1、2023-1-27第二第二第二第二第二第二十十十十十十章章章章章章高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法一、一、高效液相色谱法的主要类型高效液相色谱法的主要类型和原理和原理二、高效液相色谱法的固定相和二、高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择流动相及其选择三、三、高效液相色谱高效液相色谱仪仪四四、高效液相色谱高效液相色谱分析方法分析方法high performance liquid chromatograph2023-1-27一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器 h
2、igh performance liquid chromatographhigh performance liquid chromatographhigh performance liquid chromatograph2023-1-27 概述概述概述 高效液相色谱法高效液相色谱法（high performance liquid chromatography；HPLC）是在60年代末，以经典液相色谱法为基础，引入了气相色谱的理论与实验方法，发展而成的分离分析方法。它与经典液相色谱法的主要区别是：流动相改为高压输送、采用高效固定相、具有在线检测器、仪器化。2023-1-27二、二、二、二、二、二
3、、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 feature of HPLCfeature of HPLCfeature of HPLC 特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2023-1-27一、一、一、一、一、一、HPLCHPLCHPLC与经典与经典与经典与经典与经典与经典LCLCLC区别区别区别区别区别区别 经典LC 与HPLC的主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1经典LC：仅做为一种分离手段 柱内
4、径13cm，固定相粒径100m 且不均匀 常压输送流动相 柱效低（H，n）分析周期长 无法在线检测2HPLC：分离和分析 柱内径26mm，固定相粒径8.0 破坏键合相与载体的结合 pH3.0 腐蚀柱子3）适用：极弱酸碱物质 pH=37弱酸；pH=78弱碱；两性化合物2023-1-273 3 3、容量因子及其影响因素容量因子及其影响因素容量因子及其影响因素 组分为弱酸时：流动相pHpKa，k值变小，tR 减小。组分为弱碱：流动相pHpKb，k值增大，tR增大;流动相pHpKb，k值变小，tR 减小。流动相的pH需在28之间，超出此范围可能使键合基团脱落。实验后，应及时用不含缓冲盐的流动相冲洗，以
5、防腐蚀仪器流路系统。2023-1-274 4 4、用途用途用途 有机弱酸、弱碱与两性化合物的分离，以及它们与分子型化合物共存时的分离。不适用于pka8.0的碱。离子抑制色谱法与离子对色谱法比较ISCPICpka3.0的酸pKa 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)2023-1-275.5.5.5.5.5.选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题（1）
6、尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。2023-1-27一一一)流动相对分离的影响流动相对分离的影响流动相对分离的影响 高效液相色谱中，良好的固定相容易获得，改善分离效果主要是靠选择流动相。主要受溶剂种类的影响；k主要取决于溶剂的配比。22114kknR2023-1-27二二二)溶剂的强度和选择性溶剂的强度和选
7、择性溶剂的强度和选择性 1.溶剂的极性和强度 2.混合溶剂的强度 3.溶剂的选择性2023-1-27SnyderSnyderSnyder溶剂分类法溶剂分类法溶剂分类法 样品组分、溶剂与固定相三者间的作用力为分子间作用力，组分的分配系数由三者的分子间作用力所决定。分子间的作用力可分为以下三类：质子受体作用力 参照物：乙醇 质子给予作用力 参照物：二氧六环 强偶极作用力 参照物：硝基甲烷 选择以上作用力最强的常用溶剂作为参照，将81种常用溶剂分为八类。2023-1-27SnyderSnyderSnyder溶剂分类法溶剂分类法溶剂分类法 选择不同组别的溶剂，分子间作用力不同，容易造成组分间的分配系数
8、的差别，使改变，以利于组分的分离。根据各类参照物推算出常用溶剂的极性参数P/和反相洗脱溶剂的强度因子S值。选择不同极性参数P/的溶剂（正相）或不同强度因子S的溶剂（反相）进行配比，优化分离效果。2023-1-27三三三)溶剂最优方法溶剂最优方法溶剂最优方法-四面体优化法四面体优化法四面体优化法 根据色谱类型（正、反相）组成四面体；寻找被分离组分的容量因子k=3的等洗脱面ABC；将此等洗脱面视为正三角形按比例配制等洗脱强度的初试溶剂。用初试溶剂作为流动相，进样，检查分离效果，选择最好的溶剂系统。2023-1-27色谱溶剂系统的四面体优化法色谱溶剂系统的四面体优化法色谱溶剂系统的四面体优化法ABC
9、0.5/0.5/00.5/0/0.50/0.5/0.50.33/0.33/0.330.67/0.16/0.160.16/0.67/0.160.16/0.16/0.67BDB/A/C/AC2023-1-27应用实例应用实例应用实例 11种磺胺混合物的分离 组成溶剂四面体甲醇、乙腈、四氢呋喃底剂：水B水乙腈甲醇四氢呋喃AC2023-1-27应用实例应用实例应用实例 11种磺胺混合物的分离寻找等洗脱强度面用ODS键合相柱与甲醇-水，分离上述混合物。经数次调整配比，在甲醇-水（20.0:80.0）时，样品中保留时间适中组分的k=3（或25）。tR=t0(1+k)该号溶剂强度因子：Sab=3.00.2+
10、00.8=0.6所有配比溶剂系统的强度因子都为0.6。2023-1-27应用实例应用实例应用实例 11种磺胺混合物的分离MeOH-H2OCAN-H2OTHF-H2O0.5/0.5/00.5/0/0.50/0.5/0.50.33/0.33/0.330.67/0.16/0.160.16/0.67/0.160.16/0.16/0.67v按比例配制等洗脱强度的初试溶剂2023-1-27应用实例应用实例应用实例1)MeOH-H2O(20:80)2)CAN-H2O(18.8:81.2)3)THF-H2O(13.3:86.7)4)MeOH-CAN-H2O(10.0:9.4:80.6)5)ACN-THF-H2
11、O(9.4:6.6:84.0)6)MeOH-THF-H2O(10.0:6.6:83.4)7)MeOH-CAN-THF-H2O(6.7:6.3:4.4:82.6)MeOH-H2OCAN-H2OTHF-H2O0.5/0.5/00.5/0/0.50/0.5/0.50.33/0.33/0.330.67/0.16/0.160.16/0.67/0.160.16/0.16/0.672023-1-27应用实例应用实例应用实例 11种磺胺混合物的分离 用初试溶剂作为流动相，进样，检查分离效果 最佳流动相：MeOH-CAN-THF-H2O (6.7:6.3:4.4:82.6)2023-1-27洗脱方式洗脱方式洗脱
12、方式 恒组成溶剂洗脱用恒定配比的溶剂系统洗脱 梯度洗脱在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的浓度配比。优点：缩短分析周期；提高分离效果；改善峰形；增加检测灵敏度。缺点：有时引起基线漂移；重复性不佳。2023-1-27续前续前续前 1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱）以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵）类似GC的等温度洗脱2）梯度洗脱：在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例 即不断改变其极性（两个泵）适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温（沸程较长样品）2023-1-27三、分离条件的选择三、分离条件的选择三、分离条件的选择1 22114kknRuCAH流动相采用粘度小、低流速
13、的匀的固定相：采用粒度小、填充均n12121212RRRRVVttkkKK温影响小）质和固定相性质（受柱：调整流动相种类、性0ttVVKVCVCWWkRmsmmssms小）的配比（受柱温影响较：调整流动相和固定相k2023-1-27影响分离的因素影响分离的因素影响分离的因素影响分离的因素影响分离的因素影响分离的因素 factors influenced separationfactors influenced separationfactors influenced separation1.1.影响分离的因素与提高柱效的途径影响分离的因素与提高柱效的途径 在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气
14、体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：H=A+C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。2023-1-27 液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。2023-1-27 2.2.2.2.2.2.流速流速流速流速流速流速 流速大于0.5 cm/s时,Hu曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。3.3.固
15、定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。2023-1-27一一一)高效液相色谱法的速率理论高效液相色谱法的速率理论高效液相色谱法的速率理论（填充柱）：uCuBAHGC/（毛细管柱）或uCuBH/dpA2dpAgmDDB22gRDBtB，MTDTDgg或llgsmCCCCCCllDdfC2TDL1.2023-1-27一一一)高效液相色谱法的速率理论高效液相色谱法的速率理论高效液相色谱法的速率理论 HPLC是将LC与GC基本原理和实验方法相结合而产生。两者主要差别
16、是流动相性质不同 Van Deemter方程式：GC H=A+B/u+Cu 毛细管开口柱 H=B/u+Cu HPLC H=A+Cu （流动相是液体，粘度比气体大的多，柱温为室温，而且流速至少是最佳流速的3-5倍，综上原因可忽略纵向扩散项）2023-1-27图示图示图示back2023-1-27影响影响影响HPLCHPLCHPLC色谱峰宽的因素色谱峰宽的因素色谱峰宽的因素 涡流扩散项AA=2dp 降低固定相直径dp(3-5m)降低。采用球形、仄粒度分布（RSD5%）固定相及匀浆装柱。2023-1-27影响影响影响HPLCHPLCHPLC色谱峰宽的因素色谱峰宽的因素色谱峰宽的因素 纵向扩散项 纵向
17、扩散系数:因流动相黏度大,组分的纵向扩散系数很小,纵向扩散项可以忽略.uCAHHPLC：mDB2TDm相忽略大低，流动相柱温BT2023-1-27影响影响影响HPLCHPLCHPLC色谱峰宽的因素色谱峰宽的因素色谱峰宽的因素 传质阻抗系数C GC C=Cs HPLC C=Cm+Csm+Cs 化学键合相，固定液为键合在载体表面的官能团的单分子层 HPLC C=Cm+Csm Van deemter方程在HPLC中的表现形式：HPLC H=A+Cmu+Csmu2023-1-27续前续前续前3）传质阻抗项及其影响）（忽略固定相传质阻抗smmssmmCCCCCC忽略固定相传质阻抗态流动相的传质阻抗注：只
18、考虑流动相和静uCuCAHHPLCsmm：msmmDdpCC2mDdpC2TDm柱效，nHCdp柱效，nHDm，柱阻，但易产生气泡mmDTCDT2023-1-272023-1-27HPLCHPLCHPLC分离条件的选择分离条件的选择分离条件的选择 采用小粒度、仄分布的球形固定相，首选化学键合相，用匀浆法装柱。采用低粘度流动相，低流量（1ml/min）。柱温以25为宜。太低，则使流动相的粘度增加。用水溶液为流动相的色谱法（如IEC）可按需升温。2023-1-27其他其他其他(自学自学自学)正相键合相色谱的分离条件 反相键合相色谱的分离条件 反相离子对色谱的分离条件2023-1-27四四四 其他固
19、定相其他固定相其他固定相(自学自学自学)键合型离子交换剂 手性固定相 亲合色谱固定相2023-1-27五、分离类型选择五、分离类型选择五、分离类型选择五、分离类型选择五、分离类型选择五、分离类型选择 choice of separation typeschoice of separation typeschoice of separation types2023-1-27第二第二第二第二第二第二十十十十十十章章章章章章高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法一、一、输液系统输液系统二、二、分离与进样系统分离与进样系统三、检测系
20、统三、检测系统四四 数据记录处理和数据记录处理和 计算机控制系统计算机控制系统第三节第三节第三节第三节第三节第三节高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪high performance liquid chromatograph2023-1-27一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatographhigh performance liquid chromatographhigh performance liquid chromato
21、graph2023-1-27液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（2 2 2）2023-1-27液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（3 3 3）2023-1-27液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（4 4 4）2023-1-272023-1-27二、二、二、二、二、二、高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪2023-1-27三、流程及主要部件三、流程及主要部件三、流程及主要部件三、流程及主要部件三、流程及主要部件三、流程及主要部件 proces
22、s and main assembly of HPLCprocess and main assembly of HPLCprocess and main assembly of HPLC1.1.流程流程2023-1-27第三节 高效液相色谱仪微机泵贮液瓶检测器记录器级分收集器预柱分析柱柱恒温箱自动进样器进样器进样2023-1-27一、高压输液泵一、高压输液泵一、高压输液泵(1)高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：150350105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、
23、流量稳定可调、耐腐蚀等特性2023-1-27一、高压输液泵一、高压输液泵一、高压输液泵1、柱塞往复泵2023-1-27输液泵的要求：输液泵的要求：输液泵的要求：无脉冲、流量恒定、流量可以自由调节、耐高压、碉腐蚀、适于进行梯度洗脱2023-1-27(2)(2)(2)梯度淋洗装置梯度淋洗装置梯度淋洗装置梯度淋洗装置梯度淋洗装置梯度淋洗装置外梯度外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。2023-1-27二、分离和进样系统二、分离和进样系统二、分离和进
24、样系统 完整的分离和进样系统包括进样器、色谱柱、柱的进出口接头及至检测器的导管。1、进样器 六通进样阀2023-1-271.1.1.进样装置进样装置进样装置进样装置进样装置进样装置 流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：2023-1-272023-1-27(4)(4)(4)高效分离柱高效分离柱高效分离柱高效分离柱高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2023-1-27二、色谱柱二、色谱柱二、色谱柱2、色谱柱 分析型：
25、内径24.6mm，柱长1025cm 制备型：内径2040mm，柱长1030cm3、色谱柱柱效的评价 “色谱条件与系统适用性试验”给出分析状态下色谱柱最小理论塔板数、分离度和拖尾因子。2023-1-27(5)(5)(5)液相色谱检测器液相色谱检测器液相色谱检测器液相色谱检测器液相色谱检测器液相色谱检测器2023-1-27三、检测系统三、检测系统三、检测系统 一)检测器的要求：灵敏度高;噪声低;线性范围宽;重复性好;适用化合物的种类广。2023-1-27三、检测系统三、检测系统三、检测系统可变波长型检测器可变波长型检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器2023-1-27覆盆子指纹谱图覆盆子
26、指纹谱图覆盆子指纹谱图2023-1-27板蓝根指纹图谱板蓝根指纹图谱板蓝根指纹图谱2023-1-27三、检测系统三、检测系统三、检测系统 二)、紫外检测器UVD 优点：灵敏度高，噪音低，不破坏样品可用于制备，对温度及流动相流速波动不敏感，可用于梯度洗脱。缺点：只能检测有紫外吸收的样品；流动相选择有一定限制，检测波长必须大于流动相的截止波长。2023-1-27二二二二二二)紫外检测器紫外检测器紫外检测器紫外检测器紫外检测器紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：特点：灵敏度高；工作原理为Lamber-Beer定律 线形范围高；流通池可做的很小（1m
27、m 10mm，容积 8L）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。2023-1-271.1.1.可变波长检测器可变波长检测器可变波长检测器 原理与紫外分光光度计类似.2023-1-27可变波长紫外光测定器示意图2023-1-272.2.2.2.2.2.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。2023-1-272023-1
28、-27光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器2023-1-27三三三三三三)荧光检测器荧光检测器荧光检测器荧光检测器荧光检测器荧光检测器（fluorescence detectorfluorescence detectorfluorescence detector）高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；2023-1-27四四四四四四).).).示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器（different
29、ial refractive index detectordifferential refractive index detectordifferential refractive index detector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种；2023-1-27示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器2023-1-27五五五)其他检测器其他检测器其他检测器 1.安培检测
30、器 2 蒸发光散射检测器2023-1-27 第二十章第二十章第二十章 高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱 法法法一、一、定定性分析方法性分析方法二二、定定量分析方法量分析方法三、高三、高效液相色谱效液相色谱 分离方法的选择分离方法的选择 第四节第四节第四节 高效液相色高效液相色高效液相色 谱分析法谱分析法谱分析法high performance liquid chromatograph2023-1-27第四节第四节第四节高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱分析方法分析方法分析方法一、定性分析方法 色谱鉴定法 化学鉴定法 两谱联用鉴定法 两谱联用法（离线）两谱联用仪（在线）2023-1-27二
31、、定量分析方法二、定量分析方法二、定量分析方法(与与与GCGCGC类似类似类似)1、外标法 以待测组分的纯品作对照物质，对比求算试样含量。工作曲线法、外标一点法、外标二点法 进样量必须准确，否则宣布误差大。外标一点法只有在工作曲线通过零点时才准确。2023-1-27二、定量分析二、定量分析二、定量分析2、内标法 工作曲线法 内标一点法 内标二点法 内标对比法 校正因子法。2023-1-27三、分离方法的选择三、分离方法的选择三、分离方法的选择三、分离方法的选择三、分离方法的选择三、分离方法的选择 choice of separation typeschoice of separation ty
32、peschoice of separation types2023-1-27 第二十章第二十章第二十章 高效液相色高效液相色高效液相色 谱分析法谱分析法谱分析法一、一、超临界流体色谱的特点超临界流体色谱的特点与原理与原理feature and principle of SFC二二、超临界流体色谱仪的结、超临界流体色谱仪的结构流程构流程structure and general process of SFC 三、超临界流体色谱的应用三、超临界流体色谱的应用application of SFC 第五节第五节第五节 超临界色谱超临界色谱超临界色谱high performance liquid chr
33、omatographsupercritical fluid chromatograph,SFC2023-1-27一、一、一、一、一、一、超临界流体色谱的特点与原理超临界流体色谱的特点与原理超临界流体色谱的特点与原理principle and character of supercritical fluid principle and character of supercritical fluid principle and character of supercritical fluid chromatographychromatographychromatography1.1.概述概述 超
34、临界流体超临界流体：在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态。性质介于液体和气体之间。超临界流体色谱(SFC)，80年代快速发展，具有液相、气相色谱不具有的优点:（1 1）可处理高沸点、不挥发试）可处理高沸点、不挥发试样；样；（2 2）比）比LCLC有更高的柱效和分离有更高的柱效和分离效率效率。2023-1-272.2.2.超临界流体性质超临界流体性质超临界流体性质（1 1）性质介于液体和气体之间）性质介于液体和气体之间;具有气体的低黏度、液体的高密度，扩散系数位于两具有气体的低黏度、液体的高密度，扩散系数位于两者之间。者之间。（2 2）可通过改变超临界流体的密度（程序改变）调节组分）可通过
35、改变超临界流体的密度（程序改变）调节组分分离（类似于气相色谱的程序升温，液相色谱中的梯度淋分离（类似于气相色谱的程序升温，液相色谱中的梯度淋洗）。洗）。超临界流体的密度与压力有关。超临界流体的密度与压力有关。2023-1-273.3.3.原理原理原理 SFC的流动相的流动相：超临界流体；CO2、N2O、NH3 SFCSFC的固定相的固定相：固体吸附剂（硅胶）或键合到载体（或毛细管壁）上的高聚物；可使用液相色谱的柱填料。填充柱SFC和毛细管柱SFC；分离机理：分离机理：吸附与脱附。组分在两相间的分配系数不同而被分离；通过调节流动相的压力（调节流动相的密度），调整组分保留值；2023-1-27压力
36、效应压力效应压力效应：SFC的柱压降大（比毛细管色谱大30倍），对分离有影响（柱前端与柱尾端分配系数相差很大，产生压力效应）；超临界流体的密度受压力在临界压力处最大，超过该点，影响小，超过临界压力20%，柱压降对分离的影响小；压力效应：在SFC中，压力变化对容量因子产生显著影响，超流体的密度随压力增加而增加，密度增加提高溶剂效率，淋洗时间缩短。CO2流动相，当压力改变：7.09.0106 Pa，则：C16H34的保留时间 25min 5min。2023-1-27程程程序序序升升升压压压2023-1-27HPLCHPLCHPLC与与与SFCSFCSFC比较比较比较2023-1-27二、二、二、二
37、、二、二、超临界流体色谱的结构与流程超临界流体色谱的结构与流程超临界流体色谱的结构与流程instrumentinstrumentinstrument structure and the general process of SFCstructure and the general process of SFCstructure and the general process of SFC1.1.结构流程结构流程 2023-1-272.2.2.主要部件主要部件主要部件（1 1）SFCSFC的高压泵的高压泵 无脉冲的注射泵；通过电子压力传感器和流量检测器，计算机控制流动相的密度和流量；（2 2）S
38、FCSFC的色谱柱和固定相的色谱柱和固定相 可以采用液相色谱柱和交联毛细管柱；SFC的固定相：固体吸附剂（硅胶）或键合到载体（或毛细管壁）上的高聚物；专用的毛细管柱SFC；2023-1-27主要部件主要部件主要部件（3 3）流动相流动相 SFC的流动相：超临界流体；CO2、N2O、NH3 CO2应用最广泛；无色、无味、无毒、易得、对各类有机物溶解性好，在紫外光区无吸收；缺点：极性太弱；加少量甲醇等改性；（4 4）检测器）检测器 可采用液相色谱检测器，也可采用气相色谱的FID检测器2023-1-27三、三、三、三、三、三、超临界流体色谱的应用超临界流体色谱的应用超临界流体色谱的应用 application of SFCapplication of SFCapplication of SFC1.1.聚苯醚低聚物的分析聚苯醚低聚物的分析色谱柱：10m 63m i.d.毛细管柱，固定相：键合二甲基聚硅氧烷；流动相：CO2；柱温：120 C；程序升压；2023-1-272.2.2.甘油三酸酯的分析甘油三酸酯的分析甘油三酸酯的分析 四种组分仅双键数目和位置不同，难分离；色谱柱：DB-225 SFC毛细管柱；流动相：CO2；从15MPa程序升压到27MPa；2.5hr完全分离。2023-1-27
