1、1延边大学医学院细胞生物学与医学遗传学教研室张子波12教教 材：医学细胞生物学材：医学细胞生物学 主主 编：杨康鹃编：杨康鹃 郑立红郑立红出版出版 社：人民军医出版社社：人民军医出版社 23参考书：参考书：1.1.医学细胞生物学医学细胞生物学 主主 编：胡以平编：胡以平 出版社：高等教育出版社，出版社：高等教育出版社，200920092.2.医学细胞与分子学基础医学细胞与分子学基础 主主 编：陈仁彪编：陈仁彪 出版社：上海科学出版社，出版社：上海科学出版社，200320033第1章 绪 论45细胞生物学细胞生物学(cell biology)：从细胞水平（整体、亚微结构、分子）探讨生命活动从细胞
2、水平（整体、亚微结构、分子）探讨生命活动规律的科学。规律的科学。第一节第一节 细胞生物学研究内容、细胞生物学研究内容、发展及其分科发展及其分科医学细胞生物学医学细胞生物学(medical cell biology)：运用细胞生物学的理论和方法，研究运用细胞生物学的理论和方法，研究人体人体的细胞的形的细胞的形态结构和功能等生命活动规律和人类疾病发生、发展及其态结构和功能等生命活动规律和人类疾病发生、发展及其防治的科学。防治的科学。56对象：对象：细胞细胞（cell，生命活动的基本单位），生命活动的基本单位）构成生物有机体构成生物有机体代谢与功能代谢与功能生物有机体生长发育生物有机体生长发育遗传（
3、遗传全能性）遗传（遗传全能性）细胞是细胞是基本单位基本单位一、细胞生物学研究的内容一、细胞生物学研究的内容6研究水平：研究水平：细胞整体、亚微结构、分子水平细胞整体、亚微结构、分子水平利用光镜描述细胞的结构利用光镜描述细胞的结构利用电镜或扫描探针探清利用电镜或扫描探针探清细胞的亚微或分子结构细胞的亚微或分子结构 形态方面形态方面研究任务：研究任务：78 8化学组成化学组成新陈代谢规律新陈代谢规律相互关系和相互作用相互关系和相互作用生命活动的基本规律生命活动的基本规律人类疾病产生机制人类疾病产生机制防治疾病的方法和技术防治疾病的方法和技术功能方面891.1.组织工程：组织工程：又称又称“再生医学
4、再生医学”，指利用生物活性物，指利用生物活性物 质，通过体外培养或构建的方法，再造质，通过体外培养或构建的方法，再造 或修复器官及组织的技术。或修复器官及组织的技术。可再造：骨、软骨、皮肤、肾、肝、消化道、角膜、可再造：骨、软骨、皮肤、肾、肝、消化道、角膜、肌肉、乳腺肌肉、乳腺2.2.干细胞干细胞(stem cell)(stem cell)：是来源于胚胎、胎儿或成体内是来源于胚胎、胎儿或成体内 具有在一定条件下无限制自我更新与增殖分化能力的具有在一定条件下无限制自我更新与增殖分化能力的 一类细胞，能够产生表现型与基因型和自己完全相同一类细胞，能够产生表现型与基因型和自己完全相同 的子细胞，也能
5、产生组成机体组织、器官的已特化的的子细胞，也能产生组成机体组织、器官的已特化的 细胞，同时还能分化为祖细胞。细胞，同时还能分化为祖细胞。93.3.治疗性复制人类胚胎（治疗性人类克隆胚胎）：治疗性复制人类胚胎（治疗性人类克隆胚胎）：利用成年人的皮肤细胞制造胚胎材料，移植入利用成年人的皮肤细胞制造胚胎材料，移植入 人体，代替人体的损坏或患病部分。人体，代替人体的损坏或患病部分。治疗：糖尿病、帕金森病、阿尔茨海默病治疗：糖尿病、帕金森病、阿尔茨海默病(老年痴呆症）老年痴呆症）20042004年年8 8月月1111日英国人类受精和胚胎技术管理局给英国纽日英国人类受精和胚胎技术管理局给英国纽卡斯尔大学的
6、研究人员发放了卡斯尔大学的研究人员发放了“治疗性复制人类胚胎治疗性复制人类胚胎”的执照的执照成为欧洲首家允许治疗性复制人类胚胎的国成为欧洲首家允许治疗性复制人类胚胎的国家。家。4.4.生物制药与医用生物学产品：生物制药与医用生物学产品：应用生物体活细胞应用生物体活细胞 产生从简单分子到复杂蛋白质等一系列生物制产生从简单分子到复杂蛋白质等一系列生物制 药与医用生物学产品。药与医用生物学产品。例如：干扰素、白介素、胰岛素等例如：干扰素、白介素、胰岛素等1011二、细胞生物学的发展历史(一一)细胞的发现和细胞学说的创立细胞的发现和细胞学说的创立(四四)分子生物学的发展分子生物学的发展(二二)经典细胞
7、学的发展经典细胞学的发展(三三)实验细胞学的发展实验细胞学的发展1112细胞学说细胞学说细胞学说（cell theory）：细胞是一切生物体构造和功能上的基本单位，整个机体是由细胞和细胞的产物所组成。12131314 Watson J D Crick FHC DNA双螺旋结构双螺旋结构A-TG-CC-GA-TT-AC-G141515163 5 Phe苯丙苯丙Leu亮亮Iso异亮异亮起始密码起始密码甲硫氨酸甲硫氨酸Val缬缬Ser丝丝Pro脯脯cThr苏苏Ala丙丙Arg精精Tyr酪酪His组组Glu谷氨谷氨酰氨酰氨终止密码终止密码终止密码终止密码Try色色Cys半光半光Ser丝丝Arg精精As
8、p天冬天冬酰氨酰氨Lys赖赖Asp天冬天冬氨酸氨酸Glu谷谷Gly甘甘 密码子的中英文缩写对照表密码子的中英文缩写对照表16171718基因突变的表型效应镰状细胞性贫血（AR）产生机制：珠蛋白基因第一外显子第6密码子突变异常血红蛋白分子（HbS）GAG GTG 谷氨酸 缬氨酸正常血红蛋白分子（HbA）1819基因诊断：PCR-RFLP诊断镰状细胞贫血父 母患儿 正常儿 胎儿13kb7.6kb5.4kb基因型 HbAHbS HbSHbS HbAHbA?HbSHbS19202021线粒体线粒体乳腺细胞核乳腺细胞核未受精卵细胞未受精卵细胞去核去核卵细胞卵细胞细胞融合细胞融合培养培养妊娠妊娠148天天
9、2122三、细胞生物学的主要分支学科三、细胞生物学的主要分支学科 细胞形态学（形态和功能）细胞形态学（形态和功能）细胞化学细胞化学（化学成分定位、分布及生理功能）化学成分定位、分布及生理功能）细胞生理学（生命活动规律）细胞生理学（生命活动规律）细胞遗传学（染色体的结构功能）细胞遗传学（染色体的结构功能）分子细胞学（基因组的结构和功能）分子细胞学（基因组的结构和功能）细胞社会学（细胞识别、通讯及相互作用）细胞社会学（细胞识别、通讯及相互作用）2223一、细胞形态结构研究技术一、细胞形态结构研究技术 （一）细胞显微结构研究的技术与方法（一）细胞显微结构研究的技术与方法第二节第二节 细胞生物学研究方
10、法概述细胞生物学研究方法概述光学放大系统光学放大系统照明系统照明系统机械和支架系统机械和支架系统显微结构显微结构2324尼康E-600显微镜1.1.复式显微镜复式显微镜 ：单筒目镜、双瞳目镜单筒目镜、双瞳目镜 最常用最常用242.2.暗视野显微镜：暗视野显微镜：利用被检物所反射利用被检物所反射或衍射的光线来观察标或衍射的光线来观察标本本 观察细菌、原生动观察细菌、原生动物或提纯的细胞器等颗物或提纯的细胞器等颗粒物质。粒物质。2526 细胞中有些物质，如叶细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧虽
11、不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具进行定性和定量研究的工具之一。之一。3.3.荧光显微镜荧光显微镜尼康E800荧光DIC显微镜 2627线粒体干细胞皮肤微管274.4.相差显微镜：相差显微镜：利用光线通过不利用光线通过不同物质所形成的反差同物质所形成的反差来观察标本来观察标本观察活细胞的细微结观察活细胞的细微结构和变化。构和变化。28链球菌形态链球菌形态2930莱卡倒置显微镜 组成和普通显微镜一组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系样，只
12、不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。具有相差物镜。5.5.倒置显微镜倒置显微镜30316.6.共聚焦显微镜共聚焦显微镜 无法用眼睛直无法用眼睛直接观察，只能用探接观察，只能用探测器收集每个像素测器收集每个像素点的信号，再通过点的信号，再通过软件重构图像。软件重构图像。分辨率比普通显分辨率比普通显微镜有少量提高。微镜有少量提高。313232 电子显微镜与光学显微镜的成像原理基本一样，电子显微镜与光学显微镜的成像原理基本一样，所不同的是前者用电子束作光源，用电磁场作透镜。另
13、所不同的是前者用电子束作光源，用电磁场作透镜。另外，由于电子束的穿透力很弱，因此用于电镜的标本须外，由于电子束的穿透力很弱，因此用于电镜的标本须制成厚度约制成厚度约50nm50nm左右的超薄切片。这种切片需要用超左右的超薄切片。这种切片需要用超薄切片机制作。电子显微镜的放大倍数最高可达近百万薄切片机制作。电子显微镜的放大倍数最高可达近百万倍，由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、倍，由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等记录系统、电源系统等5 5部分构成。部分构成。（二）细胞超微结构研究的技术与方法（二）细胞超微结构研究的技术与方法常用电子显微镜和常用电子显微镜
14、和X X射线衍射仪。射线衍射仪。3233JEM-1011透射电子显微镜 在光学显微镜下无法看清在光学显微镜下无法看清小于小于0.20.2m m的细微结构，这些结的细微结构，这些结构称为亚显微结构或超微结构。构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构，就必须选要想看清这些结构，就必须选择波长更短的光源，以提高显择波长更短的光源，以提高显微镜的分辨率。微镜的分辨率。19321932年年RuskaRuska发发明了以电子束为光源的透射电明了以电子束为光源的透射电子显微镜，电子束的波长要比子显微镜，电子束的波长要比可见光和紫外光短得多，并且可见光和紫外光短得多，并且电子束的波长与发射电子束的电子束的
15、波长与发射电子束的电压平方根成反比，也就是说电压平方根成反比，也就是说电压越高波长越短。目前电压越高波长越短。目前TEMTEM的的分辨力可达分辨力可达0.2nm0.2nm。1.1.透射电子显微镜透射电子显微镜33内质网透射电镜图内质网透射电镜图343535 于于2020世纪世纪6060年代问世，用来观察标本的表面结构。年代问世，用来观察标本的表面结构。其工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表其工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有面激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有关，也就是说与样品的表面结构有关，次级电子由探测关，也
16、就是说与样品的表面结构有关，次级电子由探测体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。度，显示出与电子束同步的扫描图像。图像为立体形象，图像为立体形象，反映了标本的表面结构。反映了标本的表面结构。为了使标本表面发射出次级电为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。重金属在电子束的轰击下发出次级电子
17、信号。2.2.扫描电子显微镜扫描电子显微镜（scanning electron microscopescanning electron microscope，SEMSEM）3536JEOL扫描电子显微镜36人类血细胞人类血细胞SEM照片照片37（1 1）组织分离法）组织分离法（2 2）细胞培养法）细胞培养法（3 3）超薄切片法）超薄切片法（4 4）悬滴）悬滴-复染法与喷镀法复染法与喷镀法（5 5）冷冻蚀刻复型法）冷冻蚀刻复型法（6 6）放射性核素电竞自显影技术）放射性核素电竞自显影技术3.3.电镜样品的制备电镜样品的制备38二、细胞培养及相关技术二、细胞培养及相关技术（一）体外细胞培养技术（一
18、）体外细胞培养技术（二）细胞融合技术（二）细胞融合技术（三）细胞显微操作技术（三）细胞显微操作技术3940三、细胞及亚细胞组分的分离和纯化技术三、细胞及亚细胞组分的分离和纯化技术 （一）细胞化学免疫荧光技术（一）细胞化学免疫荧光技术细胞化学细胞化学:在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质可在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质可与细胞内某些成分发生化学反应，在局部形成有色沉与细胞内某些成分发生化学反应，在局部形成有色沉淀物的原理，以示待查物质存在于细胞中的部位。淀物的原理，以示待查物质存在于细胞中的部位。例如：例如：FeulgenFeulgen法法显示显示DNADNA404141免疫细胞化
19、学（免疫细胞化学（immunocytochemistryimmunocytochemistry）:根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。对抗原进行定位测定的技术。抗原：大分子或与大分子相结合的小分子。抗原：大分子或与大分子相结合的小分子。抗体：由浆细胞针对特定的抗原分泌的抗体：由浆细胞针对特定的抗原分泌的球蛋白。球蛋白。如果将抗体结合上标记物，再与组织中的抗原发生如果将抗体结合上标记物，再与组织中的抗原发生反应，即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中反应，即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中的部位。的部位。4
20、14242（二）细胞显微分光光度测定技术（二）细胞显微分光光度测定技术 根据细胞内某些物质对光谱吸收的原理，用以测根据细胞内某些物质对光谱吸收的原理，用以测定这些物质如核酸和蛋白质等生物大分子在细胞内的含定这些物质如核酸和蛋白质等生物大分子在细胞内的含量。量。吸收光谱的波长：吸收光谱的波长：230 230 700nm 700nmFeulgenFeulgen染色后的染色后的DNADNA吸收的波长：吸收的波长：546nm546nm细胞显微分光光度测定技术：定位和定量细胞显微分光光度测定技术：定位和定量424343（三）流式细胞计量术（三）流式细胞计量术（FCM）用氩离子激光发出的激光束为激发光，通
21、过调节用氩离子激光发出的激光束为激发光，通过调节液压，迫使悬浮的细胞排成单列，按重力方向流动，液压，迫使悬浮的细胞排成单列，按重力方向流动，当细胞通过激光束检测区时，细胞被激光束照射而向当细胞通过激光束检测区时，细胞被激光束照射而向各个方向发出散射光，若经荧光染色的细胞，就会发各个方向发出散射光，若经荧光染色的细胞，就会发出一定强度的荧光，仪器的检测系统，就可逐个对细出一定强度的荧光，仪器的检测系统，就可逐个对细胞的散射光和荧光强度进行测定，并将光信号转变成胞的散射光和荧光强度进行测定，并将光信号转变成电信号，由电子控制台放大和显示。电信号，由电子控制台放大和显示。4344测量速度：5 000
22、个细胞/s 8个相关参数分选出细胞纯度：9099%检测的参数：细胞大小、体积、DNA、RNA、总蛋白含量、表面抗原、受体、染色体等应用：细胞动力学、免疫学、体细胞学、肿瘤的诊断和治疗等。流式细胞仪特点流式细胞仪特点4445454646474748（四）放射自显影术（四）放射自显影术（五）细胞器的分离与提纯技术（五）细胞器的分离与提纯技术484949四、细胞分子生物学技术四、细胞分子生物学技术（一）细胞原位分子杂交技术（一）细胞原位分子杂交技术分子杂交的基本原理：碱基的互补配对分子杂交的基本原理：碱基的互补配对原位杂交（原位杂交（in situ hybridizationin situ hybr
23、idization）：）：将细胞或组织切片固定在载玻片上，保持细胞中的将细胞或组织切片固定在载玻片上，保持细胞中的 DNADNA和和RNARNA在原位置条件下，与标记的在原位置条件下，与标记的 DNA DNA或或RNARNA分子探针分子探针进行原位杂交，通过放射性自显影或显微镜可探测到待进行原位杂交，通过放射性自显影或显微镜可探测到待查材料中被杂交的分子。直接进行基因定位、定量分析。查材料中被杂交的分子。直接进行基因定位、定量分析。4950原位杂交的特点原位杂交的特点:杂交在显微镜载玻片上中期染色体杂交在显微镜载玻片上中期染色体标本上进行。所谓原位即指标本上标本上进行。所谓原位即指标本上DNA
24、DNA原位变性，在原位变性，在利用放射性或非放射性标记的已知核酸探针杂交后，利用放射性或非放射性标记的已知核酸探针杂交后，通过放射自显影或非放射性检测体系来检测染色体通过放射自显影或非放射性检测体系来检测染色体上特异上特异DNADNA或或RNARNA顺序，可用放射性颗粒在某条染色顺序，可用放射性颗粒在某条染色体的区带出现的最高频率或荧光的强弱来确定探针体的区带出现的最高频率或荧光的强弱来确定探针的位置，从而进行准确的基因定位。的位置，从而进行准确的基因定位。原位杂交必须在已知探针的情况下方可进行，而在原位杂交必须在已知探针的情况下方可进行，而在未知致病基因时，则无法进行基因定位。未知致病基因时
25、，则无法进行基因定位。5051荧光原位杂交荧光原位杂交（florescence in situ hybridization,FISHflorescence in situ hybridization,FISH）是一种非放射性原位杂交方法。用特殊荧光素是一种非放射性原位杂交方法。用特殊荧光素标记核酸（标记核酸（DNADNA）探针，可在染色体、细胞和组织）探针，可在染色体、细胞和组织切片标本上进行切片标本上进行DNADNA杂交，对检测细胞内杂交，对检测细胞内DNADNA或或RNARNA的特定序列存在与否最为有效。探针不是放射性的特定序列存在与否最为有效。探针不是放射性的而是将荧光染料与抗体蛋白结合
26、进行检测。它的而是将荧光染料与抗体蛋白结合进行检测。它们具有高度亲和力，有与放射性探针相同或更高们具有高度亲和力，有与放射性探针相同或更高的分辩率。的分辩率。515252固定生物样本并准备显微镜涂片固定生物样本并准备显微镜涂片预先调节显微镜预先调节显微镜标记探针标记探针对目标对目标DNADNA进行变性进行变性进行原位杂交和杂交后洗涤进行原位杂交和杂交后洗涤免疫细胞化学染色免疫细胞化学染色显微镜观察显微镜观察荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISHFISH）实验程序）实验程序（是一种多步骤的实验方法）（是一种多步骤的实验方法）5253现已可用不同的荧光染料同时进行多重原位杂现已可用不同的荧光染料同时
27、进行多重原位杂交，显示出不同的荧光色泽。这种多色交，显示出不同的荧光色泽。这种多色FISHFISH技技术近年来发展迅速，已成为基因定位作图和医术近年来发展迅速，已成为基因定位作图和医学诊断的重要手段。学诊断的重要手段。19921992年运用这种策略已能在中期染色体和间期年运用这种策略已能在中期染色体和间期细胞同时检测细胞同时检测7 7个探针。科学家们的目标是实个探针。科学家们的目标是实现现2424种不同颜色来观察种不同颜色来观察2222条常染色体和条常染色体和X X、Y Y染染色体。色体。5354912t(9q/12q)t(9p/12p)利用FISH技术检测染色体易位54555556DNADN
28、A探针技术探针技术1.1.是以已知是以已知DNADNA片段作为探针与待测样品片段作为探针与待测样品DNADNA或其片段或其片段进行核酸分子杂交，判断二者同源性程度。进行核酸分子杂交，判断二者同源性程度。2.2.根据杂交结果就可以分析待测根据杂交结果就可以分析待测DNADNA中有无该基因或该中有无该基因或该基因是否发生了变化，从而作出诊断。基因是否发生了变化，从而作出诊断。3.DNA3.DNA探针（基因探针）是一段与目的基因相互补的核探针（基因探针）是一段与目的基因相互补的核酸序列（酸序列（DNADNA或或RNARNA），其长度不一，可为完整基因），其长度不一，可为完整基因亦可为其一部分。亦可为
29、其一部分。4.4.探针：单链，带有容易被追踪和检测出来的标记。探针：单链，带有容易被追踪和检测出来的标记。5.5.寡核苷酸探针：单碱基改变的检测。寡核苷酸探针：单碱基改变的检测。5657目前可孕前诊断的单基因病目前可孕前诊断的单基因病 Prader-Willi Prader-Willi综合征综合征(PWS)(PWS)、性畸形、性畸形(SRY(SRY基因诊基因诊断断)、X X染色体连锁鱼鳞病、染色体连锁鱼鳞病、DuchenneDuchenne肌营养不良肌营养不良（DMDDMD）、脆性）、脆性X X染色体综合症、染色体综合症、地中海贫血、地中海贫血、地中海贫血、脊髓性肌萎缩、肯尼迪氏综合征及雄地中
30、海贫血、脊髓性肌萎缩、肯尼迪氏综合征及雄激素受体基因异常所致疾病、激素受体基因异常所致疾病、型粘多糖贮积症、型粘多糖贮积症、MarfanMarfan综合征、血友病、视网膜母细胞瘤、无精子综合征、血友病、视网膜母细胞瘤、无精子症相关基因缺失诊断、成骨发育不全、症相关基因缺失诊断、成骨发育不全、HuntingtonHuntington舞蹈症、舞蹈症、KallmannKallmann综合征、遗传性视神经萎缩、软综合征、遗传性视神经萎缩、软骨发育不全、苯丙酮尿症、骨发育不全、苯丙酮尿症、WilsonWilson氏病、结节性硬氏病、结节性硬化症等。化症等。5758聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCR）：）
31、：利用耐热的利用耐热的DNA聚合酶聚合酶,以一对与模板以一对与模板DNA互补的寡互补的寡核苷酸为引物，在体外模拟体内的核苷酸为引物，在体外模拟体内的DNA复制过程，即进复制过程，即进行变性、退火和延伸三个阶段（循环行变性、退火和延伸三个阶段（循环30次），使目的次），使目的DNA扩增到约扩增到约106个拷贝，既个拷贝，既100百万倍。百万倍。优点：优点：快速、简便、准确、可靠、经济、特异性强等。快速、简便、准确、可靠、经济、特异性强等。扩增倍数扩增倍数=2n（n：扩增周期）：扩增周期）PCR模板模板DNA取材：取材：细胞、发根、精斑、血斑、已制细胞、发根、精斑、血斑、已制备成的标本、木乃伊备成
32、的标本、木乃伊（二）聚合酶链反应技术（二）聚合酶链反应技术585959引物：能与模板引物：能与模板DNADNA两条链上的各一段序列互补的寡核苷两条链上的各一段序列互补的寡核苷酸（酸（151520bp20bp）上游序列：上游序列：5TTTGGAGGCAAGCAAGCA G 3 5TTTGGAGGCAAGCAAGCA G 3PGC-1PGC-1基因引物序列：基因引物序列：扩增的扩增的DNADNA片段长度：片段长度：508bp508bp5TATTTAGGGTTTTGCCAAGG 3 5TATTTAGGGTTTTGCCAAGG 3 下游序列：下游序列：5960500bpMarker PCR产物产物50
33、8bp2%琼脂糖电泳检测琼脂糖电泳检测PGC-1基因基因PCR扩增产物扩增产物Marker：标准分子量：标准分子量6061（三）反义技术与（三）反义技术与RNA干涉技术干涉技术反义核酸：反义核酸：与有功能的与有功能的RNA（主要是（主要是mRNA）互补结合，并干）互补结合，并干扰其功能的扰其功能的RNA或或DNA。反义技术：反义技术：利用反义核酸影响相对应的利用反义核酸影响相对应的mRNA的转录、翻译，的转录、翻译，改变细胞的生物学功能的技术。改变细胞的生物学功能的技术。反义技术的应用：反义技术的应用：基因功能研究；病毒基因组功能的基因功能研究；病毒基因组功能的研究；作为药物；反义核酸抑制癌基
34、因研究；作为药物；反义核酸抑制癌基因6162RNA干涉（干涉（RNA interference，RNAi）:由双链由双链RNA（dsRNA）介导的、序列特异）介导的、序列特异 的转录后基因沉默机制，又称的转录后基因沉默机制，又称RNA干扰。干扰。RNA干涉技术：干涉技术：用用RNA干涉的原理，研究基因功能与特异干涉的原理，研究基因功能与特异 地使基因沉默方法。地使基因沉默方法。RNA干涉技术的应用：干涉技术的应用：基因功能的研究；基因敲除；基因治疗的基因功能的研究；基因敲除；基因治疗的 新策略；药物筛选新策略；药物筛选6263第第1 1章章 小小 结结1.1.医学细胞生物学与医学的关系，举例说明其研究成医学细胞生物学与医学的关系，举例说明其研究成 果为临床医学解决哪些实际问题？果为临床医学解决哪些实际问题？2.2.观察细胞形态结构的主要技术方法和应用范围。观察细胞形态结构的主要技术方法和应用范围。3.3.流式细胞计量术应用原理和使用范围。流式细胞计量术应用原理和使用范围。4.PCR4.PCR技术原理和特点。技术原理和特点。5.5.概念：医学细胞生物学、细胞学说概念：医学细胞生物学、细胞学说6.6.英文缩写符号：英文缩写符号：RFLP、FCM 、HGP、PCR、RNAi、dsRNA、siRNA63个人观点供参考，欢迎讨论！
