1、第三章第三章 食用菌菌种制作食用菌菌种制作菌种概述菌种概述狭义狭义是指经人工培养，并可是指经人工培养，并可供进一步繁殖或栽培使用的供进一步繁殖或栽培使用的食用菌纯双核菌丝体。食用菌纯双核菌丝体。广义广义以保藏、试验、栽培和其它以保藏、试验、栽培和其它用途为目的，具繁衍能力，遗用途为目的，具繁衍能力，遗传特性相对稳定的孢子、组织传特性相对稳定的孢子、组织或菌丝体及其营养性或非营养或菌丝体及其营养性或非营养性的载体性的载体 一、菌种的概念一、菌种的概念一级种一级种二级种二级种三级种三级种来源、繁殖代数来源、繁殖代数和使用目的和使用目的按按保藏种保藏种实验种实验种生产种生产种使用目的使用目的固体菌种
2、固体菌种液体菌种液体菌种状态状态二、菌种类型二、菌种类型（一）级别不同的菌种（一）级别不同的菌种1.一级种（母种）一级种（母种）用组织分离或孢子分离用组织分离或孢子分离而得到的最初的菌种而得到的最初的菌种概念概念概况概况培养环境培养环境 试管、斜面培养基试管、斜面培养基用途用途 再生母种再生母种扩大原种扩大原种保藏用种保藏用种菌丝弱而少、不可直接栽培菌丝弱而少、不可直接栽培特点特点2.二级种（原种）二级种（原种）将母种扩大至粗放培养基上将母种扩大至粗放培养基上形成的菌种形成的菌种概念概念概况概况培养环境培养环境菌丝较多而壮、适应性较强菌丝较多而壮、适应性较强特点特点用途用途 扩大栽培种扩大栽培
3、种大口瓶、较粗放的大口瓶、较粗放的液体或固体培养基液体或固体培养基3.三级种（栽培种）三级种（栽培种）将原种扩大至粗放培养基上将原种扩大至粗放培养基上形成的菌种形成的菌种概念概念概况概况培养环境培养环境菌丝多而壮、适应性强菌丝多而壮、适应性强特点特点用途用途栽培生产栽培生产菌种袋、较粗放的菌种袋、较粗放的液体或固体培养基液体或固体培养基生产总过程生产总过程母种栽培种栽培原种子实体（二）状态不同的菌种用固体基质培养的菌种1.固体 菌种概念特点设备、工艺简单菌龄长而不一发酵率较低用液体基质培养的菌种2.液体 菌种概念特点设备、工艺较复杂菌龄短而一致发酵率高易老化和自溶三、菌种生产程序三、菌种生产程
4、序四大步骤四大步骤制培养基制培养基灭菌灭菌培养培养接种接种一、制种场地仓库配料室灭菌室接种室培养室办公室栽培棚门口晒料场二、主要生产设备一、制培养基设备二、灭菌设备三、接种设备四、培养设备五、保藏设备一、制培养基设备（一）原料处理设备切片粉碎两用机切片粉碎两用机切片粉碎两用机铡铡草草机机粉粉碎碎机机拌料机拌料机装袋机装袋机（二）培养基分装设备装瓶机装瓶机挖瓶机挖瓶机菌种袋菌种袋颈圈颈圈菌种瓶菌种瓶二、灭菌设备高高压压锅锅外锅：装水外锅：装水内锅：装物（有壁管）内锅：装物（有壁管）锅盖锅盖安全阀安全阀排气阀排气阀压力表压力表常压常压密闭性好密闭性好要要求求1.接接 种种 箱箱用用法法清洁、放物品
5、清洁、放物品 消毒消毒喷雾喷雾熏蒸熏蒸紫外灯紫外灯特特点点简易、利移动简易、利移动对人体低害对人体低害效果好、工效低效果好、工效低 三、接种设备三、接种设备（一）接种环境（一）接种环境观察窗观察窗紫外灯紫外灯 操作孔操作孔接种箱接种箱2.接种室接种室缓冲间：缓冲间：23m2接种间：接种间：56m2面积面积79m2高高2.22.5m要求要求 6个面平滑个面平滑两门错开、平拉式两门错开、平拉式顶装紫外灯顶装紫外灯清洁清洁物品放缓冲间物品放缓冲间消毒消毒 移物至接种间移物至接种间 喷消毒液喷消毒液 10min 后接种后接种消毒液清洁消毒液清洁 使用使用使一定工作区达到相对无菌、无尘状态的电器使一定工
6、作区达到相对无菌、无尘状态的电器3.超净工作台超净工作台双人双人单单人人要求要求:前端为导热性好的金属材料前端为导热性好的金属材料枪匙钩铲镊耙针环接种接种4.接种工具接种工具固固体体菌菌种种接接种种枪枪液体菌种接种枪液体菌种接种枪返回本节四、菌种培养设备四、菌种培养设备1.培养箱培养箱培养少量菌种的恒温电器（培养少量菌种的恒温电器（2040）2.培养室培养室培养大量菌种的恒温房培养大量菌种的恒温房要求要求光线暗光线暗密闭好、通风性强密闭好、通风性强能升温、降温（空调机）能升温、降温（空调机）有培养架有培养架贮贮藏藏室室远离污染源远离污染源低温（低温（48）干燥、通风、遮光干燥、通风、遮光 用前
7、要严格消毒杀虫用前要严格消毒杀虫地面常撒石灰粉地面常撒石灰粉保藏原种、栽培种：保藏原种、栽培种：五、菌种保藏设备五、菌种保藏设备保藏母种：冰箱（保藏母种：冰箱（4）左右）左右基本概念基本概念杀死一切微生物，包括芽孢。杀死一切微生物，包括芽孢。灭菌灭菌分为分为杀菌：菌体尚存杀菌：菌体尚存溶菌：菌体消失溶菌：菌体消失消毒：只杀死病源菌，未伤及芽孢消毒：只杀死病源菌，未伤及芽孢防腐：暂时抑制微生物生长防腐：暂时抑制微生物生长除菌：用冲洗、过滤等机械的方法，除去微生物除菌：用冲洗、过滤等机械的方法，除去微生物第二节母种制作一、母种培养基制作一、母种培养基制作二、菌种分离二、菌种分离三、母种扩繁三、母种
8、扩繁（一）营养液制作（一）营养液制作(PDA(PDA培养基培养基)1.1.准备工作准备工作（1 1）材料）材料 马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、水。水。（2 2）仪器用具及消毒药品）仪器用具及消毒药品 电炉子、铝锅、玻电炉子、铝锅、玻璃棒、漏斗、纱布、止水夹、漏斗架、切菜小刀、切璃棒、漏斗、纱布、止水夹、漏斗架、切菜小刀、切板、板、1000ml1000ml烧杯、捆扎绳、棉花、试管烧杯、捆扎绳、棉花、试管（18mm18mm180mm180mm）、试管架、铁丝筐、）、试管架、铁丝筐、1.5cm1.5cm厚的长木厚的长木条、标签、天平、称量纸、牛角匙、精密条、标签、天
9、平、称量纸、牛角匙、精密pHpH试纸、牛试纸、牛皮纸、皮筋、纱布、恒温培养箱、手提式高压灭菌锅、皮纸、皮筋、纱布、恒温培养箱、手提式高压灭菌锅、超净工作台或接种箱、接种铲、酒精灯、火柴、记号超净工作台或接种箱、接种铲、酒精灯、火柴、记号笔等。消毒药品包括：笔等。消毒药品包括：7575的酒精棉球、的酒精棉球、0.25%0.25%新洁新洁尔灭溶液、烟雾消毒王或菇保一号等。尔灭溶液、烟雾消毒王或菇保一号等。一一 母种培养基制作母种培养基制作 将学生分成几组，分别负责切土豆、称量水、将学生分成几组，分别负责切土豆、称量水、称量药品、处理琼脂等。称量药品、处理琼脂等。2.2.称量、材料预处理称量、材料预
10、处理将切好的马铃薯块加适量水后放将切好的马铃薯块加适量水后放入铝锅或电饭锅中，煮至酥而不烂。入铝锅或电饭锅中，煮至酥而不烂。3.3.熬制熬制4.4.过滤、加可溶药物过滤、加可溶药物用双层纱布过滤，取滤汁，用双层纱布过滤，取滤汁，放在铝锅中加入糖。放在铝锅中加入糖。在沸腾状态下加入琼脂粉，直到琼脂完全在沸腾状态下加入琼脂粉，直到琼脂完全溶化为止，定容至溶化为止，定容至1000ml1000ml。5.5.加琼脂，定容加琼脂，定容（二）营养液分装（二）营养液分装 1.1.用注射器或用带止水夹的漏斗分装用注射器或用带止水夹的漏斗分装 2.2.分装量为试管长度的分装量为试管长度的1/41/41/51/5。
11、注。注意培养基不能沾污试管口。意培养基不能沾污试管口。9 9或或1111支试管捆支试管捆在一起，棉塞上包好在一起，棉塞上包好防水纸，直立放入高防水纸，直立放入高压灭菌锅中。压灭菌锅中。棉塞松紧适度，棉塞松紧适度，1/31/3在管外，在管外，2/32/3在在管内。管内。3.3.塞棉塞塞棉塞4.4.捆扎捆扎A正确 B不正确 在在1.1kg/cm1.1kg/cm3 3压力下维持压力下维持30-40min30-40min。（三）灭菌（三）灭菌灭菌结束后锅盖开灭菌结束后锅盖开1/51/5的小缝，用余热烘干报纸和的小缝，用余热烘干报纸和棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长
12、的1/21/2(四四)摆斜面摆斜面概念：菌种移至新培养基上的过程概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作关键：无菌操作接种接种在严格消毒灭菌条件下进在严格消毒灭菌条件下进行的操作行的操作无菌操作概念无菌操作概念要点要点接种环境消毒灭菌接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手酒精棉球消毒双手开启的管口、瓶口靠近灯焰开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方拔出的棉塞勿触及任何地方动作快，接种时间勿太长动作快，接种时间勿太长二二 菌种分离菌种分离1 1组织分离法（无性繁殖）组织分离法（无性繁殖）灵芝组织分离所取的部位是菌盖边缘的白色生长圈步骤种菇消毒采收孢子接种孢子整菇插种法钩悬法 在无菌条件下
13、，可用在无菌条件下，可用75%的棉球的棉球对种菇进行表面消毒，或用对种菇进行表面消毒，或用0.1%的升汞溶液浸的升汞溶液浸1-2分钟，再用无分钟，再用无菌水冲洗三次，无菌纱布吸干表菌水冲洗三次，无菌纱布吸干表面水分。面水分。1.种菇的消毒种菇的消毒2.采收孢子采收孢子整菇插种法种菇插在孢子收集器中使孢子散落于培养皿内的方法用前灭菌25、24h现孢子粉取出分离材料培养皿盖严钩悬法25、24h现孢子粉现孢子粉取出分离材料取出分离材料3.接种与培养接种与培养1.将接种用品及原始母种放入接种箱内。将接种用品及原始母种放入接种箱内。2.用气雾消毒盒（用气雾消毒盒（4g/m3）进行密闭熏蒸）进行密闭熏蒸3
14、0min以上。以上。3.手、台面、接种工具、母种管用酒精棉球擦试消毒。手、台面、接种工具、母种管用酒精棉球擦试消毒。4.点燃酒精灯，火焰灼烧接种镐至烧红后冷却，凡能伸点燃酒精灯，火焰灼烧接种镐至烧红后冷却，凡能伸进试管的杆部均过火灭菌。进试管的杆部均过火灭菌。(一一)母种转管无菌操作技术要点母种转管无菌操作技术要点6右手小指、无名右手小指、无名指及手掌拔掉棉塞，用火指及手掌拔掉棉塞，用火焰灼烧试管口并不断搅动焰灼烧试管口并不断搅动。5.将母种和空白斜面培将母种和空白斜面培养基用大拇指和其他四指握养基用大拇指和其他四指握在左手中，斜面向上，并使在左手中，斜面向上，并使它们与桌面接近水平，试管它们
15、与桌面接近水平，试管口略向下倾斜。口略向下倾斜。7 7先弃去前端先弃去前端1cm1cm处，然后用接种镐处，然后用接种镐快速移取黄豆粒大小的快速移取黄豆粒大小的菌种入待接试管斜面培菌种入待接试管斜面培养基中央。养基中央。8抽出接种钩，烧灼管口，棉塞燎烤至微焦，在火抽出接种钩，烧灼管口，棉塞燎烤至微焦，在火焰旁塞上棉塞。焰旁塞上棉塞。9用接种镐挑持住母种管，另一只手换待接管，重用接种镐挑持住母种管，另一只手换待接管，重复上述操作。复上述操作。10.收拾台面。收拾台面。11.贴标签贴标签 接种后，于接种后，于22左右的环境避光培养，每天左右的环境避光培养，每天都有要仔细观察，对污染的试管及时挑除。原始都有要仔细观察，对污染的试管及时挑除。原始母种的培养初期一定要天天检查，以免菌丝将污母种的培养初期一定要天天检查，以免菌丝将污染处盖住，难以挑出，造成损失。染处盖住，难以挑出，造成损失。一般一般7-10d左右可以长满管。长满管后，一部左右可以长满管。长满管后，一部分用于扩繁，另一部分用于保存。于分用于扩繁，另一部分用于保存。于+5的水箱冷的水箱冷藏层中至少可以保存藏层中至少可以保存2个月。个月。（二）母种培养（二）母种培养母种的转接母种的转接（三）母种鉴定（三）母种鉴定：洁白，健壮，无虫害，有蘑菇香味洁白，健壮，无虫害，有蘑菇香味
