1、分分子子生生物物学学2010实实验验分子生物学实验室常用分子生物学实验室常用仪器设备简介及操作仪器设备简介及操作实验一实验一 分分子子生生物物学学2010实实验验实验室主要仪器，设备的简介及使用方法实验室主要仪器，设备的简介及使用方法分分子子生生物物学学2010实实验验微量移液器微量移液器分分子子生生物物学学2010实实验验 微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。器，其装有直接读数容量计。微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。调节读数。0.5 0.51
2、0l 10l 10 10100l100l 20 20200l 200l 100 1001000l1000l常见规格常见规格分分子子生生物物学学2010实实验验量液的操作步骤：量液的操作步骤：第一停点第二停点A A 保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点；保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点；B B 微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮；微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮；C C 保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢 慢压下按钮至第一停点；慢压下按钮至第一停点；D D 压至第二停点把溶液完全释放出；压至第二停点把溶液完全释放
3、出；E E 释放按钮回原状。释放按钮回原状。分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验台式高速离心机台式高速离心机离心机的分类离心机的分类 低速低速：每分钟几千转：每分钟几千转 高速高速：每分钟：每分钟1 3万转万转 超速超速：每分钟：每分钟3万转以上万转以上 分分子子生生物物学学2010实实验验低速：细胞等大分子低速：细胞等大分子 高速：高速：DNADNA，蛋白等，蛋白等 超速超速:病毒，蛋白，细胞器等病毒，蛋白，细胞器等基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术的分离
4、制备实验中都离不开低温离心技术 本实验室所用离心机本实验室所用离心机:台式高速离心机（台式高速离心机（ThermoThermo ），配有），配有角式转头：角式转头：24241.5ml1.5ml；极限转速；极限转速13000rpm;13000rpm;台式低温高速离台式低温高速离心机（心机（sigma),sigma),极限转速极限转速20000rpm20000rpm。离心机的功能：离心机的功能：分离，纯化分离，纯化分分子子生生物物学学2010实实验验台式高速离心机使用步骤台式高速离心机使用步骤分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验PCR仪仪分分子子生生物物学学20
5、10实实验验 PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等。学等。PCR仪，也称仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，能使热循环仪、基因扩增仪，能使一对寡核苷酸引物结合到正负一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片片段，它的每一循环包括段，它的每一循环包括DNA变性、复性、延伸变性、复性、延伸三个三个反应。反应。分分子子生生物物学学2010实实验验操作程
6、序操作程序:1 1）开机：打开电源，显示主界面；）开机：打开电源，显示主界面；2 2）创建程序：使用）创建程序：使用”createcreate”输入新程序（包括输入新程序（包括PCRPCR循循 环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温 度），保存程序（包括用户名和方法名）度），保存程序（包括用户名和方法名）;3 3）放入样品，盖上盖子）放入样品，盖上盖子;4 4）在所建用户名下按）在所建用户名下按“run”run”键，找到设定的程序，键，找到设定的程序，按按“startstart”键键启动程序启动程序;5 5）运行结束后按）运行结束后按“stopstop
7、”键停止运行，取出样品，关键停止运行，取出样品，关闭电源。闭电源。分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验FR-980生物电泳图像分析系统生物电泳图像分析系统分分子子生生物物学学2010实实验验系统简介：系统简介：系统可以通过紫外系统可以通过紫外/可见光分析装置及透光扫描仪直可见光分析装置及透光扫描仪直接获得核酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配置有接获得核酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配置有SmartViewSmartView生物电泳图像分析软件，可以进行密度扫描、生物电泳图像分析软件，可以进行密度扫描、密度定量、分子量计算等电泳分析。此外，该系统含有密度定量、分子量
8、计算等电泳分析。此外，该系统含有多种图像滤波器，可降低图像的噪音，从而获得较清晰多种图像滤波器，可降低图像的噪音，从而获得较清晰的图像。的图像。分分子子生生物物学学2010实实验验操作步骤：操作步骤：1）将电泳样品放入分析装置中将电泳样品放入分析装置中2）打开电脑，运行打开电脑，运行Smart View 软件，单击软件，单击“Import”键进入键进入 图像获取项目栏，图像获取项目栏，选择选择“获取视频图像获取视频图像”键，进键，进行图像采集行图像采集3）选选 择紫外或可见光源，在图像采集窗口中调节好图像大择紫外或可见光源，在图像采集窗口中调节好图像大 小、亮度及焦距小、亮度及焦距4）单击单击
9、“采集图像采集图像”键，根据图像质量选择好优化摄影时间键，根据图像质量选择好优化摄影时间 （一般情况下在（一般情况下在12秒左右秒左右），即开始采集。，即开始采集。1 1、图像采集、图像采集分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验2、图像保存、图像保存 单击单击“System 键键”选择选择“另保存图像为另保存图像为”键，出现一个键，出现一个“图像文图像文件登记件登记”窗口，窗口，输入标题，实验人，实验日期，实验摘要等输入标题，实验人，实验日期，实验摘要等信息，信息，按按“保存保存”键完成图像文件登记键完成图像文件登记，同时出现，同时出现“另保存图另保存图像为像
10、为”窗口，输入图像名，保存图像至桌面。窗口，输入图像名，保存图像至桌面。3、关闭操作系统、关闭操作系统（1）关闭紫外）关闭紫外/可见光。可见光。（2）退出软件界面。）退出软件界面。（3）关闭紫外与可见分析装置的电源。）关闭紫外与可见分析装置的电源。分分子子生生物物学学2010实实验验注意事项：注意事项：1、不要戴不要戴“脏脏”手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位置；手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位置；2、不要戴不要戴“脏脏”手套触摸仓门和灯箱电源开关；手套触摸仓门和灯箱电源开关；3、不要戴不要戴“脏脏”手套触摸外接电源开关；手套触摸外接电源开关；4、在图像获取过程中，若通过软件打开紫外在图像获取过程中
11、，若通过软件打开紫外/可见光，则可见光，则 必须再通过软件关闭，若通过紫外与可见分析装置上必须再通过软件关闭，若通过紫外与可见分析装置上 打开紫外打开紫外/可见光，则从分析装置上关闭，严禁互用，可见光，则从分析装置上关闭，严禁互用，导致紫外灯长亮。导致紫外灯长亮。分分子子生生物物学学2010实实验验电泳仪电泳仪DYY-12型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）分分子子生生物物学学2010实实验验操作程序：操作程序：1）电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接（极）电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接（极 性不要接反）；性不要接反）；2）打开电源，设置参
12、数（选择稳压稳流方式及电压电）打开电源，设置参数（选择稳压稳流方式及电压电 流范围）；流范围）；3）按）按“启动启动”启动程序（输出为高电压，注意安全）；启动程序（输出为高电压，注意安全）；4）电泳结束，按）电泳结束，按“停止停止”键终止程序。键终止程序。分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验使用及性能使用及性能：摇床（振荡器）广泛用于对摇床（振荡器）广泛用于对温度和振荡频率有较高要求温度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体研究等。实验室常用的液体摇匀，微生
13、物、细菌和细胞摇匀，微生物、细菌和细胞培养。培养。恒温气浴摇床恒温气浴摇床SHK-99-SHK-99-型台式空气恒温摇床型台式空气恒温摇床分分子子生生物物学学2010实实验验操作程序：操作程序：分分子子生生物物学学2010实实验验超净工作台超净工作台使用及性能：使用及性能：超净工作台为分子生物超净工作台为分子生物学无菌操作提供可能，学无菌操作提供可能，分为垂直送风和水平送分为垂直送风和水平送风两种。风两种。分分子子生生物物学学2010实实验验 超净台由三相电机作鼓风动力，空气通过由超净台由三相电机作鼓风动力，空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清超
14、级滤清器器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓净空气层流，即所谓“高效的特殊空气高效的特殊空气”，能够，能够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，同时也不防止附近空气可能袭扰而引起的污染，同时也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，可以保持工作人员就在这样的无菌条件下操作，可以保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。无菌材料在转移接种过程中不受污染。分分子子生生物物学学2010实实验验台面清洁消毒台面清洁消毒进行无菌操作进行无菌操作清理工作台面清理工作台面
15、紫外消毒紫外消毒3030分钟分钟关闭紫外灯、电源关闭紫外灯、电源操作程序：操作程序：1 1）工作台面上，不要存）工作台面上，不要存 放不必要的物品，以放不必要的物品，以 保持工作区内的洁净保持工作区内的洁净 气流不受干扰。气流不受干扰。操作时一定注意关掉操作时一定注意关掉 紫外，防止对实验人紫外，防止对实验人 员造成伤害员造成伤害注意事项：注意事项：分分子子生生物物学学2010实实验验灭菌锅灭菌锅使用及性能：使用及性能：细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；对于经过导入对于经过导入DNAD
16、NA重组分子的菌株，操作后重组分子的菌株，操作后必须进行严格的高压消毒灭活处理必须进行严格的高压消毒灭活处理 。分分子子生生物物学学2010实实验验1 1）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上；至板上；2 2）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮；）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮；3 3）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过200mm200mm100mm100mm100mm100mm为宜，各包装之间留有间隙，利于蒸为宜，各包装之间留有间隙，利于蒸汽穿透，提高灭
17、菌效果；汽穿透，提高灭菌效果；3 3）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压紧锅盖；）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压紧锅盖；4 4）灭菌：）灭菌：121121，20min20min；如为液体，液体必须装在可耐；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，不宜超过高温的玻璃器皿中，不宜超过2/32/3；5 5）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。操作程序：操作程序：分分子子生生物物学学2010实实验验1 1）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排 净锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。净锅内冷空
18、气，否则会影响灭菌效果。2 2）灭菌结束后，要等温度降为）灭菌结束后，要等温度降为“0 0”，才可打开灭，才可打开灭 菌锅锅盖；菌锅锅盖；3 3）高压蒸汽灭菌时，须保持高温高压，因此必）高压蒸汽灭菌时，须保持高温高压，因此必 须严格按照操作规程操作，否则易发生意外须严格按照操作规程操作，否则易发生意外 事故。事故。注意事项：注意事项：分分子子生生物物学学2010实实验验 琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测实验二 分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验一一.实验目的实验目的 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;学习琼脂糖凝胶电泳的操作。学习琼脂糖凝胶电
19、泳的操作。分分子子生生物物学学2010实实验验二二.实验原理实验原理 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。琼脂糖的浓度。DNA分子在碱性环境中带分子在碱性环境中带负电荷负电荷，在外加电场作，在外加电场作用下向用下向正极泳动正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有有电荷效应电荷效应与与分子筛效应分子筛效应。DNA分子量及构型不同，分子量及构型不同，其泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电其泳动率就不同，
20、从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应。，主要是利用分子筛效应。分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验附 注：1影响影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素：在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素：1)DNA分子大小分子大小 2)琼脂糖浓度：不同的凝胶浓度，分辨不同范围的琼脂糖浓度：不同的凝胶浓度，分辨不同范围的DNA Agarose：0.5%：1-30 kb；0.7%：0.8-12 kb；1.2%:0.4-7 kb；1.5%：0.2-3 kb.3)DNA构象：构象：一般迁移速率超螺旋环状一般迁移速率超螺旋环状线状线状DNA单链开环。
21、单链开环。logNlogN1 1V=V=（V V：迁移速率：迁移速率 N N：碱基对数目）：碱基对数目）分分子子生生物物学学2010实实验验4)所加电压：低电压时，线状所加电压：低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电片段的迁移速率与所加电 压成正比。压成正比。5)嵌入染料的存在：降低线性嵌入染料的存在：降低线性DNA迁移率。迁移率。6)电泳缓冲液的组成及其离子强度影响电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的迁移率，无离的迁移率，无离 子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔 化凝胶并导致化凝胶并导致DNA变性，一般采用变性，一般采用1TAE，1TBE，1TPE（均含（均含EDTA pH8.0）。）。分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验三三.仪器和试剂仪器和试剂分分子子生生物物学学2010实实验验四四.操作步骤操作步骤分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验分分子子生生物物学学2010实实验验回回 答答 问问 题题 列出分子生物学常用仪器的名称，用途列出分子生物学常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项。及操作时的注意事项。做琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题。做琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题。
