1、p73p73基因在急性白血病的表基因在急性白血病的表达及临床意义达及临床意义学生：李茜汝学生：李茜汝导师：苏丽萍导师：苏丽萍 教授教授山西省肿瘤医院血液科山西省肿瘤医院血液科 2010.42010.41研究背景研究背景研究目的研究目的2 23实验结果及讨论实验结果及讨论44 结结 论论5研究方法研究方法研究背景研究背景v白血病（白血病（leukemialeukemia）是一类造血干细胞的恶）是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病。目前，白血病的确切病因尚性克隆性疾病。目前，白血病的确切病因尚不明了，但肿瘤的发生均与不明了，但肿瘤的发生均与肿瘤相关基因的肿瘤相关基因的异常表达异常表达密切相关，异常表达
2、的肿瘤相关基密切相关，异常表达的肿瘤相关基因所产生的蛋白质由于不适当地模拟正常蛋因所产生的蛋白质由于不适当地模拟正常蛋白的生长作用方式及细胞生长、分化紊乱，白的生长作用方式及细胞生长、分化紊乱，而导致肿瘤发生。而导致肿瘤发生。如何提高白血病诊断及治如何提高白血病诊断及治疗水平，提高患者生存质量，一直是医生十疗水平，提高患者生存质量，一直是医生十分关注的问题分关注的问题。研究背景研究背景抑癌基因抑癌基因p53p53代谢代谢过程过程细胞细胞增殖增殖DNADNA转录转录细胞细胞生长生长一些肿瘤中，则有一些肿瘤中，则有其它的因素改变阻其它的因素改变阻断断p53p53的功能以促进的功能以促进肿瘤的发生肿
3、瘤的发生p73p73基因基因P53P53抑癌机制抑癌机制 研究背景研究背景 p73 p73基因是基因是19971997年年KaghadKaghad等在筛选介导胰岛素信号传递因子等在筛选介导胰岛素信号传递因子(IRS21)(IRS21)时偶然发现的，定位于人类时偶然发现的，定位于人类1 1号染色体号染色体1p36.331p36.33。测。测序发现其序发现其序列序列与与p53p53基因有高度同源性。基因有高度同源性。1p36 1p36是多种人类肿瘤基因缺失热点区域，且认为该区存在是多种人类肿瘤基因缺失热点区域，且认为该区存在多个抑癌基因。由于其特殊定位及其与多个抑癌基因。由于其特殊定位及其与p53
4、p53基因结构和功能基因结构和功能的高度同源性，的高度同源性，p73p73基因被认为基因被认为可能是抑癌基因可能是抑癌基因。但有学者提出但有学者提出p73p73基因在肝癌、结肠癌、膀胱癌组织中表达基因在肝癌、结肠癌、膀胱癌组织中表达明显增高，其表达水平与肿瘤恶性程度明显相关。而且明显增高，其表达水平与肿瘤恶性程度明显相关。而且p73p73基因在不同肿瘤中表达水平差异很大，显示了基因在不同肿瘤中表达水平差异很大，显示了抑癌基因抑癌基因和和癌基因癌基因的的。研究背景研究背景-p73的作用机制的作用机制p73基因由于高基因由于高甲基化而表达缺甲基化而表达缺失。可能是高甲失。可能是高甲基化改变了基因基
5、化改变了基因构型，影响构型，影响DNA特异序列与转录特异序列与转录因子结合，使基因子结合，使基因不能转录。因不能转录。低水平或低水平或失表达失表达过度过度表达表达癌基因癌基因作用作用抑癌基抑癌基因作用因作用c2Abl 酪氨酸酪氨酸激酶可使激酶可使P73 蛋白的半衰期蛋白的半衰期延长或蛋白磷延长或蛋白磷酸化导致酸化导致P73 蛋白过表达。蛋白过表达。发挥对细胞生发挥对细胞生长的抑制和凋长的抑制和凋亡作用。亡作用。p73基因的缺基因的缺失：失：p73基因基因存在杂合性缺存在杂合性缺失（失（LOH）。）。研究背景研究背景-相关肿瘤研究相关肿瘤研究软组织软组织肉瘤肉瘤血液系统血液系统恶性肿瘤恶性肿瘤乳
6、腺癌乳腺癌宫颈癌宫颈癌膀胱癌膀胱癌肺癌肺癌前列前列腺癌腺癌 在恶性肿瘤中，在恶性肿瘤中，p73基因在不同基因在不同类型细胞的肿瘤类型细胞的肿瘤中有不同的生物中有不同的生物学行为学行为，研究目的研究目的检测成人检测成人急性白血病（急性白血病（ALAL）患者）患者p73p73基因基因mRNAmRNA的表达的表达情况情况,从而探讨从而探讨p73p73基因与白基因与白血病发病、复发及预后的关系，为成人血病发病、复发及预后的关系，为成人ALAL的临床治疗提供更有意义的指导作用。的临床治疗提供更有意义的指导作用。研究方法及实验技术研究方法及实验技术 选取选取20082008年年6 6月月-2009-200
7、9年年3 3月期间在山西医科大学第二月期间在山西医科大学第二医院及山西省肿瘤医院血液科住院的初治及复发或难医院及山西省肿瘤医院血液科住院的初治及复发或难治急性白血病患者治急性白血病患者100100例，经临床及骨髓涂片细胞形例，经临床及骨髓涂片细胞形态学、细胞化学检查，按张之南主编态学、细胞化学检查，按张之南主编血液病诊断及血液病诊断及疗效标准疗效标准确诊。确诊。包括初发未治包括初发未治6464例，复发或难治例，复发或难治3636例，按例，按FABFAB分型，分型，急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病(AML)80(AML)80例例(M2,12(M2,12例；例；M3,35M3,35例；例；M4,1
8、8M4,18例；例；M5,9M5,9例；例；M6,6M6,6例例)，急性淋巴细胞白血，急性淋巴细胞白血病病(ALL)20(ALL)20例。其中男例。其中男6060例，女例，女4040例，中位年龄例，中位年龄4040岁岁(9(96565岁岁)。对照组为。对照组为2020例非白血病例非白血病(NL)(NL)且骨髓象正且骨髓象正常者。常者。研究方法及实验技研究方法及实验技术术AMLAML疗效标准疗效标准研究方法及实验技术研究方法及实验技术琼脂糖凝胶电琼脂糖凝胶电泳泳计算计算p73 mRNA在在AL细胞及不同细细胞及不同细胞类型中表达的阳性率及强度，胞类型中表达的阳性率及强度，结结合临床分型、治疗合临
9、床分型、治疗效果及预后进行统计学分析效果及预后进行统计学分析确诊确诊AL患者患者100例例及正常对照者及正常对照者20例骨髓标本例骨髓标本2ml随机引物逆转录合成随机引物逆转录合成cDNA；AMV逆转录酶系合成逆转录酶系合成TRizol一步法一步法提取总提取总RNART反转录反转录研究方法及实验技术研究方法及实验技术 采用采用SPSS13.0SPSS13.0统计软件统计软件对对结果进行统计学分结果进行统计学分析析。对对p73 mRNAp73 mRNA在在ALAL细胞及不同细胞类型中表达细胞及不同细胞类型中表达的的阳性病例组与正常对照组阈值进行阳性病例组与正常对照组阈值进行t t检验，检验，不同
10、类型不同类型ALAL阳性率比较进行阳性率比较进行X X2 2检验检验，阳性表，阳性表达达强度强度进行进行单因素方差分析单因素方差分析。P0.05 P0.05时说明差异具有统计学意义。时说明差异具有统计学意义。实验结果及讨论实验结果及讨论 M 1 2 3 4 5 6 M注：M（marker）；1（阴性对照）；26（AL中p73 mRNA的表达）；p73扩增产物长度为390bp图3 RT-PCR检测p73 mRNA表达实验结果及讨论实验结果及讨论 表表2 不同类型不同类型AL及对照组细胞中及对照组细胞中p73 mRNA的表达的表达组别组别总例数总例数阳性例数阳性例数p73表达阳性率表达阳性率(%)
11、p73/-actinAL1004949.00.630.65ALL20420.00.420.12AML804556.31.220.93M212650.00.460.22M3351851.40.730.46M4181055.60.530.44M59777.81.441.13M66466.70.620.48NL20420.00.430.26一般预后一般预后562239.31.190.52不良预后不良预后282071.41.820.48实验结果及讨论实验结果及讨论 0 00.50.51 11.51.52 22.52.53 3ALALALLALLANLLANLLM2M2M3M3M4M4M5M5M6M6N
12、LNL一般预后一般预后 不良预后不良预后图图4 p734 p73基因蛋白基因蛋白在在不同类型不同类型ALAL及对照组细胞中及对照组细胞中表达表达的强度比较结果的强度比较结果 实验结果及讨论实验结果及讨论 AML细胞p73 mRNA表达阳性率56.3%ALL细胞p73 mRNA表达阳性率20.0%1 1.p73 p73基因的失表基因的失表达在达在ALLALL中是高频率中是高频率发生事件，在其形发生事件，在其形成中起着抑癌基因成中起着抑癌基因作用。作用。在在AMLAML中，中，p73p73基基因表现为过度表达，因表现为过度表达，起着癌基因样作用。起着癌基因样作用。实验结果及讨论实验结果及讨论 2.
13、2.分别比较分别比较ALLALL及及AMLAML患者一般预后组与患者一般预后组与不良预后组不良预后组p73 mRNAp73 mRNA表达率表达率及强度及强度的差的差异，均具有统计学意义异，均具有统计学意义(P0.05P0.05)。这说明了这说明了p73p73基因是基因是ALAL中一个新的生中一个新的生物学预后因子物学预后因子这也证实了尽管这也证实了尽管ALL组与组与AML组患者初诊组患者初诊时及治疗后时及治疗后p73基因的表达情况不同，但基因的表达情况不同，但都与其预后有密切关系都与其预后有密切关系结结 论论p73p73基因在不同类型白血病发病及预后中起的作用基因在不同类型白血病发病及预后中起
14、的作用不同：不同：p73p73基因在基因在ALLALL患者初诊时有较高的阴性表患者初诊时有较高的阴性表达率，并在病情缓解后转为阳性表达，起着抑癌达率，并在病情缓解后转为阳性表达，起着抑癌基因样作用；与之基因样作用；与之相反相反，在，在AMLAML患者患者中中p73p73基因高基因高水平表达，且其表达水平随水平表达，且其表达水平随病情病情的缓解而降低，的缓解而降低，表现为癌基因样作用。表现为癌基因样作用。结结 论论p73p73基因的表达基因的表达在急性白血病的发病中均起着在急性白血病的发病中均起着重要作用，且多与较差的预后特征、对化疗重要作用，且多与较差的预后特征、对化疗反应差、早期治疗失败、较
15、短的生存期有关。反应差、早期治疗失败、较短的生存期有关。通过通过动态动态检测检测ALAL患者患者p73p73基因的表达情况，从基因的表达情况，从而尽早决定是否需要使用更有效的治疗手段而尽早决定是否需要使用更有效的治疗手段(如骨髓移植如骨髓移植BMT)BMT)或针对或针对p73p73基因进行基因治基因进行基因治疗，有希望提高急性白血病的治愈率。疗，有希望提高急性白血病的治愈率。1李陕区,崔大祥,刘变英等.结肠癌中P73基因改变的意义J.第四军医大学学报,2000;21:314-316.2 Liu M,Taketani T,Li R,et al.Loss of p73 gene expressio
16、n in lymphoid leukemia cell lines is associated with hypermethylationJ.Leuk Res,2001,25(6):443.3 Roman Gomez J,Jimenez-Velasco A,Castillejo JA,et al.Promoter hypermethylation of Related genes:a strong independent prognostic factor in acute lymphoblastic leukemiaJ.Blood,2004,104(8):2492-2498.4 Bell H
17、S,Dufes C,OPrey J,et al.A p53-derived apoptotic peptide derepresses p73 to cause tumor regression in vivo.J.J Clin Invest,2007,117(4):1008-1018.5 Chi SG,Chang SG,Lee SJ,et al.Elevated and biallelic expression of p73 is associated with progression of human bladder cancerJ.Cancer Res,1999;59:2791-2793
18、.6 Mendrysa,S.M.,K.A.OLeary,M.K.McElwee,et al.Tumor suppression and normal aging in mice with constitutively high p53 activityJ.Genes Dev.2006.20:16-21.7何勇,童玲,范士志,等.p73基因与人类肿瘤的研究进展J.肿瘤防治杂志,2005,12(7):551-554.参考文献参考文献8刘明利,李蓉生,林泰秀,等.儿童急性淋巴细胞白血病患者p73基因表达的研究J.中华血液学杂志,2000,23(5):242.9殷小成,曹励之.p73基因失活在儿童急性
19、淋巴细胞白血病发病和预后的意义J.实用癌症杂志,2003,18(3):240-244.10 Mingli liu.Taketani Loss of p73 gene exp ression in lymphoid leukemia cell lines is associated with hypermethylationJ.Leukemia Research,2000,25(6):441-447.11殷小成,曹励之.p73mRNA在急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义J.中华儿科杂志,2004,42(7):529.12 Corn PG,Kuerbiitz SI,Van NoeselMM,et al.Transcriptioral silencing of yhe p73 gene in acute lymphoblastic leukemia and Burkitts lymphoma is associated with 5CpG island methylationJ.Cancer Res,1999,59(14):3352-3356.13张之南,主编.血液病诊断及疗效标准M.第三版 北京:科学出版社,1998,214-218.参考文献参考文献
