1、腺癌的驱动基因腺癌的驱动基因LCMC(美国)MSN(法国)中国日本EGFR17%13%40%50%KRAS22%28%7%15%ELM4-ALK7%2%7%5%BRAF2%2%2%1%HER21%1%NA3%PIK3CA1%1%4%NAPTENNANA6%NAMET扩增1%1%5%4%Nil46%33%29%22%Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010 97%的基因突变互相排斥的基因突变互相排斥单个突变数ALKAKTBRAFEGFRHER2KRASMEK1METNRASPIK3CAALK(38)X1
2、211AKT(1)XBRAF(9)X1EGFR(89)X13HER2(3)XKRAS(114)X11MEK1(2)X11MET AMP(3)XNRAS(2)XPIK3CA(6)XKris MG.et al.ASCO 2011,Abstract#CRA7506.3高加索人腺癌各基因构成比图4中国人肺腺癌各基因构成比图关于关于“驱动基因驱动基因”近50%NSCLC驱动基因已经被发现双基因同时突变罕见对已知的靶点，已有很多上市或在研的药物驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不同。NSCLC基因检测的意义基因检测决定了分子靶向治疗基因检测决定了分子靶向治疗2011年我国
3、制定了年我国制定了:中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家共识受体基因突变检测专家共识EGFR基因突变检测的临床意义EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI一线治疗优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高，但在鳞癌、腺鳞癌，甚至SCLC中也可检测到EGFR基因突变。北京协和张静报道：82例NSCLCBr J Cancer.提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时机EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效
4、好,检测的必要性国内EGFR基因突变率在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；对于晚期NSCLC患者，明确EGFR突变状态至关重要Br J Cancer.EGFR突变与病理类型EGFR突变与病理类型NSCLC基因检测的意义胸液沉淀与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较EGFR突变与病理类型J Cancer Res Clin Oncol.胸液EGFR突变检测率的比较Kris ASCO 2011
5、 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 201033%(1/3)近50%NSCLC驱动基因已经被发现基因检测决定了分子靶向治疗EGFR基因突变检测的临床意义EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性EGFR基因突变检测的临床意义化疗能改变EGFR突变状态264例一线化疗的bIV期NSCLC患者的血DNA标本，EGFR突变率在化疗后显著降低（23.1%对34.5%，P1毫升。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。为符合托运要求，可付运前可离心后倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输
6、，确保3天内到达。EGFR检测方法目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针）EGFR检测方法测序法ARMS法敏感度1030%(变异)10.1%(变异)发现突变已知和未知已知石蜡包埋组织成功率低高假阳性（交叉污染）多少假阴性多少检测流程复杂漫长，污染多简单快速仪器成本高低试剂成本低略高 EGFR检测方法北京协和张静报道：82例NSCLC直接测序法中24例无结果，ARMS法均有结果，且16例检测到变异 中华病理学杂志，2008,37（5）有结果变异率测序法70.7%（58/82例）43.1%(25/58例）ARMS法100%（82/82例）51.2%(42/82例）关于胸水
7、EGFR突变的检测Cancer Sci.2006;97(7):642-8.Int J Cancer.2006;119(10):2353-8.Chang Gung Med J.2006;29(4):373-9.Br J Cancer.2006;95(10):1390-5.J Cancer Res Clin Oncol.2010;136(9):1341-7.国内外胸水标本国内外胸水标本EGFR检测的研究检测的研究作者作者 国家国家/地区地区 病例数病例数EGFR突变率突变率（%）Kimura H日本2433%Soh J日本6126%Hung MS台湾2941%Kimura H日本4325.6%Ji
8、an G中国 3228.1%穿刺活检、支气管镜标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好，获得较可靠检测结果-使用受限EGFR基因突变检测的临床意义尽量收集更多胸水，离心后去掉上清，沉淀物必须1毫升。在我国未经选择的NSCLC中EGFR突变约30%，腺癌突变约42.重量10g（约米粒大小，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗干净。33%，不同标本检出率外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果-使用受限Br J Cancer.L858R+19-del驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不同。EGFR突变与病理类型化疗能改变EGFR突
9、变状态EGFR突变与病理类型淋巴结标本也可淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？胸液EGFR突变检测率的比较淋巴结标本也可淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？高加索人腺癌各基因构成比图EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性理想的标本，需保证200400个肿瘤细胞（文献报道大于100个即可）EGFR突变与病理类型用胸水检测肿瘤用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法突变需要敏感方法用胸水中细胞及无细胞液均可检测用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检突变，且检出率基本相同出率基本相同目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配
10、对样本检测）目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测）数据，故对其敏感度与特异性尚无结论数据，故对其敏感度与特异性尚无结论胸膜转移和胸水的对比研究本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR突变检测的一致性，从而判断当存在胸膜转移灶时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。收集2011年4月-2012年12月间就诊于上海长海医院呼吸科符合入组条件患者的胸液标本及相应的胸膜转移病灶组织，共35对样本。研究步骤胸膜转移灶样本采集电子胸腔镜在局麻下进行胸腔镜检查术镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成蜡块每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h
11、后常温保存研究步骤胸腔积液样本采集胸腔积液样本采集每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存。胸膜活检组织EGFR突变状况病人数EGFR突变 突变率%P男性18633.30.094女性171164.7有吸烟史101100.007无吸烟史251664胸液沉淀与相应胸膜转移灶胸液沉淀与相应胸膜转移灶EGFREGFR突变
12、的比较突变的比较 胸膜组织胸膜组织EGFR突变突变胸液沉淀胸液沉淀EGFR突变突变+-合计+12416-2810合计合计141226符合率为符合率为73.1%中国人肺腺癌各基因构成比图EGFR突变与病理类型NSCLC基因检测的意义33%，不同标本检出率尽量收集更多胸水，离心后去掉上清，沉淀物必须1毫升。取癌组织的中心位置组织块，切至厚度在0.重量10g（约米粒大小，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗干净。Int J Cancer.全国检测情况(基康+迪安)铜陵检测结果（ARMS法）EGFR基因突变检测的临床意义在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉
13、淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存。淋巴结标本也可淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？50%(1/2)2006;119(10):2353-8.穿刺活检、支气管镜标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好，获得较可靠检测结果-使用受限送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI一线治疗每例患者同时收集胸水100-2
14、00ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；胸液上清与相应胸膜转移灶胸液上清与相应胸膜转移灶EGFREGFR突变的比较突变的比较胸膜组织胸膜组织EGFR突变突变胸液上清胸液上清EGFR突变突变+-合计合计+14216-31619合计合计171835符合率为符合率为85.7%胸液上清与相应沉淀胸液上清与相应沉淀EGFREGFR突变的比较突变的比较胸液沉淀胸液沉淀EGFR突变突变胸液上清胸液上清EGFR突变突变+-合计合计+12113-4913合计合计161026 符合率为符合率为80.8%胸液胸液EGFREGFR突变检测率的比较突变检测率的比较敏感性敏感性特异性
15、特异性例数比例数比百分数百分数例数比例数比百分数百分数胸液沉淀胸液沉淀12/1485.7%8/1266.7%胸液上清胸液上清14/1782.4%16/1888.9%胸液沉淀胸液沉淀+上清上清16/1794.1%14/1877.8%结结 论论以ARMS方法检测胸液中EGFR突变状态，与经胸腔镜取得的组织标本中的EGFR突变状态吻合率高；临床上可以通过检测胸液，尤其是结合胸液上清和沉淀EGFR突变状况，来指导EGFR-TKIs的治疗。对于晚期NSCLC患者，明确EGFR突变状态至关重要胸液检测EGFR，结果确切，取材方便，切实可行通过胸液检测EGFR，对临床治疗具有重要价值，值得推广谢谢大家！腺癌
16、的驱动基因腺癌的驱动基因LCMC(美国)MSN(法国)中国日本EGFR17%13%40%50%KRAS22%28%7%15%ELM4-ALK7%2%7%5%BRAF2%2%2%1%HER21%1%NA3%PIK3CA1%1%4%NAPTENNANA6%NAMET扩增1%1%5%4%Nil46%33%29%22%Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 201041中国人肺腺癌各基因构成比图铜陵检测结果（ARMS法）送检66份标本,11份无结果，55份有结果，检出率83.33%，不同标本检出率n有结果检出率手术3
17、030100%淋巴结活检66100%气管镜13538.5%肺穿11872.7%胸腔镜11100%胸水55100%合计665583.33%检测标本固定包埋组织固定包埋组织外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果-使用受限支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。-极度受限用胸水检测肿瘤用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法突变需要敏感方法用胸水中细胞及无细胞液均可检测用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检突变，且检出率基本相同出率基本相同目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测）目前缺少胸水与肿瘤组织直接
18、对比（配对样本检测）数据，故对其敏感度与特异性尚无结论数据，故对其敏感度与特异性尚无结论目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针）在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；L858R+19-del全国检测情况(基康+迪安)每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；可在4冰箱暂时保存。33%，不同标本检出率取癌组织的中心位置组织块，切至厚度在0.提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时机胸液EGFR突变检测率
19、的比较胸水可以做前景很好7%（58/82例）理想的标本，需保证200400个肿瘤细胞（文献报道大于100个即可）送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。国内EGFR基因突变率提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时机2006;119(10):2353-8.理想的标本，需保证200400个肿瘤细胞（文献报道大于100个即可）淋巴结标本也可淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？EGFR突变与病理类型EGFR突变与病理类型胸液EGFR突变检测率的比较国内EGFR基因突变率EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好
20、,检测的必要性EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性2006;119(10):2353-8.100%（82/82例）EGFR基因突变检测的一般原则7%(24/42)重量10g（约米粒大小，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗干净。送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。收集2011年4月-2012年12月间就诊于上海长海医院呼吸科符合入组条件患者的胸液标本及相应的胸膜转移病灶组织，共35对样本。MET AMP(3)胸水可以做前景很好外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠
21、检测结果-使用受限外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果-使用受限EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检出率基本相同33%(1/3)胸液沉淀与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较55份有结果的标本中，29份EGFR突变阳性，突变率55.研究步骤胸腔积液样本采集胸腔积液样本采集每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存。
