火器、绳、手电筒、防毒面具）l1.2 化学试剂的安全使用l l 标标 识：自配试剂应贴标签，并注明化合物名称、浓识：自配试剂应贴标签，并注明化合物名称、浓 度、配制日期，以及配制人姓名。度、配制日期，以及配制人姓名。总原则：总原则：药品状态定口径，瓶塞取决酸碱性；药品状态定口径，瓶塞取决酸碱性；受热见光易分解，存放低温棕色瓶；受热见光易分解，存放低温棕色瓶；特殊试剂特殊放，互不反应要记清。特殊试剂特殊放，互不反应要记清。l1.2 化学
9、试剂的安全使用易燃易爆易燃易爆 化学试剂化学试剂：一般将闪点在25以下的化学试剂列入易燃化学试剂，它们多是极易挥发的液体，遇明火即可燃烧。有毒有毒 化学试剂化学试剂：以较小剂量进入人体而导致疾病或死亡的才被划为有毒物质。腐蚀性腐蚀性 化学试剂化学试剂：化学试剂碰到皮肤、粘膜、眼、呼吸器官都有及时清洗，如各种酸和碱、溴、苯酚等。强氧化性强氧化性 化学试剂化学试剂：包括过氧化物和含有强氧化能力的含氧酸及其盐，如硝酸铵、高氯酸及其盐、重铬酸及其盐等。相容相容 化学试剂化学试剂：一些化学试剂在储存和操作过程中不能与其他物质接触，否则就发生爆炸，这些化学试剂称为不相容化学试剂。如：叠氮化物通常用作溶液中
10、的抗菌剂，由于轻微碰撞就可能造成叠氮化铜的爆炸，因此不能与铜接触（如污水管及管道设施）。l1.2 化学试剂的安全使用EB EB是一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中是一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中等毒性。等毒性。EB可以通过皮肤吸收，因此应当避免一切与EB的直接接触。EB对皮肤，眼睛，口腔和上呼吸道系统有刺激性作用。应将EB安全密封，并密闭存放于干燥避光处。提取组织和细胞RNA的一种重要试剂，在提取RNA时一定要在通风橱进行。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，废液埋入地下。Trizoll1.2 化学试剂的安全使用 RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致
11、癌物质。操作时戴口罩，在通风橱中进行。沾到手上立即冲洗，废液通过废液道排泄。DEPC(Diethylprocarbonate)(二乙基焦碳酸酯二乙基焦碳酸酯)常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行操作时戴手套在通风橱里进行，废液收集后埋入地下。CHCl3（Chloroform，氯仿），氯仿）Acrylamide（丙烯酰胺）（丙烯酰胺）DNA测序、SSR及蛋白质分离等技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道.。
12、l1.2 化学试剂的安全使用DMSO（二甲亚砜）（二甲亚砜）是一种既溶于水又溶于有机溶剂的非质子极性溶剂，常用作细胞的冻存液和配制AS。皮肤沾上之后用大量的水洗及1%5%稀氨水洗涤。有毒，易损害眼睛。质粒提取时作裂解液破坏细胞膜和Southern杂交时的洗膜液中的去垢剂。戴合适的手套和安全护目镜，不要吸入其粉末。十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠(SDS)强神经毒性，防止误吸，操作时快速，存放时密封。TEMEDl1.2 化学试剂的安全使用 对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱里操作，操作完后彻底洗手。过硫酸铵过硫酸铵(NH4)2
13、S2O8 毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜，操作时要格外小心。叠氮钠（叠氮钠（NaN3）Triton X-100 引起严重的眼睛刺激和灼伤。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。戴合适的手套和护目镜。l1.2 化学试剂的安全使用 具有中等毒性，对眼及上呼吸道有刺激作用，高浓度时，对中枢系统有麻醉作用。佩戴过滤式防毒面具（半面罩）。带化学安全防护眼镜及橡胶手套，穿防毒物渗透工作服。二甲苯二甲苯 毒性较大且易挥发，也是一种致癌剂，易通过皮肤吸收，对眼镜、粘膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。戴手套和护目镜。始终在通
14、风橱中操作。远离热、火花及明火。甲醛甲醛Trizol 含有毒物质如苯酚，如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请听取一声意见。如果只是少量接触，并处理后症状减轻，估计问题就不大了。l1.3 紫外线辐射的危害和防护 紫外辐射是指波长范围在100nm400nm的光辐射，一般把100nm280nm称作UVC，把280nm315nm称作UVB，把315nm400nm称作UVA。其中我们观察胶体观察胶体用的最多的就是280nm315nm280nm315nm的紫外线的紫外线。紫外线的有害效应主要是由于紫外线对脱氧核糖核酸（DNA）的作用造成的。最有害有害的效应是细胞致死，其它的效
15、应则包括致突、致癌、干扰致突、致癌、干扰DNADNA、核糖核酸（、核糖核酸（RNARNA）和蛋白质的合成、细胞分裂的延迟、以及在通透性和能动性上的变化）和蛋白质的合成、细胞分裂的延迟、以及在通透性和能动性上的变化等。1.紫外光对眼睛的损伤紫外光对眼睛的损伤 白内障白内障被认为过量紫外光辐射的主要原因，经紫外光照射后，射线大部分被角膜上皮细胞核蛋白吸收，导致细胞核膨胀，碎裂和细胞死亡，以至损伤眼角膜和晶状体，导致浑浊。总的说来，紫外光辐射增加，人类的白内障患者增加。l1.3 紫外线辐射的危害和防护2、紫外光对人皮肤的损伤紫外光对人皮肤的损伤 紫外光的影响有积累作用，它的主要机理：蛋白质受紫外光照
16、射后，形成光解产物，此外，其溶解度和粘度，对热变性的敏感性及荧光等物理化学和光学性质均有显著的改变。紫外光对皮肤的作用分为急性作用和慢性作用急性作用和慢性作用。急性作用表现为红斑效应红斑效应其症状为水肿脱皮水肿脱皮，全身症状有寒战，发烧，恶心，罕见循环衰竭。慢性作用如致皮肤老化，色素沉着，加速老化，甚至引起肿瘤皮肤老化，色素沉着，加速老化，甚至引起肿瘤。轻者皮肤出现水肿性红斑，重者会出现水疱或大疱，还可伴有休克，发热，畏寒，恶心，心悸和头昏等症状。3、紫外光对其他部位的损伤紫外光对其他部位的损伤 紫外光辐射对免疫系统的影响，免疫系统的一些成分存在于皮肤中，皮肤暴露在紫外光下，使得免疫系统受紫外
17、光辐射，使其功能受到干扰。研究表明，紫外光辐射的免疫抑制作用可导致皮肤癌免疫抑制作用可导致皮肤癌，同时引起一些传染病和其他一些疾病。l1.3 紫外线辐射的危害和防护 在实验室里常用的紫外光源包括手提式紫外灯和紫外透射仪、凝胶成像系统手提式紫外灯和紫外透射仪、凝胶成像系统。只能通过吸收有害波长的滤片或安全玻璃片才能观察。在紫外光下操作时要戴合适的预防性手套。应佩戴具有紫外线防护功能的护目镜和/或防护面罩，并遮蔽暴露的皮肤。建议：使用荧光染料，切胶在使用荧光染料，切胶在Dark reader上操作。上操作。Dark Reader 荧光透射仪(Transilluminators)的特点:1.Dark
18、 Reader使用新的无毒DNA染料:SYBR Green,SYBR Gold等,避免了Ethidium Bromide(EB)染料对人体的伤害。2.Dark Reader使用可见光（400-500 nm）,没有UV（紫外线），将其对人体的伤害降低 至零。同时，大大降低了对DNA样本的损伤，克隆DNA的效率将成百倍的提高。3.灵敏度高，远远高于UV检测仪。4.适用染料范围广；荧光素（fluorescein）,AttoPhos,GelStar,Vistra Green,SYPRO Orange,red-shifted GFP variants等都可使用。对于Rhodamines,Ethidium
19、 Bromide(EB)等激发光大于500 nm的染料亦可适用；可以广泛用于DNA、RNA 以及蛋白质的检测。5.Dark Reader同时提供琥珀色镜片的观察眼镜（AG16），供切割凝胶时使用。紫外照射消毒后由于空气中臭氧富集，不宜立即开始工作，应在停止紫外照射30 min后开始工作，有条件的实验室，可安装无臭氧紫外灯。超净工作台中进行紫外照射消毒超净工作台中进行紫外照射消毒后，也应用强风进行吹扫后再进行工作，以免臭氧危害身体健康。1.4 实验仪器的安全使用1、液氮罐、液氮罐（1）要小心避免直接接触液氮，当把样品管移出液氮罐时要小心其会）要小心避免直接接触液氮，当把样品管移出液氮罐时要小心其
20、会爆裂。爆裂。（2）选用优质冻存管。禁止用玻璃管保存样品。）选用优质冻存管。禁止用玻璃管保存样品。（3）存取样品时需注意防护。应戴防护镜，手套，口罩，穿防护服。）存取样品时需注意防护。应戴防护镜，手套，口罩，穿防护服。2、高压灭菌器、高压灭菌器（1）定期检查排水桶。）定期检查排水桶。（2）注意防护，防止烫伤，待温度降下后再开盖。）注意防护，防止烫伤，待温度降下后再开盖。（3）一次高压物不宜过多。）一次高压物不宜过多。（4）禁止器皿盖盖高压。）禁止器皿盖盖高压。3、CO2培养箱使用注意事项培养箱使用注意事项（1）定期清洁和消毒。）定期清洁和消毒。（2）防止漏气（）防止漏气（CO2）。）。（3）专
21、人管理，每天检查）专人管理，每天检查CO2，管道，温度等。，管道，温度等。4、离心机：、离心机：（1）在离心感染性材料时要把其放在密封的离心桶内。）在离心感染性材料时要把其放在密封的离心桶内。（2）避免使用质量差的离心管。）避免使用质量差的离心管。（3）专人定期维修、保养、检定。）专人定期维修、保养、检定。（4）仪器放置位置要平，可承重，仪器上避免放置物品。）仪器放置位置要平，可承重，仪器上避免放置物品。1.4 实验仪器的安全使用l1.5 废弃物的处理含有含有EB的废弃物！的废弃物！废液废液描述描述废弃处理方法废弃处理方法储备溶液，氯化铯溶液储备溶液，氯化铯溶液浓度较高浓度较高（1-10mg/
22、mL）浓度之高，使得处理浓度之高，使得处理EB的过的过滤和吸收方法都无法适用。滤和吸收方法都无法适用。将这些储液交由相关部门专将这些储液交由相关部门专业人员处理。业人员处理。凝胶凝胶浓度低浓度低（3-5mg/L）先将凝胶晾干，装入指定的先将凝胶晾干，装入指定的袋子中做好标记后，再交由袋子中做好标记后，再交由相关部门处理。相关部门处理。污染的物件污染的物件手套，清理洒落手套，清理洒落EB用过的材用过的材料，以及实验室中污染料，以及实验室中污染的物品的物品破碎的玻璃和锐器必须放入破碎的玻璃和锐器必须放入坚固的容器，其他材料可摆坚固的容器，其他材料可摆放整齐后装入袋中做好标记，放整齐后装入袋中做好标
23、记，交由相关部门处理。交由相关部门处理。l1.5 废弃物的处理 移液器吸头 使用过的移液器吸头应放入含有10%次氯酸钠溶液的容器内浸泡，浸泡时间不宜少于24 h。PCR产物 含有PCR产物的所有液体及废弃物应放入含有1 mol/L HCl的容器中浸泡，浸泡时间不宜少于6 h；分子生物学实验操作常见废弃物分子生物学实验操作常见废弃物2 动物实验安全常识动物实验安全常识l2.1 实验动物和动物实验研究中对实验动物工作者的危害l2.2动物实验研究中注意事项2.1 2.1 实验动物和动物实验研究中对实验实验动物和动物实验研究中对实验动物工作者的危害动物工作者的危害l实验动物和动物实验研究中对个人的生物
24、危害主要表现为各种人兽共患病及实验性病原体的感染和传播。由于饲喂、换笼及各类实验操作需要与动物密切接触，从事动物实验和动物饲育的人员成为这类危害的首要受害者，其中，动物实验人员因为有更多机会接触实验状态下的非健康动物，受到感染的概率高于动物饲育人员。2.2 2.2 动物实验研究中注意事项动物实验研究中注意事项l1、避免操作中气溶胶的产生 气溶胶是以胶体状态悬浮在大气中的液体或固体微粒，其直径一般为1-5pm，是最适宜引起感染的尺寸。因此在饲育、给药等工作中，必须注意轻柔地抓取、固定动物，保持室内安静，避免突发的声响和动作惊扰动物，禁止在饲养室内清理更换下的笼具和垫料等2.2 2.2 动物实验研
25、究中注意事项动物实验研究中注意事项l2、避免损伤 不适当的捕捉极易导致被动物咬伤、抓伤，动物实验特别是手术过程中，操作人员可能因动物的挣扎、操作技术不熟练、畏惧等因素被针尖、刀、剪等器械所伤，外伤往往成为进一步感染的原因。因此操作人员必须熟练掌握实验动物的捕捉固定方法和各类常用的实验技术，使用袖套、手套等个人防护用品，并借助合适的捕捉及固定设备和其他手段以防范此类危害的发生。2.2 2.2 动物实验研究中注意事项动物实验研究中注意事项l 3、动物剖检中的注意事项 剖检动物时，即便不是感染性的实验，也无确定动物血液、体液、脏器中有无繁殖的病原体，因此严禁在动物饲养室内无任何防止扩散措施的情形下进
26、行剖检，而应到专门的实验室或在专门的设施内进行。剖检时，应将动物固定板放在盘子中，尽量减少对工作面和作业空间的污染机会。剖检前可将动物放人消毒液中浸泡一下或用乙醇擦拭动物体表，以防止动物体毛飞扬，同时可作为无菌取材前的消毒。剖检后应及时清理并消毒操作区域，各种器械、材料和废弃物按规定处理或经无害化后弃置。2.2 2.2 动物实验研究中注意事项动物实验研究中注意事项 4、对动物的管理 熟知动物的正常外观及行为，对动物出现的异常体征能及时发现并采取措施，从而争取控制危害的时机；经常检查关养动物的笼器具及设施，防止动物逃逸或设施对动物造成伤害；对出逃在外的动物，即使能够确认其来源，一般也不应再放回原
27、处，而应视实际晴况作隔离观察或处死丢弃等，尤其严禁任意放人外观相同的动物中继续饲养和实验；实验中须避免搞错动物的分组，因此要养成做各类标志的良好科研习惯；防止将外观相似的不同品系动物混淆等。2.2 2.2 动物实验研究中注意事项动物实验研究中注意事项l5、良好的卫生习惯及正确的个人防护l 工作人员每次接触动物或生物组织等以及结束饲养观察离开前，必须彻底洗手。工作中必须正确穿戴规定的服装，戴好口罩、手套、帽子等，诸如戴口罩只掩住嘴，而把鼻子露在外的错误穿着方法必须纠正。不用手触摸面部、眼、口、鼻等部位，禁止在工作区进食、饮水、吸烟或存放食物。离开工作区域应脱下防护服，工作服应定期清洗消毒，一次性防护用品不得重复使用。
