1、三、实验器材三、实验器材菌种菌种:枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌染色剂：染色剂：5孔雀绿水溶液，孔雀绿水溶液，0.5沙黄沙黄(石炭石炭酸番红酸番红)水溶液水溶液其他：小试管、滴管、烧杯、试管夹、载玻其他：小试管、滴管、烧杯、试管夹、载玻片、显微镜等片、显微镜等四、实验步骤：四、实验步骤：1.制片制片:制备菌涂片、干燥及固定制备菌涂片、干燥及固定 2.加热染色加热染色:向载玻片滴加数滴向载玻片滴加数滴5%孔雀绿染液覆盖孔雀绿染液覆盖涂菌部位涂菌部位,用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒汽并维持冒汽并维持5min,及时补充染液及时补充染液,切勿让涂片干涸。切勿让涂片干涸
2、。3.脱色脱色:水洗脱色至水流无色为止。水洗脱色至水流无色为止。4.复染复染:沙黄（沙黄（0.5%番红番红)复染复染 23min。5.水洗：水洗无色为止。水洗：水洗无色为止。6.镜检将载玻片晾干后油镜镜检。镜检将载玻片晾干后油镜镜检。注意：菌液要浓注意：菌液要浓枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌巨大芽胞胞杆菌破伤风梭状芽胞胞杆菌破伤风梭状芽胞胞杆菌肉毒梭菌炭疽杆菌炭疽杆菌五、实验结果与分析五、实验结果与分析1.绘制观察到的枯草芽胞杆菌形态视野图，绘制观察到的枯草芽胞杆菌形态视野图，并注明放大倍数。并注明放大倍数。2.进行实验结果分析进行实验结果分析实验六实验六 霉菌的形态观察霉菌的形态观察一、实验目的一
3、、实验目的学习并掌握观察霉菌形态的基本方法学习并掌握观察霉菌形态的基本方法了解四类常见霉菌的基本形态特征了解四类常见霉菌的基本形态特征二、实验原理二、实验原理 霉菌可产生分枝或不分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，霉菌可产生分枝或不分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。是识别不同种类霉菌的重要依据。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有下列三种：直接制片观察霉菌的形
4、态有多种方法，常用的有下列三种：直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂菌制片镜检。载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。玻璃培养时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。玻璃培养观察法：霉菌的玻璃纸培养观察方法与放线菌
5、的玻璃纸培养观察法：霉菌的玻璃纸培养观察方法与放线菌的玻璃纸培养观察方法相似观察方法相似。这种方法用于观察不同生长阶段霉菌的形态，。这种方法用于观察不同生长阶段霉菌的形态，也可获得良好的效果。也可获得良好的效果。三、实验器材三、实验器材 菌种黑菌种黑 曲霉曲霉(Aspergillus sp.)，青霉青霉，黑根黑根霉霉(Rhizopus sp.)和毛霉（和毛霉（Mucor sp.）培）培养养 2-5d 的马铃薯琼脂平板培养物。的马铃薯琼脂平板培养物。培养基：土豆琼脂或察氏培养基培养基：土豆琼脂或察氏培养基 溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液 其他：无菌吸管、平皿、载
6、玻片、盖玻片、显微其他：无菌吸管、平皿、载玻片、盖玻片、显微镜等镜等四、实验步骤四、实验步骤直接制片观察法直接制片观察法:1.在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌丝；丝；2.先置于先置于 50 乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的染液中，用解剖针小心地将菌丝放在载玻片上的染液中，用解剖针小心地将菌丝分散开。分散开。3.盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。察。注意：
7、挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然注意：挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。菌液要浓察。菌液要浓曲霉（分生孢子）曲霉（分生孢子）青霉（分生孢子）青霉（分生孢子）根霉（孢囊孢子）根霉（孢囊孢子）根霉（接合孢子）根霉（接合孢子）毛霉（孢囊孢子）毛霉（孢囊孢子）五、实验结果与分析五、实验结果与分析1.结果结果 绘图说明四种霉菌的形态特征。绘图说明四种霉菌的形态特征。2.思考题思考题（1）你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？菌？（2）根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认为上述操作过程中的哪为上述操作过程中的哪 些步骤可以根据具体情些步骤可以根据具体情况作一些改进或可用其他的替代方法？况作一些改进或可用其他的替代方法？（3）你认为在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌你认为在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？和霉菌的主要区别是什么？
