1、1 第六章第六章 黄酮类化合物黄酮类化合物2黄酮的含义：黄酮的含义：经典含义经典含义:以二苯基色原酮衍生的一类化合物的总称，由于该类化合物大多呈淡黄色或黄色，且分子中多具酮基，因此称为黄酮。3黄酮的含义：黄酮的含义：现代含义现代含义:泛指二个苯环（A环和B环）通过三个碳原子相互连接而成的一系列化合物的总称，即具有C6-C3-C6结构的一类化合物的总称。4第一节：结构和分类第一节：结构和分类C C6 6-C-C3 3-C-C6 6结构（黄酮）结构（黄酮）依：三碳链的氧化程度 三碳链是否构成环 3-位羟基取代与否 B-环连接位置(2、3-位)5v黄酮黄酮v二氢黄酮二氢黄酮OOABC12345678
2、23465 23OO 橙皮苷（5，7，3-三OH，4-OCH3二氢黄酮）甘草苷（甘草素-7-O-glu苷）甘草素（7，4 二OH二氢黄酮）芹菜素（5，7，4-三OH黄酮）木犀草素（5，7，3，4-四OH黄酮）黄芩素(5，6，7-三OH黄酮)6v黄酮醇黄酮醇v二氢黄酮醇二氢黄酮醇23OOOH23OOOH 二氢槲皮素（5，7，3，4-四OH二氢黄酮醇）二氢桑色素（5，7，2，4-四OH二氢黄酮醇）山柰酚（5，7，4-三OH黄酮醇）槲皮素（5，7，3，4-四OH黄酮醇）杨梅素（5，7，3，4，5-五OH黄酮醇）723OO 23OO紫檀素鱼藤酮v 异黄酮异黄酮v 二氢异黄酮二氢异黄酮大豆素（7，4-二
3、OH异黄酮）大豆苷（大豆素-7-O-glc苷）葛根素（7，4-二OH，8-glc异黄酮苷）8v 查耳酮查耳酮v 二氢查耳酮（二氢查耳酮（+）儿茶素）儿茶素2345623465OOHOOHOHOHOHOglc红花苷红花苷OOHOOHOHOHOglc梨根苷梨根苷9v黄烷黄烷-3-3-醇醇 v黄烷黄烷-3-3，4-4-二醇二醇OOH3OOHOHOHOHHHOH（+）儿茶素）儿茶素OOHOH34OOHOHOHOHOHOHOH无色飞燕草素无色飞燕草素1034OOCH256723456v花色素花色素v橙酮橙酮OOHOHOHOHOHOH+34OOH+硫磺菊素（硫磺菊素（6 6，33，4-4-三三OHOH橙酮
4、）橙酮）飞燕草苷元飞燕草苷元11v讪酮（双苯吡酮讪酮（双苯吡酮 )v高异黄酮高异黄酮OOOHOHOHOHglcOO异芒果素异芒果素OO12OOHOOOHHHCH2OHHOCHOHOHOH3v木脂素黄酮（水飞蓟素）木脂素黄酮（水飞蓟素）13第二节第二节 黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质一、性状一、性状1 1：形态：形态：多为结晶性固体，少数为无定形粉（苷）多为结晶性固体，少数为无定形粉（苷）2 2：颜色：颜色：多为黄色多为黄色交叉共轭体系（电子转移、重排，共轭增强，产生颜色的基础）交叉共轭体系（电子转移、重排，共轭增强，产生颜色的基础）助色团（给系统提供电子，使颜色加深，尤其助色团（
5、给系统提供电子，使颜色加深，尤其7 7，4-4-位，辅助作位，辅助作用）用）14OOOOOO47+有有 交叉共轭体系交叉共轭体系 无无黄酮（灰黄黄酮（灰黄黄色）黄色）二氢黄酮二氢黄酮黄酮醇（灰黄黄酮醇（灰黄黄色）黄色）二氢黄酮醇二氢黄酮醇查耳酮（黄查耳酮（黄橙橙黄色）黄色）二氢查耳酮二氢查耳酮花色素类（颜色随花色素类（颜色随pHpH而改变）而改变）黄烷醇类黄烷醇类 异黄酮（无或微黄色）异黄酮（无或微黄色）二氢异黄酮二氢异黄酮 红色（红色（pH 7pH 8.5pH8.5）15二、旋光性：二、旋光性：旋光性旋光性 取决于取决于 不对称碳原子的有无不对称碳原子的有无 有有 无无16 有有 无无所有黄
6、酮苷（糖）所有黄酮苷（糖）游离黄酮游离黄酮游离黄酮游离黄酮 黄酮黄酮二氢黄酮二氢黄酮 黄酮醇黄酮醇二氢黄酮醇二氢黄酮醇 异黄酮异黄酮二氢异黄酮二氢异黄酮 查耳酮（二氢）查耳酮（二氢）黄烷醇黄烷醇 类橙酮类橙酮 花色素类等花色素类等 *OHOOOO2*OO （2-2-位）位）（2 2，3-3-位）位）（无）（无）17三、溶解性：符合苷的溶解性规律三、溶解性：符合苷的溶解性规律水水 甲醇甲醇 乙醇乙醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 氯仿氯仿 乙醚乙醚 稀碱水稀碱水-+-+（酚羟基（酚羟基)1.游离黄酮 游离黄酮游离黄酮 取决于取决于分子的立体结构分子的立体结构 取代基团的性质、数目、连接取代基团的性质、数目、
7、连接 位置。引入羟基数目多，位置。引入羟基数目多，7 7、4-4-位，水溶度较大。羟基甲位，水溶度较大。羟基甲基基 化（化（-OCH-OCH3 3）,水溶度降低。水溶度降低。18平面型分子平面型分子 非平面型分子非平面型分子 黄酮黄酮 二氢类（二氢类（C-C-环半椅式结构）环半椅式结构）黄酮醇黄酮醇 异黄酮（羰基与异黄酮（羰基与B-B-环立体障碍）环立体障碍）查耳酮查耳酮 分子间排列不紧密，分子间排列不紧密，交叉共轭交叉共轭 水分子易于进入水分子易于进入 水溶度小水溶度小 水溶度大水溶度大 2OOHRH R=OH 二氢黄酮醇R=H 二氢黄酮19 水水 甲醇甲醇 乙醇乙醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 氯仿
8、氯仿 乙醚乙醚 稀碱水稀碱水 +-+-+黄酮类化合物溶解性（极性）规律黄酮类化合物溶解性（极性）规律:v 三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元v 3-O-3-O-糖苷糖苷7-O-7-O-糖苷（平面性分子）糖苷（平面性分子）v 花色素花色素(平面性分子平面性分子,离子型离子型)非平面非平面性分子性分子 平面性分子平面性分子2.2.黄酮苷黄酮苷(亲水性亲水性)20 四、酸碱性四、酸碱性1酸性 酸性酸性 来源来源 影响影响 酚羟基（数目、位置）酚羟基（数目、位置）酸性规律：酸性规律：v7 7，4-OH4-OH酸性强于其他位置羟基的酸性（处于酸性强于其他位置羟基的酸性（处于 羰基对位，羰
9、基的共轭诱导）。羰基对位，羰基的共轭诱导）。v5-OH5-OH酸性最弱（处于羰基邻位，形成分子内氢键）酸性最弱（处于羰基邻位，形成分子内氢键）v 酚羟基数目越多，酸性越强。酚羟基数目越多，酸性越强。21 7 7，4-OH4-OH 7 7或或4-OH4-OH 其他位其他位-OH-OH 5-OH5-OHNaHCONaHCO3 3 +-+-NaNa2 2COCO3 3 +-+-NaOHNaOH +应用应用pHpH梯度法分离（游离黄酮）梯度法分离（游离黄酮）22OOH+Cl2.碱性：-吡喃酮环吡喃酮环1-1-氧原子氧原子 微弱碱性（孤对电子，接受质子）微弱碱性（孤对电子，接受质子）仅溶于强的、浓酸仅溶
10、于强的、浓酸+水水 （浓硫酸）（浓硫酸）烊烊 盐（呈色）盐（呈色）应用应用23初步鉴别黄酮母核类型：初步鉴别黄酮母核类型：黄酮、黄酮醇黄酮、黄酮醇 黄黄-橙色，并有荧光橙色，并有荧光 二氢黄酮二氢黄酮 橙红（冷）、紫红（热）橙红（冷）、紫红（热）查耳酮查耳酮 橙红橙红-洋红洋红 异黄酮（二氢）异黄酮（二氢）黄色黄色 橙酮橙酮 红红-洋红洋红应用应用24五、显色反应五、显色反应1 1还原显色反应还原显色反应反应类型反应类型 鉴别特征鉴别特征 鉴别意义鉴别意义 备注备注盐酸盐酸-镁粉镁粉 黄酮、二氢黄酮黄酮、二氢黄酮 红红-紫红紫红 黄酮类特征性黄酮类特征性 假阳性假阳性反应反应 黄酮醇、二氢黄酮
11、醇黄酮醇、二氢黄酮醇 红红-紫红紫红 鉴别反应鉴别反应 （花色素）（花色素）（最常用）（最常用）查耳酮、橙酮（查耳酮、橙酮（-）儿茶素类、异黄酮（儿茶素类、异黄酮（-）25四氢硼钠四氢硼钠 二氢黄酮二氢黄酮（醇醇）红红-紫红紫红 二氢黄酮类特有二氢黄酮类特有还原反应还原反应 其它黄酮类（其它黄酮类（-）钠汞齐反应钠汞齐反应 黄酮、二氢黄酮黄酮、二氢黄酮 红红 异黄酮、二氢异黄酮异黄酮、二氢异黄酮 红红 黄酮醇类黄酮醇类 黄黄-淡红色淡红色 二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类 棕黄色棕黄色反应类型反应类型 鉴别特征鉴别特征 鉴别意义鉴别意义 备注备注262.2.与金属盐类试剂络合反应与金属盐类试剂络合反应
12、反应类型反应类型 鉴别特征及鉴别意义鉴别特征及鉴别意义 备备 注注 三氯化铝三氯化铝 3-OH3-OH，4-C=O 4-C=O 黄色黄色 PPCTLC PPCTLC（AlClAlCl3 3）5-OH5-OH，4-C=O 4-C=O 鲜黄色荧光鲜黄色荧光 邻二酚羟（邻二酚羟（44或或7 7，44黄酮醇，天蓝色荧光）黄酮醇，天蓝色荧光）氨性氯化锶氨性氯化锶 邻二酚羟基邻二酚羟基 绿、棕乃至黑色绿、棕乃至黑色 (SrCl2)27 锆盐锆盐 枸橼酸枸橼酸 锆盐锆盐-枸橼酸枸橼酸 3-OH3-OH或或3 3，5-5-二二OH OH 黄色黄色 黄色不褪黄色不褪 PPCPPC(ZrOCl2)5-OH (Zr
13、OCl2)5-OH 黄色褪去黄色褪去示示示示反应类型反应类型 鉴别特征及鉴别意义鉴别特征及鉴别意义 备备 注注三氯化铁三氯化铁 酚羟基紫、蓝、绿酚羟基紫、蓝、绿(FeCl3)(FeCl3)283.3.硼酸显色反应硼酸显色反应 5-5-羟基，羟基，4-4-羰基黄酮羰基黄酮 黄色，绿色荧光黄色，绿色荧光 硼酸硼酸 （草酸液）（草酸液）（H3BO3H3BO3）6-6-羟基，羟基，4-4-羰基查耳酮羰基查耳酮 黄色，无荧光黄色，无荧光 （枸橼酸）（枸橼酸）反应类型反应类型 鉴别特征及鉴别意义鉴别特征及鉴别意义294.4.碱性试剂反应碱性试剂反应反应类型反应类型 鉴别特征及鉴别意义鉴别特征及鉴别意义 备
14、备 注注氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 黄酮黄酮 黄黄 -橙色橙色 查耳酮、橙酮查耳酮、橙酮 红红 -紫红紫红 二氢黄酮二氢黄酮 黄黄 -橙色（冷）橙色（冷）深红深红紫红（较长时间或加热）紫红（较长时间或加热）黄酮醇黄酮醇 黄色黄色 棕色棕色母核类型鉴别母核类型鉴别 O30稀氢氧化钠稀氢氧化钠 邻三酚羟基黄酮类邻三酚羟基黄酮类 邻三酚羟基鉴别邻三酚羟基鉴别 （暗绿（暗绿 蓝绿色纤维状）蓝绿色纤维状）氨蒸气或氨蒸气或 颜色变化颜色变化 TLCTLC、PPCPPC碳酸钠溶液碳酸钠溶液 反应类型反应类型 鉴别特征及鉴别意义鉴别特征及鉴别意义 备备 注注31五氯化锑五氯化锑 (SdCl(SdCl5 5)：查
15、耳酮特征性显色反应查耳酮特征性显色反应 (红或紫红色沉淀红或紫红色沉淀)黄酮、二氢黄酮、黄酮醇类呈橙色。黄酮、二氢黄酮、黄酮醇类呈橙色。5 5与五氯化锑反应与五氯化锑反应326 6其他显色反应其他显色反应 Gibb Gibbs s反应：酚羟基对位活泼质子的特征反应：酚羟基对位活泼质子的特征 （蓝或蓝绿色）（蓝或蓝绿色）33 黄酮类成分的存在状态（游离黄酮类成分的存在状态（游离溶剂法溶剂法 溶剂的选择溶剂的选择 苷）及溶解性苷）及溶解性 溶剂的溶解性能溶剂的溶解性能 提取方法（煎煮法、渗漉法、回流法等）的选择提取方法（煎煮法、渗漉法、回流法等）的选择 第三节第三节 黄酮类化合物的提取、分离黄酮类
16、化合物的提取、分离一、提取方法一、提取方法 溶剂法溶剂法关键关键选择依据选择依据34 溶剂溶剂 提取原理提取原理 游离黄酮游离黄酮 黄酮苷黄酮苷 备注备注 乙醇乙醇 溶解范围广溶解范围广 +（甲醇）（甲醇）苷、苷元均可溶苷、苷元均可溶 （90-95%90-95%）(60%60%）甲醇毒性大）甲醇毒性大 沸水沸水 多糖苷易于水多糖苷易于水 +成本低、安全成本低、安全,水溶性杂质多水溶性杂质多碱性水或碱性水或 稀氢氧化钠溶出能力强稀氢氧化钠溶出能力强碱性乙醇碱性乙醇 酚羟基的酸性酚羟基的酸性 +石灰水除杂质效果好石灰水除杂质效果好 35二、分离方法二、分离方法（一）溶剂萃取法（一）溶剂萃取法分离依
17、据：分离依据：黄酮与杂质黄酮与杂质苷与苷元苷与苷元 之间的极性（分配系数之间的极性（分配系数K）差异）差异苷元与苷元苷元与苷元 36分离工艺：分离工艺：原料的提取浓缩液（水溶液）原料的提取浓缩液（水溶液）依次以石油醚、乙醚、依次以石油醚、乙醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取石油醚液石油醚液 乙醚液乙醚液 乙酸乙酯乙酸乙酯 水饱和正丁醇水饱和正丁醇 母液母液（脂溶性杂质）（脂溶性杂质）（水溶性杂质（水溶性杂质)回收回收 回收回收 减压回收减压回收 苷元苷元 单糖苷单糖苷 多糖苷多糖苷 37（二）（二）pHpH梯度萃取法梯度萃取法分离依据：分离依据：游离黄酮类化合物的酸性差异
18、（见黄酮酸性规律）游离黄酮类化合物的酸性差异（见黄酮酸性规律）分离工艺：分离工艺：总游离黄酮的乙醚液总游离黄酮的乙醚液 依次以依次以5%NaHCO5%NaHCO3 3 、5%Na5%Na2 2COCO3 3、0.2%NaOH0.2%NaOH、4%NaOH4%NaOH萃取萃取 5%NaHCO35%NaHCO3液液 5%Na2CO35%Na2CO3液液 0.2%NaOH0.2%NaOH液液 4%NaOH4%NaOH液液 母液母液 酸化酸化 （脂溶性杂质）（脂溶性杂质）7 7，4-OH4-OH黄酮黄酮 7 7或或4-OH4-OH黄酮黄酮 一般一般-OH-OH黄酮黄酮 5-OH5-OH黄酮黄酮38（三
19、）柱色谱法（三）柱色谱法 吸附原理吸附原理 异黄酮、二氢黄酮（醇）异黄酮、二氢黄酮（醇）、氯仿氯仿-甲醇不同比例甲醇不同比例 （105105，高度甲基化或乙酰化黄酮（醇）高度甲基化或乙酰化黄酮（醇）混合溶剂洗脱混合溶剂洗脱 活化）活化）（极性小）（极性小）分配原理分配原理 多羟基黄酮醇或黄酮苷类多羟基黄酮醇或黄酮苷类 氯仿氯仿-甲醇甲醇-水水（加水失活（加水失活 或不活化）或不活化）（极性大）（极性大）（80 80：20 20：1 1）等比例）等比例1 1硅胶柱色谱硅胶柱色谱392 2聚酰胺色谱聚酰胺色谱 （1 1）原理：）原理：氢键吸附氢键吸附 吸附规律：与黄酮类化合物酚羟基的数目、位吸附规
20、律：与黄酮类化合物酚羟基的数目、位 置及介质（溶剂）等有关置及介质（溶剂）等有关。v酚羟基数目越多，吸附能力越强。酚羟基数目越多，吸附能力越强。v酚羟基数目相同的情况下，酚羟基所处的位置有利于酚羟基数目相同的情况下，酚羟基所处的位置有利于形成分子内氢键，吸附能力减弱。形成分子内氢键，吸附能力减弱。3-OH3-OH或或5-OH5-OH黄酮的吸附力小于其他位置黄酮的吸附力小于其他位置-OH-OH黄酮；黄酮；邻二酚羟基黄酮的吸附力弱于间位或对位酚羟基黄酮邻二酚羟基黄酮的吸附力弱于间位或对位酚羟基黄酮40v 分子内芳香化程度越高，吸附力越强。分子内芳香化程度越高，吸附力越强。查耳酮查耳酮 二氢黄酮二氢
21、黄酮 黄酮醇黄酮醇 黄酮黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 异黄酮异黄酮v 与介质的关系：吸附力与介质的关系：吸附力 水（中）水（中）甲醇、甲醇、乙醇（浓度由低到高）乙醇（浓度由低到高）碱性溶剂碱性溶剂洗脱规律洗脱规律：与吸附规律正好相反，即吸附能与吸附规律正好相反，即吸附能 力越强，越难洗脱（薄层力越强，越难洗脱（薄层Rf越小）越小）41 （2 2）“双重色谱双重色谱”原理原理 主要用于解释黄酮苷与苷元聚酰胺色谱现象主要用于解释黄酮苷与苷元聚酰胺色谱现象 正相色谱正相色谱 反相色谱反相色谱聚酰胺：极性固定相（极性酰胺基团）聚酰胺：极性固定相（极性酰胺基团）非极性固定相（非极性脂肪链）非极性固定相（非
22、极性脂肪链）洗脱剂：有机溶剂（氯仿洗脱剂：有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小）甲醇，极性小）含水溶剂（甲醇含水溶剂（甲醇-水，极性大）水，极性大）先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小）先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小）苷（极性大）（柱色谱分离）苷（极性大）（柱色谱分离）RfRf值：值：苷元苷元 苷苷 苷元苷元 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元 1-OH 2-OH 3-OH 4-OH 5-OH黄酮黄酮 44常用洗脱剂常用洗脱剂：碱水（碱水（0.1mol/L NH0.1mol/L NH3 3.H.H2 2O O）盐水（盐水（0.5mol/L NaCl0.5mol/L NaCl）醇或醇水不同比例。醇或醇水不同
23、比例。6 6高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC）适用于各种黄酮类化合物的分离适用于各种黄酮类化合物的分离原理：反相柱色谱（黄酮类化合物极性大）原理：反相柱色谱（黄酮类化合物极性大）固定相：固定相：ODSODS 流动相：水流动相：水-乙晴不同比例乙晴不同比例45 第四节第四节 黄酮类化合物的检识黄酮类化合物的检识一、理化检识一、理化检识 1.1.颜色：多呈黄色颜色：多呈黄色2.2.母核检识：盐酸母核检识：盐酸-镁粉反应镁粉反应-黄酮、黄酮醇、黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇（二氢黄酮、二氢黄酮醇（+）四氢硼钠反应四氢硼钠反应-二氢黄酮（醇）类（二氢黄酮（醇）类（+）五氯化锑五氯化
24、锑-查耳酮类（查耳酮类（+）463.3.取代基团检识：锆盐取代基团检识：锆盐-枸橼酸反应枸橼酸反应-3-OH-3-OH（+）5-OH5-OH（-）黄酮鉴别黄酮鉴别 氨性氯化锶反应氨性氯化锶反应-邻二酚羟基（邻二酚羟基（+）二、色谱检识二、色谱检识（一）纸色谱（一）纸色谱（PPCPPC）原理：分配原理原理：分配原理 适用范围：游离黄酮（苷元）及黄酮苷的分离鉴别适用范围：游离黄酮（苷元）及黄酮苷的分离鉴别 47方法方法：双相色谱双相色谱 第第I向向 醇性展开剂醇性展开剂 第第II向向 水性展开剂水性展开剂（BAW、TBA、水饱和正丁醇）、水饱和正丁醇）（28%HAc、3%NaCl、1%HCl）正相
25、色谱正相色谱 反相色谱反相色谱固定相（水）极性固定相（水）极性 流动相流动相 （有认为是吸附原理）有认为是吸附原理）48RfRf规律：极性小的化合物规律：极性小的化合物RfRf大大 极性大的化合物极性大的化合物RfRf大大 苷元（苷元（0.70.7以上）以上）单糖苷单糖苷 双糖苷（双糖苷（0.70.7以下）以下）苷元中，平面型分子苷元中，平面型分子 非平面型分子非平面型分子 RfRf规律与左边相反规律与左边相反母核相同，母核相同，2-OH3-OH4-OH5-OH2-OH3-OH4-OH5-OH黄酮黄酮 主要应用：苷元的分离鉴别主要应用：苷元的分离鉴别 黄酮苷及花色素类的分离鉴别黄酮苷及花色素类
26、的分离鉴别49（二）薄层色谱（二）薄层色谱（TLCTLC）1 1硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱 主要用于极性较小的黄酮类化主要用于极性较小的黄酮类化合物（黄酮苷元）的分离鉴别，其色谱行为可参考硅胶合物（黄酮苷元）的分离鉴别，其色谱行为可参考硅胶柱色谱。柱色谱。2 2聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱 可用于黄酮苷及游离黄酮的可用于黄酮苷及游离黄酮的分离鉴别，其色谱行为可参考聚酰胺柱色谱。分离鉴别，其色谱行为可参考聚酰胺柱色谱。3 3纤维素薄层色谱纤维素薄层色谱分配原理，其色谱行为可参考分配原理，其色谱行为可参考纸色谱。纸色谱。50各种色谱的检识顺序：各种色谱的检识顺序：v 日光下观察多数黄酮有黄色斑点v
27、紫外光下观察多数黄酮呈黄绿色荧光斑点v 氨蒸气熏多数黄酮有颜色变化v 喷显色剂（2%AlCl3甲醇液）多数黄酮黄色变深，荧光加强51第五节第五节 黄酮类化合物的结构研究黄酮类化合物的结构研究一、紫外可见光谱在黄酮类化合物结构测定中一、紫外可见光谱在黄酮类化合物结构测定中 的应用的应用 一般鉴定程序一般鉴定程序：v先测定在甲醇中的光谱v再测定在加入各种诊断试剂后的紫外光谱v如为苷类，则可水解或甲基化后再水解，并测定苷元或其衍生物的紫外光谱 52取代基：取代基：OHOH等，为助色团等，为助色团 依红移规律推断取代基团依红移规律推断取代基团 黄酮（醇）：黄酮（醇）：带带 II、带、带I均强均强母核光
28、谱特征母核光谱特征 二氢黄酮类、异黄酮类：带二氢黄酮类、异黄酮类：带 II强、带强、带I弱弱 母核的推断母核的推断 （甲醇）（甲醇）查耳酮、橙酮：带查耳酮、橙酮：带 II弱、带弱、带I强强 将以上各种光谱数据（或光谱图）进行对比分析，即将以上各种光谱数据（或光谱图）进行对比分析，即可获得有关结构信息。可获得有关结构信息。53加入诊断试剂加入诊断试剂:甲醇钠：甲醇钠：强碱，所有酚羟基解离强碱，所有酚羟基解离 醋酸钠：醋酸钠：碱性弱，酸性强的酚羟基解离碱性弱，酸性强的酚羟基解离 醋酸钠醋酸钠/硼酸：邻二酚羟基络合硼酸：邻二酚羟基络合 三氯化铝：三氯化铝：3-OH，4-羰基羰基，5-OH，4-羰羰
29、基基 络络合合邻二酚羟基邻二酚羟基 上述相应吸收峰红移上述相应吸收峰红移54OOROOROOR+1.1.黄酮类化合物在甲醇中紫外光谱特征黄酮类化合物在甲醇中紫外光谱特征 苯甲酰系统苯甲酰系统 桂皮酰系统桂皮酰系统（带（带IIII 220 220280nm280nm）（带（带1 1 300 300400nm400nm）黄酮类化合物结构中的交叉共轭体系黄酮类化合物结构中的交叉共轭体系55（1 1）母核光谱特征）母核光谱特征：母核结构（交叉共轭系统）是产生紫外吸收的基础母核结构（交叉共轭系统）是产生紫外吸收的基础，其中，其中:由苯甲酰系统的电子跃迁产生的吸收峰为带由苯甲酰系统的电子跃迁产生的吸收峰为
30、带II 220II 220280nm280nm 由桂皮酰系统电子跃迁产生的吸收峰为带由桂皮酰系统电子跃迁产生的吸收峰为带I 300I 300400nm400nm。不同母核的黄酮类化合物由于共轭系统（交叉共轭不同母核的黄酮类化合物由于共轭系统（交叉共轭系统）的不同，由交叉共轭系统产生的带系统）的不同，由交叉共轭系统产生的带I I或带或带IIII的峰的峰位、峰形、吸收峰的强度也不相同，因此，据此可用于位、峰形、吸收峰的强度也不相同，因此，据此可用于黄酮母核类型的判断。黄酮母核类型的判断。56黄酮类化合物母核黄酮类化合物母核UVUV吸收特征吸收特征母核类型母核类型 带带IIII （nmnm）带带I
31、I（nmnm）备注备注黄酮黄酮 250250280280（强）（强）304304350350（强）（强）典型的交叉共轭系统典型的交叉共轭系统黄酮醇（黄酮醇（3-OH3-OH取代）取代）328 328357357（强）（强）3-OH3-OH供电减弱供电减弱黄酮醇（黄酮醇（3-OH3-OH游离）游离）358 358385385（强）（强）3-OH3-OH供电共轭供电共轭，带，带1 1红移红移57 异黄酮异黄酮 245245278278（强）（强）(sh(sh)桂皮酰系统破坏桂皮酰系统破坏 二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇）270270295295（强）（强）(sh(sh)查耳酮查耳酮 220220270
32、270（弱）（弱）340340390390（强）（强）橙酮橙酮 230230270270（弱）（弱）370370430430（强）（强）花青素（苷）花青素（苷）270270280 465280 46556056058OOBOORAB 二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇）异黄酮（二氢）异黄酮（二氢）由由B B环产生的桂皮酰系统不存在，带环产生的桂皮酰系统不存在，带I I弱，带弱，带IIII强强59（2 2）取代基团对共轭吸收的影响）取代基团对共轭吸收的影响v黄酮类核中引入黄酮类核中引入-OH-OH（酚羟基）等供电基团，（酚羟基）等供电基团，使共轭程度增强，相应的吸收峰红移。一使共轭程度增强，相应的吸收峰
33、红移。一般，般，A A环引入环引入OHOH，带，带IIII红移，红移，B B环引入环引入OHOH带带I I红移。红移。60v 羟基甲基化或苷化后，原酚羟基的供电能力羟基甲基化或苷化后，原酚羟基的供电能力 下降，引起相应的吸收峰紫移。下降，引起相应的吸收峰紫移。3-OH甲基化或苷化，带甲基化或苷化，带I紫移，紫移，5-OH（与羰基形成分子内氢键）甲基化，（与羰基形成分子内氢键）甲基化，带带I、带、带II均紫移均紫移515nm，4-OH甲基化，带甲基化，带I紫移紫移310nm。61v羟基乙酰化后，乙酰基的吸电作用，使羟基乙酰化后，乙酰基的吸电作用，使原来酚羟基对共轭系统的供电能力消失，原来酚羟基对
34、共轭系统的供电能力消失，对光谱的影响亦将完全消失对光谱的影响亦将完全消失62黄酮黄酮 、黄酮醇加入诊断试剂后吸收峰（带、黄酮醇加入诊断试剂后吸收峰（带I I、带、带IIII）的位移规律）的位移规律诊断试剂诊断试剂 位移规律位移规律 归归 属属NaOMeNaOMe 带带I I红移红移40-60nm40-60nm，强度不降，强度不降 示有示有4-OH 4-OH 带带I I红移红移50-60nm50-60nm，强度下降，强度下降 示有示有3-OH3-OH、但无、但无4-OH4-OHNaOAcNaOAc 带带IIII红移红移5-20nm 5-20nm 示有示有7-OH7-OH2.2.加入诊断试剂后引起
35、的位移及其在结构测定加入诊断试剂后引起的位移及其在结构测定中的意义中的意义（见下表）（见下表）63 诊断试剂诊断试剂 位移规律位移规律 归归 属属NaOAc/HNaOAc/H3 3BOBO3 3 带带I I红移红移12-30nm 12-30nm 示示B B环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基 带带IIII红移红移5-10nm 5-10nm 示示A A环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基 （不包括（不包括5 5，6-6-邻二酚羟基）邻二酚羟基）AlClAlCl3 3及及 AlClAlCl3 3/HCl/HCl谱图谱图=AlCl=AlCl3 3谱图谱图 示无邻二酚羟基示无邻二酚羟基AlClAlCl3 3/HCl
36、AlCl/HCl AlCl3 3/HCl/HCl谱图谱图AlClAlCl3 3谱图谱图 示有邻二酚羟基示有邻二酚羟基 带带I I紫移紫移30-40 nm 30-40 nm 示示B B环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基 64 诊断试剂诊断试剂 位移规律位移规律 归归 属属 带带I I紫移紫移50-65 nm 50-65 nm 示示A A、B B环均可能有邻二酚羟基环均可能有邻二酚羟基 AlClAlCl3 3/HCl/HCl谱图谱图=MeOH=MeOH谱图谱图 示无示无3-3-及及/或或5-OH5-OH AlCl AlCl3 3/HCl/HCl谱图谱图MeOHMeOH谱图谱图 示可能有示可能有3-3-及
37、及/或或5-OH5-OH 带带I I红移红移35-55 nm 35-55 nm 示只有示只有5-OH5-OH 红移红移60nm 60nm 示只有示只有5-OH5-OH 红移红移50-60nm 50-60nm 示可能有示可能有3-OH3-OH及及5-OH 5-OH 仅红移仅红移17-20 nm 17-20 nm 示除示除5-OH5-OH外，尚有外，尚有6-6-含氧取代含氧取代65异黄酮、二氢黄酮（醇）的吸收峰（带异黄酮、二氢黄酮（醇）的吸收峰（带IIII）位移规律）位移规律 NaOAc 异黄酮异黄酮 带带II红移红移620nm 示有示有7-OH 二氢黄酮（醇）带二氢黄酮（醇）带II红移红移343
38、7nm 示有示有5，7-二二OH 带带II红移红移5158nm 示有示有7-二二OHAlCl3/HCl AlCl3/HCl谱图与甲醇中的谱图比较谱图与甲醇中的谱图比较 异黄酮异黄酮 带带II红移红移1014nm 示有示有5-OH 二氢黄酮（醇）带二氢黄酮（醇）带II红移红移2026nm 示有示有5-OH 诊断试剂诊断试剂 位移规律位移规律 归归 属属66查耳酮、橙酮的吸收峰（带查耳酮、橙酮的吸收峰（带I I）位移规律）位移规律 NaOMe NaOMe 查耳酮查耳酮 带带I I红移红移60-100nm60-100nm，强度增加，强度增加 示有示有4-OH4-OH 带带I I红移红移60-100n
39、m60-100nm，强度不增加，强度不增加 示有示有2-2-或或4 4-OH-OH 橙酮橙酮 带带I I红移红移70-95nm70-95nm，示有或示有或6-OH6-OHAlClAlCl3 3 及及AlClAlCl3 3/HCl /HCl 查耳酮、橙酮查耳酮、橙酮 （AlClAlCl3 3较较 AlClAlCl3 3/HCl/HCl谱图）谱图）带带I I 红移红移4070nm4070nm 示有示有B-B-环邻二酚羟基环邻二酚羟基 查耳酮（查耳酮（AlClAlCl3 3/HCl/HCl谱图较谱图较MeOHMeOH谱图）谱图）带带I I 红移红移4060nm4060nm 示有示有2 2-OH-OH
40、诊断试剂诊断试剂 位移规律位移规律 归归 属属67 二、二、1H-NMR1H-NMR谱在黄酮结构研究中的应用谱在黄酮结构研究中的应用测定溶剂测定溶剂 ：Cl4-Cl4-样品需制备成三甲基硅醚化衍生样品需制备成三甲基硅醚化衍生物，不能显示羟基质子特征，目前已基本不物，不能显示羟基质子特征，目前已基本不被采用。被采用。DMSO-d6-DMSO-d6-样品（苷、苷元）不需制备样品（苷、苷元）不需制备成衍生物，可以显示各酚羟基质子特征。成衍生物，可以显示各酚羟基质子特征。68黄酮类化合物各质子的信号特征（黄酮类化合物各质子的信号特征（、峰形状、峰形状、J、峰面积）、峰面积）A A环质子环质子 B B环
41、质子环质子 C C环质子环质子 糖上质子糖上质子 取代基团质子取代基团质子芳环质子芳环质子 芳环质子芳环质子 与类型有关与类型有关 端基质子端基质子 -OH-OH、-CH3-CH3、其他质子其他质子 -OCH3-OCH3、-OCOCH3-OCOCH3668ppm8ppm，B-HB-H位于较低场位于较低场5-H5-H最大最大8.0ppm8.0ppm（羰基去屏蔽）（羰基去屏蔽）AA-H 5.7-H 5.77.9 5-OH 12.40(12.99)7.9 5-OH 12.40(12.99)BB-H 6.5-H 6.57.9 7-OH 10.937.9 7-OH 10.93 69 J J邻邻 6 69
42、Hz 3-OH 9.709Hz 3-OH 9.70 J J间间 2 23Hz 4-OH(10.01)3Hz 4-OH(10.01)J J对对 0 01Hz1Hz（不计）（不计）3-OH(9.42)3-OH(9.42)峰形状及峰形状及J J与取代有关与取代有关 -OCH-OCH3 33.53.54.10(3H s)4.10(3H s)6 6CHCH3 32.042.042.27(3H s)2.27(3H s)8 8CHCH3 32.142.142.45(3H s)2.45(3H s)-OCOCH3(-OCOCH3(羟基乙酰化羟基乙酰化)A-A-环环 B-B-环环 糖上糖上1.651.652.10
43、(3H s)2.10(3H s)5 5，7-7-二二OH 4-OH 4-氧取代氧取代 苷元苷元2.30-2.50(3H s)2.30-2.50(3H s)7-OH7-OH取代取代 33，4-4-氧取代氧取代 33，44，5-5-氧取代氧取代 依依、峰形（、峰形（d d、dddd）、）、J JA A、B-B-环取代方式推断环取代方式推断70gluglu H-1H-1位于低场位于低场 较大较大4.8-5.70ppm4.8-5.70ppm 苷元苷元-3-O-glu 5.80-3-O-glu 5.80左右（左右（1H.d.1H.d.）J J与构型有关与构型有关JaaJaa=6-9Hz=6-9Hz，Ja
44、eJae=2-3=2-3苷元苷元-5-5、7 7、4-O-glu 5.04-O-glu 5.0左右左右 rha C-CH3 0.8-1.20(d/mrha C-CH3 0.8-1.20(d/m)黄酮黄酮 H-3 6.30H-3 6.30（1H1H，s s）黄酮醇黄酮醇 C-C-环无质子环无质子异黄酮异黄酮 H-2 7.6 7.80H-2 7.6 7.80（1H1H，s s）受）受1-1-氧氧 原子和原子和4-4-羰基吸电影响羰基吸电影响,较大较大71二氢黄酮二氢黄酮 H-2 H-2 中心中心5.2(1H,dd.Jaa=11.0Hz,Jae5.2(1H,dd.Jaa=11.0Hz,Jae=5.0
45、Hz)=5.0Hz)两个两个H-3 H-3 中心中心2.8(1H,dd.J2.8(1H,dd.J偕偕17.0Hz,Jaa=11.0Hz)17.0Hz,Jaa=11.0Hz)(1H,dd.J (1H,dd.J偕偕=17.0Hz,Jae=17.0Hz,Jae=5.0Hz)=5.0Hz)二氢黄酮醇二氢黄酮醇 H-2 4.8-5.0H-2 4.8-5.0（1H1H，d.Jaad.Jaa=11.0Hz=11.0Hz）H-3 4.1-4.3H-3 4.1-4.3（1H1H，d.Jaad.Jaa=11.0Hz=11.0Hz）查耳酮查耳酮 H-a 6.7-7.40(1H,d.JH-a 6.7-7.40(1H,
46、d.J反反=17.0Hz)=17.0Hz)H-7.0-7.70(1H,d.J H-7.0-7.70(1H,d.J反反=17.0Hz)=17.0Hz)橙酮橙酮 =CH 6.5-6.70=CH 6.5-6.70（1H1H，s s）72 黄黄 酮酮 黄黄 酮酮 醇醇 异异 黄黄 酮酮 橙橙 酮酮二二 氢氢 黄黄 酮酮 二二 氢氢 黄黄 酮酮 醇醇 查查 耳耳 酮酮73 B-H 6.57.9ppm,位于较低场位于较低场 26-H 大大(2H,d.8.0Hz)35-H小小(2H,d.8.0Hz)2-H7.20(1H,d.2.0Hz)-H7.20(1H,d.2.0Hz)（1）（2）5-H6.7-H6.7
47、7.1(d.8.0Hz)7.1(d.8.0Hz)（1）A-H 6.3 7.1 ppm（一（一-OH供电）供电）6-H7.9(dd.2.0;8.0Hz)-H7.9(dd.2.0;8.0Hz)5-H 8.0(1H,d.J=8.0Hz)*3、4-OR取代不同，取代不同，6-H(1H,dd,J=8.0;2.0Hz)-2、6可能颠倒可能颠倒 8-H (1H,d,J=2.0Hz)（2）A-H 5.7 6.9 ppm(二二-OH供电供电)26-H 6.57.5(2H,s)6-H 较小较小(1H,d.J=2.5Hz)或分别以双峰（或分别以双峰（J=2.0Hz）8-H 较大较大(1H,d.J=2.5Hz)出现出
48、现取代基团取代基团74三、三、1313C-NMRC-NMR谱在黄酮类化合物结构研究谱在黄酮类化合物结构研究中的应用中的应用 （一）黄酮类化合物骨架类型的判断（一）黄酮类化合物骨架类型的判断 利用利用1313C-NMRC-NMR谱中黄酮类化合物的中央三谱中黄酮类化合物的中央三个碳核信号的位置以及它们在偏共振去偶谱个碳核信号的位置以及它们在偏共振去偶谱中的裂分情况中的裂分情况 推断黄酮类化合物的骨架类型推断黄酮类化合物的骨架类型 751313C-NMRC-NMR谱中黄酮类化合物结构中的中央三碳核的信号特征谱中黄酮类化合物结构中的中央三碳核的信号特征174.5-184.0(s)160.5-163.2
49、(s)104.7-111.8(d)174.5-184.0(s)160.5-163.2(s)104.7-111.8(d)黄酮类黄酮类 149.8-155.4(d)122.3-125.9(s)149.8-155.4(d)122.3-125.9(s)异黄酮类异黄酮类 147.9(s)136.0(s)147.9(s)136.0(s)黄酮醇类黄酮醇类 182.5-182.7(s)146.1-147.7(s)111.6-111.9(d)182.5-182.7(s)146.1-147.7(s)111.6-111.9(d)橙酮类橙酮类 (=CH-)(=CH-)188.0-197.0(s)136.9-145.4
50、(d)116.6-128.1(d)188.0-197.0(s)136.9-145.4(d)116.6-128.1(d)查耳酮类查耳酮类 75.0-80.3(d)42.8-44.6(t)75.0-80.3(d)42.8-44.6(t)二氢黄酮类二氢黄酮类 82.7(d)71.2(d)82.7(d)71.2(d)二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类 C=O C-2 C=O C-2（或（或C-C-）C-3C-3（或（或C-aC-a）归属归属76178.4163.2153.6133.7129.0126.3OO131.8131.6125.2125.7124.0118.1107.6129.0126.3（二）黄酮类化合
