1、Microbiology DepartmentCollege Of Resource&Environment SWULiyongTel:023-68250426E-mail:l实验目的实验目的l实验材料实验材料l实验方法实验方法l实验作业实验作业了解培养基的配制原理和方法，掌握其了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。配制过程。了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的使用方法。加压蒸汽灭菌法的使用方法。熟悉微生物的有关准备工作及操作方法。熟悉微生物的有关准备工作及操作方法。药品：相关配方药品：相关配方器材：高压蒸汽灭菌锅器材：高压蒸汽灭菌锅其它：
2、其它：培养基的配制培养基的配制选择配方；选择配方；称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。过滤：除去杂质。过滤：除去杂质。调调pHpH值值：用：用NaOHNaOH或或 HClHCl调调pHpH，用，用pHpH试纸对照。试纸对照。加琼脂溶化加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。分装：注意不要污染棉塞。分装：注意不要污染棉塞。包扎成捆，挂上标签包扎成捆，挂上标签,注明何种培养基。注明何种培养基。灭菌备用：培养
3、基灭菌后必须在灭菌备用：培养基灭菌后必须在37370 0C C下恒温培养下恒温培养24h24h，确定，确定无菌生长，方可使用。无菌生长，方可使用。l牛肉膏牛肉膏 3g l蛋白胨蛋白胨 5g l氯化钠氯化钠 3g l琼脂琼脂 24g l水水 1000mL lpH 7.27.4l 去皮马铃薯去皮马铃薯 （煮沸腾（煮沸腾30min30min后过滤后用汁液）后过滤后用汁液）200g 200g l蔗糖蔗糖 20g 20g l自来水自来水 1000mL 1000mL l琼脂琼脂 24g 24g lpH pH 自然自然单倍乳糖蛋白胨培养液单倍乳糖蛋白胨培养液l蛋白胨：蛋白胨：10g10gl牛肉浸膏：牛肉浸膏
4、：3g3glNaClNaCl：5g5gl乳糖：乳糖：5g5gl水：水：1000ml1000mll1.61.6的溴甲酚紫乙醇溶液：指示剂的溴甲酚紫乙醇溶液：指示剂lpHpH：7.27.2l分装在试管，分装在试管，10ml/10ml/管，管，内放置倒置小管内放置倒置小管；同单倍乳糖蛋白胨培养液；浓度三倍；乳糖蛋白胨培养液；浓度三倍；三倍乳糖蛋白胨培养液三倍乳糖蛋白胨培养液l蛋白胨：10gl乳糖：5gl琼脂：24glK2HPO4：2gl水：1000mll2%伊红：20mll0.5美蓝：13ml注意：伊红和美蓝液单独分装灭菌，使用前再和注意：伊红和美蓝液单独分装灭菌，使用前再和其它成分混合使用；其它成
5、分混合使用；伊红美伊红美鉴别培养基鉴别培养基1 1组：组：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏蛋白胨培养基：1500mL1500mL 斜面：斜面：3535支支7mL7mL 其它：分装三角瓶其它：分装三角瓶2 2组：组：马铃薯培养基：马铃薯培养基：500mL500mL 装入三角瓶中装入三角瓶中3组：组：单倍乳糖发酵培养基：单倍乳糖发酵培养基：600 600 mLmL 分装至试管分装至试管6060支；支；三倍乳糖发酵培养基：三倍乳糖发酵培养基：300 300 mLmL 分装至试管分装至试管3030支；支；4组：伊红美兰培养基：伊红美兰培养基：400mL 分装至三角瓶中；分装至三角瓶中；1.1.90mL90m
6、L无菌水：无菌水：250mL250mL三角烧瓶（三角烧瓶（加石加石子子），装水），装水90.0mL90.0mL；塞上棉塞，包扎、；塞上棉塞，包扎、灭菌备用；灭菌备用；1 1个个/组；组；2.2.试管无菌水：试管装水试管无菌水：试管装水9.0mL9.0mL，塞上棉，塞上棉塞，包扎、灭菌备用塞，包扎、灭菌备用:（1414支支/组）；组）；3.3.空三角瓶：空三角瓶：2 2个个/组；组；4.4.1mL 1mL 无菌吸管无菌吸管:20:20支支/组；组；5.5.10mL 10mL 无菌吸管无菌吸管:2:2支支/组。组。固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？些问题？培养基中加琼脂的作用是什么？为什么？培养基中加琼脂的作用是什么？为什么？干热灭菌、高压蒸汽灭菌有何不同？干热灭菌、高压蒸汽灭菌有何不同？
