1、实验实验血清钙、镁、磷的测定血清钙、镁、磷的测定西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 （一）血清钙测定一）血清钙测定西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 血浆钙的存在形式血浆钙的存在形式血钙血钙可扩散钙可扩散钙非扩散钙非扩散钙离子钙离子钙可溶性不解离的钙盐可溶性不解离的钙盐占血浆总钙占血浆总钙60%，能透过毛细血管能透过毛细血管壁壁与血浆蛋白结合，占与血浆蛋白结合，占血浆总钙血浆总钙40%，不能，不能透过毛细血管壁透过毛细血管壁血浆中血浆中直接发直接发挥生理挥生理作用的作用的钙钙相关知识相关知识 血钙的测定包括总钙测定和离子钙测定法。血钙的测定包括总钙测定和离子钙测定法。总钙测定方法包
2、括总钙测定方法包括同位素稀释质谱法同位素稀释质谱法-决定性方决定性方法，法，原子吸收光谱法原子吸收光谱法(AAS)参考方法、参考方法、分光光分光光度法度法和络合滴定法等。和络合滴定法等。分光光度法中以分光光度法中以邻甲酚酞络合酮法（邻甲酚酞络合酮法（OCPC）、）、甲基百里香酚蓝比色法和偶氮胂甲基百里香酚蓝比色法和偶氮胂比色法比色法（Arsenazo colorimetry）最常用。）最常用。离子钙测定目前临床最常用离子选择电极法。离子钙测定目前临床最常用离子选择电极法。血清总钙测定血清总钙测定邻甲酚酞络合酮比色法邻甲酚酞络合酮比色法西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 v掌握：掌握：OC
3、PC法测定血清总钙的基本原理法测定血清总钙的基本原理及提高准确性的方法。及提高准确性的方法。v熟悉：熟悉：血清总钙测定的注意事项血清总钙测定的注意事项。v了解：总钙与离子钙的关系了解：总钙与离子钙的关系 实验目的实验目的 邻甲酚酞络合铜是金属络合染料，同时也是酸碱指示邻甲酚酞络合铜是金属络合染料，同时也是酸碱指示剂，在碱性条件下与钙络合，生成紫红色络合物。在剂，在碱性条件下与钙络合，生成紫红色络合物。在600nm处有特征吸收，用处有特征吸收，用8-羟基喹啉以消除标本中镁离子羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰，与同样处理的的钙标准液比较即可测得出血钙含的干扰，与同样处理的的钙标准液比较即可测得出血
4、钙含量。量。原理原理紫红色络合物0.11pHCaOCPC试剂与器材试剂与器材 1.R1：乙醇胺缓冲液。：乙醇胺缓冲液。2.R2：OCPC、8-羟基喹啉羟基喹啉3.氯化钙标准液：氯化钙标准液：2.50mmol/L工作液工作液：取：取R1和和R2等量混合即为工作液。等量混合即为工作液。4.分光光度计分光光度计操作步骤操作步骤 取试管取试管3 3支，按下表操作支，按下表操作。加入物（加入物（ml）空白管空白管 标准管标准管 测定管测定管工作液工作液 3.0 3.0 3.0 蒸馏水蒸馏水 0.06 标准品标准品 0.06 血清血清 0.06 充分充分混匀，混匀，37水浴水浴5分钟分钟，在波长，在波长6
5、00nm处，处，以空白管调零，读取吸光度值。以空白管调零，读取吸光度值。计算计算 CsAASu(mmol/L)血钙 参考范围：参考范围：2.032.54mmol/L用血清或肝素抗凝血浆；不能用钙的螯合剂及草用血清或肝素抗凝血浆；不能用钙的螯合剂及草酸盐做抗凝剂的标本；胆红素可产生负干扰，可酸盐做抗凝剂的标本；胆红素可产生负干扰，可用血清对照消除。用血清对照消除。镁离子也可与镁离子也可与OCPC试剂产生紫红色络合物，因试剂产生紫红色络合物，因此，试剂中加入此，试剂中加入8-羟基喹啉是起络合镁离子的作羟基喹啉是起络合镁离子的作用，以消除镁离子的干扰。用，以消除镁离子的干扰。注意事项注意事项 pH对
6、对OCPC试剂的显色有很大影响，试剂的显色有很大影响，pH10.512时，反应的敏感性最好，所以选用时，反应的敏感性最好，所以选用pH11.0为宜。为宜。此法对钙离子有很高的敏感性，测定器皿要洁净，此法对钙离子有很高的敏感性，测定器皿要洁净，所有试剂应在聚乙烯瓶内保存；且配制试剂最好所有试剂应在聚乙烯瓶内保存；且配制试剂最好用高质量的去离子水或重蒸馏水。用高质量的去离子水或重蒸馏水。临床意义临床意义 血钙增高血钙增高常见于下列疾病：甲状旁腺机能亢进症、常见于下列疾病：甲状旁腺机能亢进症、代谢性酸中毒、维生素代谢性酸中毒、维生素D增多症、多发性骨髓瘤、增多症、多发性骨髓瘤、恶性肿瘤等。恶性肿瘤等
7、。血钙降低血钙降低见于下列疾病：甲状旁腺机能减退、慢见于下列疾病：甲状旁腺机能减退、慢性肾炎尿毒症、佝偻病和软骨病、大量输入柠檬性肾炎尿毒症、佝偻病和软骨病、大量输入柠檬酸盐抗凝血等酸盐抗凝血等。西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 （二）血清镁测定（二）血清镁测定镁是人体内含量占第四位的金属元素，镁是人体内含量占第四位的金属元素，50%以以磷酸盐、碳酸盐、氟化物的形式存在于骨骼中，磷酸盐、碳酸盐、氟化物的形式存在于骨骼中，45%在细胞内液，在细胞内液，细胞外液中仅占细胞外液中仅占5%。血清中镁血清中镁55%为离子型，为离子型，15%与磷酸盐、枸椽与磷酸盐、枸椽酸盐等形成复合物，酸盐等形成
8、复合物，30%与蛋白结合。与蛋白结合。相关知识相关知识 镁测定的参考方法是原子吸收分光光度法，镁测定的参考方法是原子吸收分光光度法，国内外多数实验室采用金属显色染料直接显色和国内外多数实验室采用金属显色染料直接显色和比色分析，其中比色分析，其中甲基麝香草酚蓝、钙镁试剂甲基麝香草酚蓝、钙镁试剂广泛广泛应用于镁的自动分析或手工操作。应用于镁的自动分析或手工操作。血清镁测定血清镁测定钙镁试剂比色法钙镁试剂比色法西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 v掌握：掌握：钙镁试剂比色法钙镁试剂比色法测定血清镁的基本测定血清镁的基本原理。原理。v熟悉：熟悉：有关试剂在反应中的作用。有关试剂在反应中的作用。v
9、了解：了解：本法检测过程中的注意事项及血镁本法检测过程中的注意事项及血镁检测的临床意义。检测的临床意义。实验目的实验目的 血清中镁在碱性环境中与血清中镁在碱性环境中与Calmagite染料生成染料生成紫红色络合物，颜色的深浅与镁的浓度成正比。与紫红色络合物，颜色的深浅与镁的浓度成正比。与同样处理的标准品比较，可求得镁的含量。溶液中同样处理的标准品比较，可求得镁的含量。溶液中加入加入EGTA可消除钙的干扰，使用表面活性剂可使可消除钙的干扰，使用表面活性剂可使蛋白胶体稳定，不必去除蛋白质而直接测定镁。蛋白胶体稳定，不必去除蛋白质而直接测定镁。原理原理紫红色络合物碱性MgCalmagite试剂与器材
10、试剂与器材 1R1：氢氧化钾、表面活性剂。：氢氧化钾、表面活性剂。2.R2：Calmagite、EGTA3.氯化镁标准液：氯化镁标准液：1.0mmol/L工作液工作液：取：取R1和和R2等量混合即为工作液。等量混合即为工作液。4.分光光度计分光光度计操作步骤操作步骤 取试管取试管3 3支，按下表操作支，按下表操作。加入物（加入物（ml）空白管空白管 标准管标准管 测定管测定管工作液工作液 3.0 3.0 3.0 蒸馏水蒸馏水 0.03 标准品标准品 0.03 血清血清 0.03 充分充分混匀，混匀，室温放置室温放置3分钟分钟，在波长，在波长546nm处，处，以空白管调零，读取吸光度值。以空白管
11、调零，读取吸光度值。计算计算 CsAASu(mmol/L)血镁 参考范围：参考范围：0.71.2mmol/L1.溶血标本对本测定有明显的正干扰；脂血标本应去脂处理后，方可测定。2.试剂宜置于塑料瓶中保存。显色剂已褪色则不可使用。3.试剂防止污染，如自来水、器皿清洗不洁、试剂交叉污染等。4.溶液中的EGTA可消除钙的干扰；表面活性剂则可消除蛋白质的干扰。5.适合于手工操作及大多数自动化分析仪注意事项注意事项 临床意义临床意义 血清镁增高血清镁增高：服用治疗剂过量、肾脏疾病、内服用治疗剂过量、肾脏疾病、内分泌疾病（甲状腺机能减退等）、多发性骨髓分泌疾病（甲状腺机能减退等）、多发性骨髓瘤等。瘤等。血
12、清镁降低血清镁降低：镁摄入减少、镁由消化道丢失、镁摄入减少、镁由消化道丢失、镁由尿路丢失、内分泌疾病（甲亢、醛固酮增镁由尿路丢失、内分泌疾病（甲亢、醛固酮增多症等）等。多症等）等。西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 （三）血清磷测定（三）血清磷测定血清中的无机磷主要有血清中的无机磷主要有H2PO4-和和HPO42-两种磷两种磷酸盐阴离子。由于这两种阴离子在不同的酸盐阴离子。由于这两种阴离子在不同的pH环环境中能快速相互转换，因而不能确切的说出无境中能快速相互转换，因而不能确切的说出无机磷酸盐的分子量。机磷酸盐的分子量。目前常用的测定无机磷的方法有磷钼酸还原法、目前常用的测定无机磷的方法有
13、磷钼酸还原法、染料结合法、紫外分光光度法、黄嘌呤氧化酶染料结合法、紫外分光光度法、黄嘌呤氧化酶比色法、同位素吸收质谱法和原子吸收分光光比色法、同位素吸收质谱法和原子吸收分光光度法。度法。相关知识相关知识 磷测定的决定方法是同位素稀释质谱法。磷测定的决定方法是同位素稀释质谱法。WTO推荐的常用方法是比色法。推荐的常用方法是比色法。目前我国推荐的常规方法是以硫酸亚铁或目前我国推荐的常规方法是以硫酸亚铁或米吐尔米吐尔（对甲基氨基酚硫酸盐）（对甲基氨基酚硫酸盐）作为还原剂的还原钼蓝作为还原剂的还原钼蓝比色法。比色法。血清磷测定血清磷测定还原钼蓝法还原钼蓝法西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 v掌
14、握：掌握：还原钼蓝法还原钼蓝法测定血清磷的基本原理。测定血清磷的基本原理。v熟悉：熟悉：血清磷测定的临床意义血清磷测定的临床意义v了解：了解：本法检测过程中的注意事项本法检测过程中的注意事项实验目的实验目的 在酸性溶液中磷与钼酸铵起反应生成磷钼酸复在酸性溶液中磷与钼酸铵起反应生成磷钼酸复合物，对甲基氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼合物，对甲基氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝，与同样处理的标准液进行比较，可求得血磷的蓝，与同样处理的标准液进行比较，可求得血磷的含量。含量。原理原理钼蓝磷钼酸复合物磷钼酸复合物钼酸铵酸性对甲基氨基酚硫酸盐P试剂与器材试剂与器材 1磷工作液：钼酸铵溶液、米吐尔溶液。
15、磷工作液：钼酸铵溶液、米吐尔溶液。2.磷标准液：磷酸二氢钾磷标准液：磷酸二氢钾1.29mmol/L3.分光光度计分光光度计操作步骤操作步骤 取试管取试管3 3支，按下表操作支，按下表操作。加入物（加入物（ml）空白管空白管 标准管标准管 测定管测定管工作液工作液 4.0 4.0 4.0 蒸馏水蒸馏水 0.1 标准品标准品 0.1 血清血清 0.1 充分混匀，充分混匀，37水浴水浴5分钟分钟，在波长，在波长650nm处，处，以空白管调零，读取吸光度值。以空白管调零，读取吸光度值。计算计算 CsAASu(mmol/L)血磷 参考范围：成人参考范围：成人 0.971.62mmol/L 儿童儿童 1.
16、452.10mmol/L1.血标本宜采用血清或肝素抗凝的血浆。应避免使用枸橼酸钠、EDTA和草酸盐作为抗凝剂。2.标本应避免溶血，因为红细胞中含有高浓度的有机磷酯，在贮存期间易水解生成无机磷。3.米吐尔试剂宜少量配置，放置时间不宜过长。4.血清中磷是稳定的，4可稳定数天，冷冻时可稳定数月。避免水分的蒸发注意事项注意事项 临床意义临床意义 血清磷增高血清磷增高：肾小管对磷的重吸收增强（肾小管对磷的重吸收增强（甲状甲状旁腺机能减退）；排泄障碍（慢性肾炎晚期、旁腺机能减退）；排泄障碍（慢性肾炎晚期、尿毒症）；维生素尿毒症）；维生素D过多；多发性骨髓瘤、淋过多；多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病及骨骼愈合期等。巴瘤、白血病及骨骼愈合期等。血清磷降低血清磷降低：肾小管对磷的重吸收受抑制（肾小管对磷的重吸收受抑制（甲状甲状旁腺机能亢进）；维生素旁腺机能亢进）；维生素D缺乏（软骨病、佝偻缺乏（软骨病、佝偻病等）；糖类吸收利用时，葡萄糖进入细胞内被病等）；糖类吸收利用时，葡萄糖进入细胞内被磷酸化，磷可降低；肾小管变性病变时，肾小管磷酸化，磷可降低；肾小管变性病变时，肾小管重吸收磷发生障碍，血磷偏低；长期服用制酸类重吸收磷发生障碍，血磷偏低；长期服用制酸类药物，也可使血磷降低。药物，也可使血磷降低。
