1、医学检验的干扰问题医学检验的干扰问题青岛兰信医学检验所 刘奉亭2012年1月10日干扰物质的来源干扰物质的来源?体液是非常复杂的混合物，存在于体液中的内源和外源物质都可能干扰对一些物质的准确测定。?标准品和质控品等材料中也可能存在干扰物质。干扰物质的种类干扰物质的种类?内源干扰物：溶血，脂血，黄疸和异型蛋白血等?外源干扰物：药物，添加剂，试验材料等溶血的干扰溶血的干扰?溶血的原因?血红蛋白对340nm光吸收的干扰?细胞内成份对血清（血浆）的污染不正确操作导致的溶血不正确操作导致的溶血?注射器或试管中有水?使用真空采血管时，采血管负压太大?抽血不顺利，止血带扎得时间过长(最好不超过半分钟,看到回
2、血后立即松开止血带)?从注射器中往试管中注血时用力过快过猛?采血后，未取针头直接将血注人真空管内?使用抗凝管时，过分用力摇匀疾病引起溶血疾病引起溶血（属合格标本）?阵发性睡眠性血红蛋白尿?血型不合（如新生儿溶血）?红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症?药物?其他可引起溶血的疾病血红蛋白对340nm测定的干扰?血红蛋白在340nm左右有光吸收，当血红蛋白被氧化生成高铁血红蛋白时，其在340nm的光吸收降低。因此可影响所有以NADH和NADPH的吸收性质为基础的测定方法,如ALT、AST、BUN、CK、GLU（HK法）、HBDH、LDH、血氨、胆汁酸等。红细胞内成份的污染红细胞内成份的污染(1)检验
3、项目胞内/血浆浓度比乳酸脱氢酶160倍钾22倍镁3倍血浆中含有1g/L血红蛋白时可使乳酸脱氢酶升高670U/L，钾升高3mmol/L，镁升高0.05mmol/L。红细胞内成份的污染红细胞内成份的污染(2)?溶血释放出来的腺苷酸激酶(AK)可影响CK活性的测定。AK催化：2ADPAMP+ATPCK催化：磷酸肌酸ADP肌酸+ATP?AK还能干扰CK同工酶的电泳测定。AK向CK-MM的阴极方向移动，而可能会被错误地解释为巨型CK-2。脂血的干扰脂血的干扰?混浊?光散射?置换体积和非极性分配脂血混浊的影响脂血混浊的影响?使空白吸光度升高而降低比色方法的测定范围。?影响甘油三酯的测定：甘油三酯测定试剂中
4、的酯酶可清除脂血的混浊而导致光吸收的改变。脂血对光散射的影响脂血对光散射的影响?对以光散射为基础的方法(比浊法)产生显著的影响：ApoAI、ApoB、抗“O”、RF、CPR、AT、PA、Cys C、2-MG、TRF、Lp(a)、IgA、IgG、IgM、补体C3、补体C4、TSGF、D2、HCY等。?由于被测物质在水相和脂相的溶解度不同，脂血通过置换水的体积而造成水溶性物质结果假性偏低。?不干扰电解质等的电极法测定。脂血对非极性分配的影响脂血对非极性分配的影响胆红素的干扰胆红素的干扰?胆红素能够干扰使用过氧化物酶偶联反应（PAP偶联）的肌酐、葡萄糖，尿酸，胆固醇和甘油三脂、HDL-C和LDL-C
5、的测定。?高浓度的胆红素对肌酐测定的苦味酸法也产生负干扰。胆红素干扰机理及干扰的消除胆红素干扰机理及干扰的消除?胆红素在400-540nm有强烈的吸收。?胆红素通过破坏反应的中间产物而对检验产生干扰：4-氨基-安替比啉 H2O2苯醌亚胺胆红素H2O2胆绿素?解决方法：试剂中加入亚铁氰化物以破坏胆红素；420-460nm蓝光预照射标本以破坏胆红素。抗体的干扰抗体的干扰?异型蛋白?冷凝集蛋白?异嗜性抗体?免疫球蛋白?同源抗体异型蛋白血等异型蛋白血等?由于多发性骨髓瘤或类似的原因，异型蛋白在体内循环。异型蛋白可干扰测定磷的硫酸亚铁/钼酸铵法，干扰测定尿素的邻苯二醛法。冷凝集蛋白的干扰冷凝集蛋白的干扰
6、?冷凝集蛋白可使红细胞凝集，在红细胞计数时，使多个红细胞堆积一并通过计数孔，而引致RBC、HCT的计数减少，直接导致MCV、MCHC、RDW等参数的升高。?血型测定时，往往会出现正定为AB型，反定为O型。冷凝集蛋白干扰的消除冷凝集蛋白干扰的消除?红细胞膜存在一种冷抗体(冷凝素IgM)在30以下反应活跃，26即可发生冷凝集。?处理方法是血液标本与检测试剂双重加温，30分钟后检测可消除冷凝集影响。嗜异性抗体的干扰嗜异性抗体的干扰?嗜异性抗体（Id）是对非特异性抗原产生的抗体应答，分为天然抗体和自身免疫抗体。前者又分为天然多特异性抗体、独特型抗体和类风湿因子。?在两点免疫法中，异嗜性抗体与固化抗体及
7、标记抗体结合，形成复合物，结果使信号抗体与捕获抗体结合，导致 假阳性。抗抗体的干扰抗抗体的干扰?免疫分析中使用的抗体多是由鼠杂交瘤细胞制备的，有人可能由于曾经被鼠咬等原因产生抗鼠抗体，从而干扰测定(以ELISA为例)。包被抗体?被测物质?标记抗体包被抗体?抗抗体?标记抗体免疫球蛋白的干扰免疫球蛋白的干扰?免疫球蛋白可能偶然与血清中其它物质结合。例如，IgG可能与CK-BB结合，形成巨型CK1，因其半衰期比CK长而导致血清中CK的活性升高。?免疫球蛋白可能通过与甲状腺素（T4）结合而干扰甲状腺素的测定。放免分析中同源抗体的干扰放免分析中同源抗体的干扰?待测hap与125I-hap竞争同抗体结合h
8、ap+125I-hap抗hap hap-抗hap125I-hap-抗hap?过量二抗将hap-抗hap和125I-hap-抗hap沉淀，离心分进行计数。?同源抗体（例如兔血清中）存在时，过量的同源抗体与二抗结合，抑制了抗hap与二抗的结合。药物的干扰药物的干扰?维生素C?右旋糖酐?交联血红蛋白?地高辛抗体片段?输液同侧抽血?不恰当采样管维生素C对生化检验的干扰?维生素C可干扰下列物质的测定，导致测定结果大幅度下降：肌酐（酶法）尿酸葡萄糖（GODPAP法）胆固醇甘油三酯高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)维生素C干扰的机理?维生素C具有很强的还原性，能够使PAP偶联反应的
9、中间产物过氧化氢还原，因而可以干扰所有以PAP偶联的检验项目的测定。维生素C干扰的消除方法?葡萄糖可采用HK法测定?肌酐（酶法）、胆固醇、甘油三酯、尿酸、HDL-C、LDL-C的测定可采用两步法第一步用 EDTAFe(III)Na 或 维生素C氧化酶除去标本中的维生素 C第二步进行测定右旋糖酐对总蛋白测定的干扰右旋糖酐对总蛋白测定的干扰?右旋糖酐在碱性双缩脲试剂中易形成不溶性复合物而产生混浊，从而干扰血清总蛋白的测定，导致血清总蛋白的含量假性升高。?在双缩脲试剂中优选各种成份的比例或加入少许甘油，可提高右旋糖酐的溶解度，防止其产生混浊，消除右旋糖酐对总蛋白测定的干扰。交联血红蛋白的干扰交联血红
10、蛋白的干扰?交联血红蛋白正被试验作为载氧源的替代物。这些血红蛋白复合物不能通过离心与血清分离，结果与体内溶血类似。地高辛抗体片段对地高辛测定的干扰?当给病人使用特异抗体进行治疗时，抗体可能与测定被分析物的免疫学方法竞争。例如治疗地戈辛中毒的地戈辛抗体片段(Fab)与测定地戈辛系统的抗体竞争，干扰地戈辛的测定。药物对尿液分析的影响药物对尿液分析的影响?需检测尿蛋白的肾炎患者,多使用青霉素治疗,输入的青霉素90%以上随尿液排泄,而尿中青霉素可干扰尿蛋白的检测(干化学法出现假阴性、磺柳酸法出现假阳性)。?一次静脉推入2 g维生素C后6 h内,或口服维生素C 100 mg/片9片(1日3次,每次3片)
11、后第二天清晨尿内排出的维生素C均可使尿潜血、糖、酮体和亚硝酸盐出现假阴性反应。目前有些厂家的试剂已经解决了这个问题。放射性碘对放免检查的干扰放射性碘对放免检查的干扰?同位素扫描检查后，血清中放射性的碘与T3，T4结合，导致进行T3，T4，FT3，FT4放射免疫检查时，计数升高，结果假性降低。其它药物对检验结果的影响其它药物对检验结果的影响?利尿药：增加血钠和血钾浓度?避孕药：引起血清胆固醇的升高?吗啡：使血清淀粉酶、脂肪酶、氨基转移酶、碱性磷酸酶、胆红素等升高，使胰岛素、去甲肾上腺素等降低。?大麻：使血钾、钠、氯、尿素和胰岛素等升高，而使肌酐、尿酸、血糖降低。高渗葡萄糖对血钾测定的干扰高渗葡萄
12、糖对血钾测定的干扰?输入高渗葡萄糖后，不宜做血钾测定：高渗葡萄糖注入体内后，在肝脏内合成糖原，这一过程需钾离子参予，当细胞内糖原和蛋白合成增加时，细胞内的钾减少，血浆内的钾即进入细胞内，从而血浆内 K+浓度降低，故注入高渗葡萄糖后在一定时间内血清钾浓度暂时降低，不宜做血钾测定。添加剂添加剂?真空采血管中常加入一些物质来抗凝、促凝、帮助分离血清或抑制糖酵解和封口。所有的抗凝剂都干扰许多物质的测定。抗糖酵解常用的氟化物和碘乙酸盐也可干扰一些物质的测定。氟抑制涉及糖酵解的酶系统。?用错试管会产生严重的干扰。肝素抗凝对胆红素测定的干扰肝素抗凝对胆红素测定的干扰?重氮法(表面活性剂)：严重受肝素干扰，使
13、测定结果大幅升高（肝素与十二烷基溴化铵结合形成不溶性白色化合物）。?重氮法(二甲亚砜)：不受肝素干扰?钒酸氧化法：不受肝素干扰?临床上医生也经常给病人使用肝素。试验材料（1）?质控、标准等通常是由去纤维的血浆为基质制备的，可能含有一些高浓度的物质，如胆红素和葡萄糖等。这些物质可能对检验产生干扰，但其对标准和质控的影响则可能察觉不到，因为在质控和标准中，这些外源性化合物的浓度是不变的。试验材料（2）?质控、标准等材料的来源(如马、牛、人)，加入的防腐剂、稳定剂都可能引起干扰，物理变化如冻干或冷冻也可能产生干扰。?用质控物和新鲜血清对一些实验室的调查表明，质控结果差别很大，但新鲜血清结果差别很小。
14、防止采血错误防止采血错误?不正确的采血(输液臂同侧采血)：这时所采的血被所输液体严重污染，导致测定结果毫无参考价值。?用使用过的注射器抽血(如使用刚给病人打过青霉素钾盐的注射器可导致血钾大幅度升高)。?若女性病人做了乳腺切除术，应在手术对侧手臂采血。分析干扰的方法（1）?检测干扰的方法有病人结果前后对照及异常空白或异常反应速率的测定等。最好的方法是用另一种已知不受干扰的方法进行对照测定。也可用两种不同的方法进行对比测定。如果两种方法测得的结果不同，则表明存在干扰。两种方法的原理差别越大，检测到干扰的可能性就越大。分析干扰的方法（2）?还可把不同浓度的公认干扰物加入到等分的同一试样中。如果斜率显
15、著不为零，就表明存在着干扰。干扰的程度由斜率决定。葡萄糖浓度相同、维生素C浓度不同系列标本的对比测定05101520253000.25 0.5 0.7511.25 1.5 1.7522.25 2.5维生素C（g/L）葡萄糖（mmol/L）GOD PAP法HK法血红蛋白对胆红素测定的干扰血红蛋白对胆红素测定的干扰?血红蛋白干扰结合胆红素的测定，当胆红素的浓度小于32.5mol/L时为正干扰，大于32.5mol/L时为负干扰，等于32.5mol/L时无干扰。因此，仅在同一分析物浓度下研究干扰问题，有时可能会得出错误的结论。先锋霉素I对肌酐测定的干扰?先锋霉素I与苦味酸盐生成的化合物与肌酐苦味酸盐的光吸收区域相同，而干扰肌酐的测定。先锋霉素I对肌酐测定的干扰?先锋霉素I与苦味酸盐反应的速率很快；然而，一旦达到了最大吸收，45秒后，吸收即降低。?如果在先锋霉素I苦味酸反应的光吸收增加阶段进行读数，则产生正干扰，而如果在光吸收降低阶段进行读数，则产生负干扰。结语?在医学检验中，干扰是普遍存在的。只有对这些干扰认真学习和研究，才能最大限度地降低干扰所带来的影响。?要想全面认识干扰的性质，解决干扰问题，就必须对干扰的机理进行深入的研究。谢谢 谢！谢！
