1、 林木病原细菌的一般性状林木病原细菌的一般性状 细菌形态和结构细菌形态和结构形态大多杆状形态大多杆状,个别丝状个别丝状细菌大多单生大小一般为细菌大多单生大小一般为1-3x0.5-0.8微米，要在苯酚品红染色后在微米，要在苯酚品红染色后在x的油镜下才能观察到的油镜下才能观察到大多有鞭毛大多有鞭毛极鞭着生在菌体的一端或两端极鞭着生在菌体的一端或两端周鞭着生在菌体的四周周鞭着生在菌体的四周鞭毛着生的位置是分类的依据鞭毛着生的位置是分类的依据一般要对鞭毛染色后再镜检一般要对鞭毛染色后再镜检 黏质层黏质层(较厚而固定的称作荚膜较厚而固定的称作荚膜)-细胞壁细胞壁(多糖，拟脂类和甲壳质组成多糖，拟脂类和甲
2、壳质组成)-质膜（质膜下的小粒状鞭毛穿过质膜（质膜下的小粒状鞭毛穿过细胞壁和黏质层延伸到体外）细胞壁和黏质层延伸到体外）-胞胞质（异染粒中性体气泡液泡质（异染粒中性体气泡液泡核糖体）核糖体）-核区（核区（DNA，无核，无核膜）无芽孢膜）无芽孢革兰氏阴性菌壁厚，肽聚糖为主革兰氏阴性菌壁厚，肽聚糖为主革兰氏阳性菌壁薄，有脂多糖和脂蛋白革兰氏阳性菌壁薄，有脂多糖和脂蛋白革兰氏染色是用结晶紫草酸铵对细菌染色，革兰氏染色是用结晶紫草酸铵对细菌染色，经酒精脱色后再用番红复染以便观察未经酒精脱色后再用番红复染以便观察未能脱色的为阳性（紫色），脱色的为阴性能脱色的为阳性（紫色），脱色的为阴性（红色）（红色）植
3、物病原细菌对链霉素敏感，可用于植物病原细菌对链霉素敏感，可用于防治细菌病害防治细菌病害 培养性状：固定培养基上菌落培养性状：固定培养基上菌落 液体培养基上混浊，絮状物，菌液体培养基上混浊，絮状物，菌膜，菌环等膜，菌环等 繁殖繁殖方式为裂殖，繁殖速度繁殖繁殖方式为裂殖，繁殖速度为次分钟，为次分钟，S形生长曲线形生长曲线 遗传裂殖时细胞内物质均等分遗传裂殖时细胞内物质均等分配到子细胞配到子细胞质粒染色体质粒染色体DNA之外的可自我之外的可自我复制的环状双链复制的环状双链DNA，常带有与抗药，常带有与抗药性，致病性，性结合有关的基因性，致病性，性结合有关的基因 类有性作用类有性作用 接合：一个细胞的
4、遗传物质可以部分进接合：一个细胞的遗传物质可以部分进入另一个细胞，接受遗传物质的细菌在入另一个细胞，接受遗传物质的细菌在分裂繁殖时体内的两种遗传物质重新组分裂繁殖时体内的两种遗传物质重新组合合 突变频率低但次数多突变频率低但次数多 转化：由于菌体破裂，一个细胞的遗传转化：由于菌体破裂，一个细胞的遗传物质释放出来，进入另一个有亲和力的物质释放出来，进入另一个有亲和力的同种或近似种的菌体内，并作为后者遗同种或近似种的菌体内，并作为后者遗传物质的一部分传物质的一部分 噬菌体：细菌的病毒，专性寄生，噬菌体：细菌的病毒，专性寄生，一般蝌蚪状，在细菌液体培养时一般蝌蚪状，在细菌液体培养时使培养液变清，在细
5、菌培养平板使培养液变清，在细菌培养平板上形成透明斑（噬菌斑）上形成透明斑（噬菌斑）寄生性：绝大多数非专性寄生寄生性：绝大多数非专性寄生,极少数极少数专性寄生专性寄生鉴定方法鉴定方法:症状观察症状观察:染色镜检鉴定法染色镜检鉴定法(革兰氏染色法和鞭毛革兰氏染色法和鞭毛染色法染色法)培养性状鉴定法培养性状鉴定法(菌落性状观察菌落性状观察,生理生生理生化性状观察化性状观察)致病性测定致病性测定:血清学鉴定法血清学鉴定法:核酸技术核酸技术:薄壁菌门薄壁菌门 重要属重要属:野杆菌属野杆菌属Agrobacterium,也叫脓杆菌杆也叫脓杆菌杆菌属菌属,革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引起植革兰氏阴性菌，鞭毛周生，
6、引起植物组织肿瘤或畸形物组织肿瘤或畸形 假单胞杆菌属假单胞杆菌属Pseudomonas革兰氏阴革兰氏阴性菌，鞭毛数根，菌落白色，能产生荧性菌，鞭毛数根，菌落白色，能产生荧光性色素，引起叶斑，溃疡，果斑光性色素，引起叶斑，溃疡，果斑 黄单胞杆菌属黄单胞杆菌属Xanthomonas革兰氏阴革兰氏阴性菌，鞭毛根，菌落黄色，能产生性菌，鞭毛根，菌落黄色，能产生非水溶性黄色色素，柑橘溃疡病非水溶性黄色色素，柑橘溃疡病,核桃核桃黑斑病黑斑病 欧氏杆菌属欧氏杆菌属Erwina革兰氏阴性菌，鞭革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引起植物组织腐烂或萎焉毛周生，引起植物组织腐烂或萎焉 厚壁菌门厚壁菌门 棒杆菌属棒杆菌属Gor
7、ynebacterium（Clavibacter）革兰氏阳性菌，革兰氏阳性菌，多数无鞭毛多数无鞭毛 植原体属（植原体属（Phytomonas）引起的病状很象病毒病的症状，主要是引起的病状很象病毒病的症状，主要是黄化丛枝症状以前放在病毒病中，后黄化丛枝症状以前放在病毒病中，后来发现有些病可用四环素治疗，在电镜来发现有些病可用四环素治疗，在电镜下可看到哑铃状类似于菌原体的生物体，下可看到哑铃状类似于菌原体的生物体，改成类菌原体，近年来将其归到植原体改成类菌原体，近年来将其归到植原体属中，引起桑的萎缩病，造成节尖缩短，属中，引起桑的萎缩病，造成节尖缩短，丛枝，缩叶，黄化；泡桐丛枝病：丛枝，丛枝，缩叶
8、，黄化；泡桐丛枝病：丛枝，花果变枝叶，黄化，有传染性花果变枝叶，黄化，有传染性 螺原体属（螺原体属（Spiroplasma）菌体的基本形态为螺旋形菌体的基本形态为螺旋形 繁殖时可产生分支，分支也螺旋形繁殖时可产生分支，分支也螺旋形 引起柑橘僵化病（引起柑橘僵化病（S.citri）节间变短，）节间变短，缩小，丛生枝或丛芽树皮增厚，植株缩小，丛生枝或丛芽树皮增厚，植株矮化，并且全年可开花，但结果小而矮化，并且全年可开花，但结果小而少，多畸形，易脱落少，多畸形，易脱落 可以人工培养，在培养基上形成可以人工培养，在培养基上形成“荷荷包蛋包蛋”状菌落状菌落 细菌病害的症状细菌病害的症状 侵染循环和防治侵
9、染循环和防治斑点斑点溃疡溃疡萎焉萎焉 植物病原细菌从伤口侵入植物病原细菌从伤口侵入,有的从自然孔有的从自然孔口侵入口侵入 寄生性弱的细菌一般都是从伤口侵入寄生性弱的细菌一般都是从伤口侵入 寄生性强的细菌从伤口和自然孔口都能侵寄生性强的细菌从伤口和自然孔口都能侵入入 假单胞杆菌属和黄单胞杆菌属的细菌引致假单胞杆菌属和黄单胞杆菌属的细菌引致叶斑病叶斑病,一般是从自然孔口侵入一般是从自然孔口侵入 棒形杆菌属、欧氏杆菌属和土壤杆菌属棒形杆菌属、欧氏杆菌属和土壤杆菌属的细菌引致萎蔫、腐烂和瘤肿的细菌引致萎蔫、腐烂和瘤肿,多半是多半是从伤口侵入从伤口侵入 有多次再侵染的机会有多次再侵染的机会 在自然条件在
10、自然条件,传播靠雨水溅洒作用传播靠雨水溅洒作用,故传故传播距离不会很远播距离不会很远 带菌的种苗是细菌病害传染的重要来源带菌的种苗是细菌病害传染的重要来源 昆虫介体也可传播细菌昆虫介体也可传播细菌 工具传播工具传播 细菌在受害苗木内越冬细菌在受害苗木内越冬,成为初侵染来源成为初侵染来源 种子和无性繁殖器官：带菌种苗是最重要的种子和无性繁殖器官：带菌种苗是最重要的初侵入来源，带菌种苗调运可远距离传播初侵入来源，带菌种苗调运可远距离传播 病残体：植物病原细菌可以在病株残余组织病残体：植物病原细菌可以在病株残余组织中长期存活，也是重要的初侵染来源中长期存活，也是重要的初侵染来源 土壤：主要存活于土壤
11、中的作物残余组织土壤：主要存活于土壤中的作物残余组织 杂草和其他作物：相同寄主范围的作物杂草和其他作物：相同寄主范围的作物 昆虫介体：玉米细菌性萎蔫病菌可以在玉昆虫介体：玉米细菌性萎蔫病菌可以在玉米叶甲体内越冬，成为初侵染来源米叶甲体内越冬，成为初侵染来源 作好种苗消毒和清除植物病死残体作好种苗消毒和清除植物病死残体 用抗生素效果较好用抗生素效果较好 防止造成伤口和及时保护伤口防止造成伤口和及时保护伤口,在在防治上特别重要防治上特别重要 寄生性种子植物的种类寄生性种子植物的种类 主要有桑寄生科主要有桑寄生科(Loranthaceae)菟丝子科菟丝子科(Cuscutaceae)列当科列当科(Or
12、obanchaceae)野菰野菰 蛇菰科（蛇菰科（Balanophoraceae）其中菟丝子和列当是对外检疫对象其中菟丝子和列当是对外检疫对象 寄生部位寄生部位:茎寄生茎寄生(地上部分的茎地上部分的茎):桑寄生和菟丝子桑寄生和菟丝子 根寄生根寄生(地下部分的根地下部分的根):列当和野菰列当和野菰 半寄生半寄生:含叶绿素含叶绿素,其吸盘的导管与寄主其吸盘的导管与寄主导管相连导管相连,如桑寄生如桑寄生 全寄生全寄生:不含叶绿素不含叶绿素,其吸盘的导管和筛其吸盘的导管和筛管分别与寄主的导管和筛管相连管分别与寄主的导管和筛管相连,如菟如菟丝子丝子,列当和野菰列当和野菰 种子萌发到缠绕寄种子萌发到缠绕寄
13、主的过程主的过程 菟丝子的茎和果实菟丝子的茎和果实 枝条被害状枝条被害状 寄主和菟丝子茎切寄主和菟丝子茎切面面,示菟丝子吸器伸示菟丝子吸器伸入寄主皮层入寄主皮层蛇菰科Balanophoraceae 双子叶植物，19属，约120种，分布于热带和亚热带地区，中国只有 蛇菰属Balanophora 锁阳属Cynomorium 双柱蛇菰属 Rhopalocemis 3属17种，产中南部至西南 一年生或多年生、肉质草本，寄生于根上 无叶绿素和气孔，花单性，很少两性，密集成一个单性或两性的花序 野菰，野菰，又名蔗寄生 一年生寄生草本植物，整个列当科都是营寄生的植物，南方最常见的是这种 茎基部分枝，地上不分
14、枝。叶退化成鳞片状，全株肉色 枝顶开花，萼佛焰苞状，冠二唇形，紫红色，黄白色 地下根常附于禾本科寄生植物 全株药用，具清热解毒，消肿功效 菟丝子种子比寄主植物的种子成熟早、菟丝子种子比寄主植物的种子成熟早、萌发晚萌发晚 种子在土内或与寄主种子一起越冬种子在土内或与寄主种子一起越冬 列当靠寄主根部分泌物刺激而萌发列当靠寄主根部分泌物刺激而萌发 桑寄生直接在寄主上越冬桑寄生直接在寄主上越冬小的种子靠风传播小的种子靠风传播(菟丝子菟丝子,列当列当)大的种子靠鸟类传播大的种子靠鸟类传播(桑寄生桑寄生)检疫检疫轮作轮作手工拔除手工拔除(砍除砍除)喷洒除草剂喷洒除草剂 线虫的形态和结构线虫的形态和结构 低
15、等动物，属线虫动物门，数量多，低等动物，属线虫动物门，数量多，分布广，受线虫危害的症状与一般分布广，受线虫危害的症状与一般的病害症状相似，称为线虫病的病害症状相似，称为线虫病 350-1000 x15-35微米，虫体细长，微米，虫体细长，蠕虫形，虫体半透明蠕虫形，虫体半透明 卵幼虫（龄）成虫受精卵卵幼虫（龄）成虫受精卵 专性寄生，去食时排出唾液，起到致病专性寄生，去食时排出唾液，起到致病作用，刺激细胞分裂，肿瘤，枯萎作用，刺激细胞分裂，肿瘤，枯萎 症状：根结，丛根，根腐，地上部分似症状：根结，丛根，根腐，地上部分似缺素症缺素症 松材线虫是松褐天牛传播松材线虫是松褐天牛传播 检验方法检验方法 对
16、应施检疫物首先直接观察是否存对应施检疫物首先直接观察是否存在本质干枯、木质部蓝变和媒介昆在本质干枯、木质部蓝变和媒介昆虫或它的栖居痕迹等症状，然后进虫或它的栖居痕迹等症状，然后进行室内检验行室内检验 抽取有上述症状的部分检疫物，数量为每抽取有上述症状的部分检疫物，数量为每批次总件数的批次总件数的0.5%-5.0%，但最低不得少，但最低不得少于于5件。若无明显症状时可随机抽样件。若无明显症状时可随机抽样 在所抽取的样木在所抽取的样木(或样品或样品)上取部分样品，上取部分样品，或钻取少量木屑或钻取少量木屑(不得少于不得少于20g)，每样，每样3个个重复重复 标号后带回实验室检验。必要时可将整件标号
17、后带回实验室检验。必要时可将整件样木样木(或样品或样品)带回备检带回备检 取样时注意选取靠近蛀道、蛹室的部位，取样时注意选取靠近蛀道、蛹室的部位，所取样品不得带有树皮所取样品不得带有树皮 将各标号样品分别进行线虫分离将各标号样品分别进行线虫分离 分离线虫可采用贝尔曼漏斗法或浅盘法分离线虫可采用贝尔曼漏斗法或浅盘法 对媒介昆虫进行线虫分离时，可将其用剪刀对媒介昆虫进行线虫分离时，可将其用剪刀或尖头镊子、解剖针等剪碎或撕碎后同样采或尖头镊子、解剖针等剪碎或撕碎后同样采用上述方法进行用上述方法进行 分离时若室温较低分离时若室温较低(不得低于不得低于7 oC)可根据室可根据室温将分离用水调至温将分离用
18、水调至20-40 oC(不得超过不得超过40 oC)浸泡分离材料浸泡分离材料3-4h线虫游离出一定数量后即线虫游离出一定数量后即可镜检可镜检(一般需经一般需经24小时后镜检小时后镜检)将漏斗末端接一段长约将漏斗末端接一段长约10cm乳胶管乳胶管 在乳胶管上装一止水夹在乳胶管上装一止水夹 剪大小适当纱布两层铺在漏斗上剪大小适当纱布两层铺在漏斗上 将样段去皮劈成长约将样段去皮劈成长约3-4cm细条细条,约取约取10 g(或或木屑木屑)置于漏斗上的纱布中，纱布四角向中间盖置于漏斗上的纱布中，纱布四角向中间盖上分离材料，然后注入清水浸没上分离材料，然后注入清水浸没 注入清水后要注意使水充满漏斗和下面的
19、乳胶注入清水后要注意使水充满漏斗和下面的乳胶管，不要产生空隙管，不要产生空隙 用培养皿在漏斗末端接取线虫分离液用培养皿在漏斗末端接取线虫分离液10ml镜检镜检 浅盘分离装置由两只不锈钢浅盘组成浅盘分离装置由两只不锈钢浅盘组成 口径略小的一只底部为粗网筛，放在另一口径略小的一只底部为粗网筛，放在另一只浅盘上面只浅盘上面 将两层纱布打湿铺于筛盘上，把样品劈碎将两层纱布打湿铺于筛盘上，把样品劈碎(或钻取的木屑或钻取的木屑)置于筛盘的纱布上置于筛盘的纱布上 慢馒注人清水，使水浸没样品慢馒注人清水，使水浸没样品 分离结束后分离结束后,移去筛盘，把大盘内的移去筛盘，把大盘内的分离液集中于小烧杯内分离液集中
20、于小烧杯内 小烧杯内的线虫分离液可通过自然小烧杯内的线虫分离液可通过自然沉降或离心机沉降或离心机(1500转转/min，离心，离心2-3min)浓缩至适宜的量，以便镜检浓缩至适宜的量，以便镜检 将各标号盛有线虫分离液的培养皿置于解将各标号盛有线虫分离液的培养皿置于解剖镜下观察，先确认有无线虫剖镜下观察，先确认有无线虫 对有线虫的样品进行活体镜检，观察它的对有线虫的样品进行活体镜检，观察它的一般形态结构一般形态结构 选择几条成熟、特征易观察的线虫，用针选择几条成熟、特征易观察的线虫，用针或吸管移至载玻片上的水滴中或吸管移至载玻片上的水滴中 使之沉底使之沉底 将此载玻片在酒精灯火焰上方往返几次将此
21、载玻片在酒精灯火焰上方往返几次 约约5-6秒至虫体突然伸直时停止秒至虫体突然伸直时停止 加盖玻片后在显微镜下观察加盖玻片后在显微镜下观察 根据形态特征予以初步鉴别，以确定是根据形态特征予以初步鉴别，以确定是否需作进一步的鉴定否需作进一步的鉴定 线虫培养线虫培养:鉴定需要相当数量的雌、雄成虫，但在鉴定需要相当数量的雌、雄成虫，但在检验时分离到的线虫多是处于休眠阶段检验时分离到的线虫多是处于休眠阶段的分散型的分散型3龄虫（龄虫（L）;有时虽可见雌雄有时虽可见雌雄成虫，但数量较少成虫，但数量较少 从媒介昆虫分离到的线虫则只能是被称从媒介昆虫分离到的线虫则只能是被称为休眠幼虫为休眠幼虫(DL)的分散型
22、的分散型4龄虫，因此，龄虫，因此，需将上述情况的线虫进行培养，以获得需将上述情况的线虫进行培养，以获得大量雌雄成虫供鉴定大量雌雄成虫供鉴定 通常用于培养松材线虫的真菌为通常用于培养松材线虫的真菌为 灰葡萄孢灰葡萄孢(Botrytis cinerea)多毛孢多毛孢(Pestalotia sp.)镰刀菌镰刀菌(Fusarium sp.)培养松材线虫培养松材线虫 将真菌菌种接至马铃薯琼脂培养基将真菌菌种接至马铃薯琼脂培养基(PDA)平板或试管斜面上平板或试管斜面上 在在25 oC条件下经过条件下经过4-5d 待菌丝铺满平板或斜面后待菌丝铺满平板或斜面后 将经过表面消毒的线虫用吸管接到将经过表面消毒的
23、线虫用吸管接到菌丝上菌丝上 28 oC条件下培养条件下培养10-15d即可繁殖出即可繁殖出大量线虫大量线虫 用少量清水将线虫充分洗至小烧杯用少量清水将线虫充分洗至小烧杯内备用内备用 将样木劈开、锯成小段，置于烧杯将样木劈开、锯成小段，置于烧杯中中 加少量清水，使木段下端浸在水中，加少量清水，使木段下端浸在水中，木段上端用湿纱布覆盖木段上端用湿纱布覆盖 在在26 oC培养箱中培养培养箱中培养3-4d 倒取杯底水液，亦可获得较多的雌、倒取杯底水液，亦可获得较多的雌、雄成虫雄成虫 经分离后获得的线虫悬浮液用经分离后获得的线虫悬浮液用1500转转/min离心离心2-3min浓缩至离心管底部浓缩至离心管
24、底部 吸去上清液，用无菌滴管将底部线虫液吸去上清液，用无菌滴管将底部线虫液约约2ml移至另一无菌离心管内移至另一无菌离心管内 加加 入入2ml双倍浓度的消毒液，轻轻振荡双倍浓度的消毒液，轻轻振荡混匀混匀 一定时间后再离心浓缩，重复消毒一定时间后再离心浓缩，重复消毒1次次 再用无菌水换洗再用无菌水换洗2次次 松材线虫表面消毒常用的消毒剂有松材线虫表面消毒常用的消毒剂有3%双双氧水，处理氧水，处理10min 1%升汞，处理升汞，处理5min 0.002%放线菌酮放线菌酮 0.1%硫酸链霉素混合液，处理硫酸链霉素混合液，处理5min 硫酸链酶素硫酸链酶素(1000g/g)、金霉素、金霉素(30g/g
25、)和匹玛霉素和匹玛霉素(pimafucin,0.63g/g)混合液混合液处理处理5minp 经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量p Study Constantly,And You Will Know Everything.The More You Know,The More Powerful You Will Be学习总结结束语当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的，所以不要放弃，坚持就是正确的。When You Do Your Best,Failure Is Great,So DonT Give Up,Stick To The End演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
