1、第一节 蛋白质分选的基本原理一、蛋白质分选信号二、蛋白质分选运输的途径第二节 膜泡运输一、衣被类型二、衣被的形成三、膜泡运输的定向机制四、细胞的内吞与外排第三节 内质网一、形态与组成二、RER的功能三、ER的其它功能第四节 高尔基体一、形态与组成二、功能区隔三、主要功能第五节 溶酶体与过 氧化物酶体第二节 胞内膜泡运输 细胞内膜系统之间的物质传递常常通过膜泡运输膜泡运输方式进行。各类运输泡之所能够被准确地运到靶细胞器，主要取决于膜的表面识别表面识别特征。大多数运输小泡是在膜的特定区域以出芽的方式产生的。其表面具有一个笼子状的由蛋白质构成的衣被（coat）。这种衣被在运输小泡与靶细胞器的膜融合之
2、前解体。衣被小泡在细胞内沿微管微管运输。与膜泡运输有关的马达蛋白马达蛋白有3类，在这些马达蛋白的牵引下，可将膜泡运到特定的区域。动力蛋白（dynein），趋向微管负端；驱动蛋白（kinesin），趋向微管正端；肌球蛋白（myosin），趋向微丝的正极。一、衣被类型已知三类：笼形蛋白（clathrin）COPCOP主要作用：选择性的将特定蛋白聚集在一起，形成运输小泡；1.如同模具一样决定运输小泡的外部特征。三种衣被小泡的功能衣被类型 GTP酶组成与衔接蛋白运输方向笼形蛋白clathrinARFClathrin重链与轻链，AP2质膜晚胞内体Clathrin重链与轻链，AP1高尔基体晚胞内体Clat
3、hrin重链与轻链，AP3高尔基体溶酶体，植物液泡COP ARFCOP高尔基体内质网COP Sar 1Sec23/Sec24复合体，Sec 13/31复合体，Sec 16内质网高尔基体（一）笼形蛋白衣被小泡 相关运输途径：质膜晚胞内体，高尔基体晚胞内体，高尔基体溶酶体、植物液泡。结构：由3个重链和3个轻链组成，形成一个具有3个曲臂的形状。许多笼形蛋白的曲臂部分交织在一起，形成具有5边形网孔的笼子。衔接蛋白(adaptin)：介于笼形蛋白与配体受体复合物之间，起连接作用。目前至少发现4种，分别结合不同类型的受体，形成不同性质的转运小泡。当笼形蛋白衣被小泡形成时，可溶性蛋白dynamin聚集成一圈
4、围绕在芽的颈部，将小泡柄部的膜尽可能地拉近（小于1.5nm），从而导致膜融合，掐断（pinch off）衣被小泡。（二）COP 衣被小泡 功能：负责回收、转运内质网逃逸蛋白（escaped proteins）返回内质网，由7种蛋白组成。回收信号：Lys-Asp-Glu-Leu（KDEL）。内质网的膜蛋白（如SRP受体）在C端有一个不同的回收信号Lys-Lys-X-X。COP 还可以介导高尔基体不同区域间的蛋白质运输。Cop and VesiclesLys-Asp-Glu-Leu（KDEL）（三）COP衣被小泡 介导从内质网到高尔基体的物质运输。由多种蛋白质构成，Sar1GTP酶与Sec23/S
5、ec24复合体结合在一起，Sec13/Sec31复合体覆盖在外层。衣被小泡形成的部位，称为内质网出口（exit sites），该处没有核糖体。大多数跨膜蛋白是直接结合在COP 衣被上，少数跨膜蛋白和多数可溶性蛋白通过受体与COP 衣被结合。分选信号位于跨膜蛋白胞质面的结构域，形式多样，有些包含双酸性基序DEXDE，如Asp-X-Glu序列。二、衣被形成 衣被是在一类叫作衣被召集GTP酶（coat-recruitment GTPase）作用下形成的，为单体GTP酶（monomeric GTPase），即G蛋白。调节因子有：鸟苷酸交换因子（guanine-nucleotide exchange f
6、actor,GEF）GTP酶激活蛋白（GTPase activating protein,GAP）。衣被召集GTP酶包括ARF蛋白和SAR 1蛋白。ARF参与高尔基体上笼形蛋白衣被与COP I衣被的形成。SAR 1参与内质网上COP 衣被的形成。衣被召集GTP酶存在于细胞质中，但处于结合GDP的失活状态。内质网上形成COP 衣被小泡时，SAR1释放GDP，结合GTP而激活。激活的SAR 1暴露出一条脂肪酸的尾巴，插入内质网膜，促进衣被蛋白的核化和组装，形成运输小泡。活化的SAR1还可以激活磷脂酶D（phospholipase D），将一些磷脂水解，使形成衣被的蛋白牢固地结合在膜上。当衣被小泡从
7、膜上释放后，衣被很快就解体。三、膜泡运输的定向机制（一）SNAREs soluble NSF attachment protein receptor的作用是介导运输小泡与靶膜的融合。动物细胞中已发现20多种SNAREs，位于运输小泡上的叫作v-SNAREs，位于靶膜上的叫作t-SNAREs。v-和t-SNAREs都具有一个螺旋结构域，能相互缠绕形成跨SNAREs复合体（trans-SNAREs complexes），将运输小泡的膜与靶膜拉在一起，实现运输小泡特异性停泊和融合。在神经细胞中SNAREs负责突触小泡的停泊和融合。破伤风毒素和肉毒素等细菌分泌的神经性毒素实际上是一类特殊的蛋白酶，能够
8、选择性地降解SNAREs，从而阻断神经传导。病毒融合蛋白的工作原理与SNAREs相似，介导病毒与宿主质膜的融合。NSF催化 SNAREs的分离，它能利用ATP作为能量通过插入几个适配蛋白（adaptor protein）将SNAREs复合体的螺旋缠绕分开，以便开始下一轮的转运。（二）Rabs Rabs也叫targeting GTPase，属于单体GTP酶，已知30余种，不同膜上具有不同的Rabs。Rabs作用是促进和调节运输小泡的停泊和融合。Rabs与衣被召集GTP酶相似，起分子开关作用，结合GDP失活，位于细胞质中，结合GTP激活，位于细胞膜、内膜和运输小泡膜上，调节SNAREs复合体的形成
9、。Rabs还有许多效应因子（effector）。四、受体介导的内吞 内吞可分为两类，批量内吞批量内吞（Bulk-phase endocytosis）和受体介导的内吞受体介导的内吞(Receptor mediated endocytosis,RME)，批量内吞是非特异性的摄入细胞外物质，细胞表面的内陷（caveolae）是发生非特异性内吞的部位。受体介导的内吞作用是一种选择浓缩机制选择浓缩机制。低密脂蛋白、运铁蛋白、生长因子、胰岛素等蛋白类激素、糖蛋白等，都是通过受体介导的内吞作用进行的。衣被小窝（coated pits）是质膜向内凹陷的部位，相当一个分子过滤器（molecular filter
10、）。约占肝细胞表面积的2%。受体、笼形蛋白和衔接蛋白大量集中于此处。受体胞质端有一个由4个氨基酸残基组成的序列（Tyr-X-X-），X为任何一种氨基酸，为分子较大的疏水氨基酸，如Phe、Leu、Met等，衔接蛋白对此序列有识别能力。受体同配体结合后启动内化作用，笼形蛋白开始组装。在dynamin的作用下掐断后形成衣被小泡。低密脂蛋白的吸收：胆固醇主要在肝细胞中合成，随后与磷脂和蛋白质形成低密脂蛋白（low-density lipoproteins，LDL），释放到血液中。LDL颗粒的质量为3X106Da，芯部含有被长链脂肪酸酯化胆固醇分子。周围由磷脂和胆固醇构成的脂单层包围，并且还有一个较大的
11、Apo-B蛋白（配体）。LDL ParticleLDL endocytosis 当细胞进行膜合成需要胆固醇时，细胞即合成LDL跨膜受体蛋白，并将其嵌插到质膜中。受体与LDL颗粒受体结合后，形成衣被小泡；进入细胞质的衣被小泡随即脱掉成笼蛋白衣被，成为平滑小泡，同早期内体融合，内体中PH值低，使受体与LDL颗粒分离；再经晚期内体将LDL送人溶酶体。在溶酶体中，LDL颗粒中的胆固醇酯被水解成游离的胆固醇而被利用。受体回收途径：大部分受体返回它们原来的质膜结构域，如LDL受体；有些进入溶酶体，在那里被消化，如EGF的受体，称为受体下行调节（receptor down-regulation）；有 些 被
12、 运 至 质 膜 不 同 的 结 构 域，形 成 穿 胞 运 输（transcytosis）。如母鼠的抗体从血液通过上皮细胞进入母乳中，乳鼠肠上皮细胞将抗体摄人体内，都是通过穿胞运输完成的。五、外排作用组成型的外排途径组成型的外排途径（constitutive exocytosis pathway）：由高尔基体TGN区分泌囊泡向质膜运输的过程，其作用在于更新膜蛋白和膜脂、形成细胞外基质、或作为营养成分和信号分子。通过default pathway完成蛋白质转运过程。调节型外排途径调节型外排途径（regulated exocytosis pathway）：分泌物（如激素、或酶）储存在分泌泡内，当
13、细胞在受到胞外信号刺激时，分泌泡与质膜融合并将内含物释放出去。第三节 内质网 K.R.Porter等于1945年发现于培养的小鼠成纤维细胞，因最初看到的是位于细胞质内部的网状结构，故名内质网（endoplasmic reticulum，ER）。一、形态与组成 约占细胞总膜面积的一半，是封闭的网络系统。分为粗面型内质网粗面型内质网（rough endoplasmic reticulum，RER）和光面型内质网光面型内质网（smooth endoplasmic reticulum，SER）。RER呈扁平囊状，排列整齐，有核糖体有核糖体附着。SER呈分支管状或小泡状，无核糖体无核糖体附着。细胞不含纯
14、粹的RER或SER，它们分别是ER连续结构的一部分。ERRERSER ER主要功能是合成蛋白质和脂类，分泌性蛋白、膜蛋白和溶酶体蛋白都是在RER中合成的,SER中合成脂类。ER膜中含大约60%的蛋白和40%的脂类，脂类主要成分为磷脂，磷脂酰胆碱含量较高，鞘磷脂含量较少，没有或很少含胆固醇。ER约有30多种膜结合蛋白，另有30多种位于内质网腔，这些蛋白的分布具有异质性，如：葡糖-6-磷酸酶，普遍存在于内质网，被认为是标志酶，核糖体结合糖蛋白（ribophorin）只分布在RER，P450酶系只分布在SER。二、ER的功能（一）、蛋白质合成(RER)蛋白质都是在核糖体上合成的，并且起始于细胞质基质
15、，但是有些蛋白质在合成开始不久后便转在内质网(RER)上合成，这些蛋白主要有：向细胞外分泌的蛋白、如抗体、激素；膜的整合蛋白；需要与其它细胞组合严格分开的酶，如溶酶体的各种水解酶；1.需要进行修饰的蛋白，如糖蛋白。G.Blobel等1975年提出了信号假说(Signal hypothesis)，认为蛋白质N端的信号肽，指导蛋白质转至内质网上合成，因此获1999年诺贝尔生理医学奖。蛋白质转移到内质网合成涉及以下成分：1.信号肽（signal peptide），位于新合成肽链的N端，一般1630个氨基酸残基，含有6-15个连续排列的带正电荷的非极性氨基酸，由于信号肽又是引导肽链进入内质网腔的一段序
16、列，又称开始转移序列（start transfer sequence）；信号识别颗粒（signal recognition particle，SRP），由6 种 多 肽 组 成，结 合 一 个 7 S R N A，属 于 一 种RNP(ribonucleoprotein)。能与信号序列结合，导致蛋白质合成暂停。SRP受体（SPR receptor），内质网膜的整合蛋白，异二聚体，可与SRP特异结合。停止转移序列（stop transfer sequence），与内质网膜的亲合力很高，阻止肽链继续进入网腔，成为跨膜Pr。转位因子（translocator，translocon），由3-4个Sec
17、61蛋白构成的通道，每个Sec61由3条肽链组成。Translocation of soluble proteins across ER蛋白质转入内质网合成的过程：信号肽与SRP结合肽链延伸终止SRP与受体结合SRP脱离信号肽肽链在内质网上继续合成，同时信号肽引导新生肽链进入内质网腔信号肽切除肽链延伸至终止。这种肽链边合成边向内质网腔转移的方式，称为co-translation。Insertion of a Multipass Transmembrane protein into the ER membrane（二）、蛋白质的修饰与加工 包括糖基化、羟基化、酰基化、二硫键形成等，其中最主要的是
18、糖基化，几乎所有内质网(RER)上合成的蛋白质最终被糖基化。糖基化的作用：使蛋白质能够抵抗消化酶的作用；赋予蛋白质传导信号的功能；某些蛋白只有在糖基化之后才能正确折叠。糖基一般连接在4种氨基酸上，分为2种：O-连接的糖基化（O-linked glycosylation）：与Ser、Thr和Hyp的OH连接，连接的糖为半乳糖或N-乙酰半乳糖胺，在高尔基体上进行。N-连接的糖基化（N-linked glycosylation）：与天冬酰胺残基的NH2连接，糖为N-乙酰葡糖胺。内质网上进行N-连接的糖基化。糖的供体为核苷糖，如CMP-唾液酸、GDP-甘露糖、UDP-N-乙酰葡糖胺。糖分子首先被糖基转
19、移酶转移到膜上的磷酸长醇（dolichol phosphate）分子上，装配成寡糖链。再被寡糖转移酶转到新合成肽链特定序列（Asn-X-Ser或Asn-X-Thr）的天冬酰胺残基上。Protein glycosylation in RER（三）、新生肽链的折叠、组装和运输COP 介导由内质网输出的膜泡运输，这种膜泡由内质网的排出位点（exit sites）以出芽的方式排出。不同的蛋白质在内质网腔中停留的时间不同，这主要取决于蛋白质完成正确折叠和组装的时间，这一过程是在属于hsp70家族的ATP酶的作用下完成的，需要消耗能量。有些无法完成正确折叠的蛋白质被输出内质网，转入溶酶体中降解掉，大约90
20、%的新合成的T细胞受体亚单位和乙酰胆碱受体都被降解掉，而从未到达靶细胞膜。（四）、内质网(SER)的作用合成磷脂、胆固醇等膜脂，合成后以出芽的方式转运至高尔基体，溶酶体和质膜上，或借磷脂转移蛋白（PTP）形成水溶性复合物，转至其他膜上。解毒，如肝细胞的细胞色素P450酶系。参与甾体类激素的合成。使葡糖6-磷酸水解，释放糖至血液中。储存钙离子，作为细胞内信号物质，如肌质网。提供酶附着的位点和机械支撑作用。第四节 高尔基体最早发现于1855年，1889年，Golgi用银染法，在猫头鹰的神经细胞内观察到了清晰的结构，因此定名为高尔基体。20世纪50年代以后才正确认识它的存在和结构。一、形态与组成 是
21、由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形。凸出的一面对着内质网称为形成面或顺面（cis face）。凹进的一面对着质膜称为成熟面或反面（trans face）。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡。扁平囊直径约1um，单层膜构成，中间为囊腔，周缘多呈泡状，48个扁平囊在一起(某些藻类可达一二十个)，构成高尔基体的主体(Golgi stack)。The Golgi Apparatus 高尔基体膜含有大约60%的蛋白和40%的脂类，具有一些和ER共同的蛋白成分。膜脂中磷脂酰胆碱的含量介于ER和质膜之间，中性脂类主要包括胆固醇，胆固醇酯和甘油三酯。高
22、尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。标志酶为糖基转移酶。二、功能区隔高尔基体顺面的网络结构（cis Golgi network，CGN），是高尔基体的入口区域。高尔基体中间膜囊（medial Golgi），多数糖基修饰，糖脂的形成以及与高尔基体有关的糖合成均发生此处。高尔基体反面的网络结构（trans Golgi network，TGN），是高尔基体的出口区域，功能是参与蛋白质的分类与包装，最后输出。高尔基体各部分膜囊具有不同的细胞化学反应：嗜锇反应：cis面膜囊被特异地染色；焦磷酸硫胺素酶(TPP酶)：可特异显
23、示高尔基体的trans面的12层膜囊；烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酶(NADP酶)：可显示高尔基体中间几层扁平囊；胞嘧啶单核苷酸酶(CMP酶)：可显示靠近trans面上的一些膜囊状和管状结构，CMP酶也是溶酶体的标志酶。三、主要功能 1、参与细胞分泌活动 RER上合成蛋白质进入ER腔COPII运输泡进入CGN在medial Gdgi中加工在TGN形成运输泡运输与质膜融合、排出。高尔基体对蛋白质的分类，依据的是蛋白质上的信号肽或信号斑。2、蛋白质的糖基化 O-连接的糖基化在高尔基体中进行，糖的供体为核苷糖。3、进行膜的转化功能 内质网上合成的新膜脂转移至高尔基体后，经过修饰和加工，形成运输泡与质膜融合
24、。4、将蛋白水解为活性物质 如将蛋白质N端或C端切除，成为有活性的物质，如胰岛素（C端）；或将含有多个相同氨基序列的前体水解为有活性的多肽，如神经肽。5、参与形成溶酶体。6、参与植物细胞壁的形成，合成纤维素和果胶质。高尔基体分泌高尔基体分泌功能示意图功能示意图第五节 溶酶体与过氧化物酶体一、溶酶体的结构 溶酶体（lysosome）为C.de Duve与B.Novikoff 1955年首次发现。是单层膜围绕、内含多种酸性水解酶类酸性水解酶类的囊泡状细胞器，其主要功能是进行细胞内消化。具有异质性，形态大小及内含的水解酶种类都可能有很大的不同。酸性磷酸酶是标志酶。膜有质子泵，将H+泵入溶酶体，使其P
25、H值降低。膜蛋白高度糖基化，可能有利于防止自身膜蛋白降解1、初级溶酶体（primary lysosome）直径约0.20.5um，有多种酸性水解酶，但没有活性，包括蛋白酶，核酸酶、脂酶、磷酶酶等60余种，反应的最适PH值为5左右。2、次级溶酶体（secondary lysosome）是正在进行或完成消化作用的溶酶体，内含水解酶和相应的底物，可分为自噬溶酶体（autophagolysosome）和异噬溶酶体(phagolysosome)。3、残体（residual body）又称后溶酶体（post-lysosome）已失去酶活性，仅留未消化的残渣，故名。残体可通过外排作用排出细胞，也可能留在细胞
26、内逐年增多，如表皮细胞的老年斑，肝细胞的脂褐质。二、溶酶体的功能细胞内消化：如高等动物内吞低密脂蛋白获得胆固醇，单细胞真核生物利用溶酶体的消化食物。自体吞噬：清除无用的生物大分子，衰老细胞、细胞器、个体发育中多余的细胞。许多生物大分子的半衰期只有几小时至几天，肝细胞中线粒体的平均寿命约10天左右。防御作用：如巨噬细胞杀死病原体。参与分泌过程的调节：如将甲状腺球蛋白降解成有活性的甲状腺素。形成精子的顶体。三、溶酶体的发生 初级溶酶体是在高尔基体的trans面以出芽的形式形成，形成过程：内质网上核糖体合成溶酶体蛋白进入内质网腔进行N-连接的糖基化修饰进入高尔基体cis面膜囊磷酸转移酶识别溶酶体水解
27、酶的信号斑将乙酰葡糖胺磷酸转移在12个甘露糖残基上在中间膜囊切去N-乙酰葡糖胺形成M6P配体与trans膜囊上的受体结合通过clathrin衣被包装成初级溶酶体。The recognition of a lysosomal hydrolasein Golgi and mannose phosphorylation Transport of newly synthesized hydrolases to lysosomes矽肺：二氧化硅尘粒（矽尘）吸入肺泡后被巨噬细内吞噬，导致吞噬细胞溶酶体破裂，水解酶释放，细胞崩解，矽尘释出，后又被其他巨噬细内吞噬，如此反复进行。激活成纤维细胞，导致胶原纤维沉
28、积，肺组织纤维化。肺结核：结核杆菌不产生内、外毒素,也无荚膜和侵袭性酶。但是菌体成分硫酸脑苷脂能抵抗溶酶体的杀伤作用,使结核杆菌在肺泡内大量生长繁殖,导致巨噬细胞裂解,释放出的结核杆菌再被吞噬而重复上述过程，引起肺组织钙化和纤维化。类风湿性关节炎：溶酶体膜很易脆裂。四、溶酶体与疾病 3各类贮积症 台-萨氏综合征（Tay-Sachs diesease）：溶酶体缺少氨基已糖酯酶A，导致神经节甘脂GM2积累。II型糖原累积病（Pompe病）：缺乏-1,4-葡萄糖苷酶，糖原在溶酶体中积累。Gaucher病：缺乏-葡萄糖苷酶，葡糖脑苷脂沉积。细胞内含物病（inclusion-cell disease）：
29、N-乙酰葡糖胺磷酸转移酶单基因突变。高尔基体中加工的溶酶体前酶上不能形成M6P分选信号，病人成纤维细胞的溶酶体中没有水解酶，底物在溶酶体中贮积，形成“包涵体”。台台-萨氏综合症溶酶体的同心圆结构萨氏综合症溶酶体的同心圆结构五、过氧化物酶体 Rhodin 1954发现于鼠肾小管上皮细胞。是一种具有异质性的细胞器。直径通常0.5um，呈圆形，椭圆形或哑呤形不等，由单层膜围绕而成。特点：含过氧化氢酶（标志酶）和一至多种依赖黄素（flavin）的氧化酶，已发现40多种氧化酶，各类氧化酶的共性是将底物氧化后生成过氧化氢。而过氧化氢酶又利用H2O2去氧化其它底物。RH2+O2R+H2O2水仙叶肉细胞微体水
30、仙叶肉细胞微体烟草叶肉细胞的过氧化物酶体（中央具有尿酸氧化酶形成的晶体状核心）在动物中：参与脂肪酸的-氧化；具有解毒作用，过氧化氢酶利用H2O2将酚、甲醛、甲酸和醇等有害物质氧化，饮入的酒精1/4是在微体中氧化为乙醛。在植物中：参与光呼吸，将光合作用的副产物乙醇酸氧化为乙醛酸和过氧化氢，在萌发的种子中，进行脂肪的-氧化，产生乙酰辅酶A，经乙醛酸循环，由异柠檬酸裂解为乙醛酸和琥珀酸，加入三羧酸循环，因涉及乙醛酸循环，又称乙醛酸循环体。微体中所有的酶都由核基因编码，在细胞质基质中合成，在信号肽的引导下，进入过氧化物酶体。引导蛋白质进入微体的信号序列是-Ser-Lys-Leu-COO-。膜脂在内质网上合成后，通过磷脂转移蛋白PTP转移而来。已有的过氧化物酶体在细胞分裂时，以分裂方式传给子代细胞。再进行进一步的装配。76 结束语结束语
