1、体内药物分析Biopharmaceutical analysis1ppt课件第一节 体内药物分析概述治疗药物监测治疗药物监测的的2ppt课件3ppt课件 狭义：利用现代分析仪器和分离手段对人和狭义：利用现代分析仪器和分离手段对人和动物血液、尿和组织等样品进行定性定量的分动物血液、尿和组织等样品进行定性定量的分析析 广义：通过体内药物浓度的分析，了解药物广义：通过体内药物浓度的分析，了解药物在体内的数量和质量的变化，获得药代动力学在体内的数量和质量的变化，获得药代动力学参数，为药品的生产、临床应用作出评价参数，为药品的生产、临床应用作出评价4ppt课件一 体内药物分析的性质 体内药物分析是一门研
2、究体内药物分析是一门研究生物机体生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的中药物及其代谢物和内源性物质的质质与量与量变化规律的分析方法学变化规律的分析方法学 在探求科学用药规律与安全、有效、在探求科学用药规律与安全、有效、合理用药，在开发新药、保障健康长合理用药，在开发新药、保障健康长寿方面具有重要作用寿方面具有重要作用5ppt课件 二 体内药物分析的作用和意义 通过检测人（或动物）的通过检测人（或动物）的中的中的为临床药学研究提供必为临床药学研究提供必要的要的数据和相关信息数据和相关信息6ppt课件（一）在新药评价（一）在新药评价 和开发中的意义和开发中的意义 大量事实证明，如无临床药理学和临床
3、药学大量事实证明，如无临床药理学和临床药学研究给新药以确切的评价，要做到临床安全、研究给新药以确切的评价，要做到临床安全、合理、有效地用药将会遇到许多困难。因此，合理、有效地用药将会遇到许多困难。因此，加强药物在生物样品内作用机理的研究，以加强药物在生物样品内作用机理的研究，以了解和阐明药物药物结构、理化性质、剂型了解和阐明药物药物结构、理化性质、剂型及生产工艺与药物疗效等关系，已成为评价及生产工艺与药物疗效等关系，已成为评价药品质量的重要内容和依据。药品质量的重要内容和依据。体内药物分析的意义7ppt课件 1 1全面质量控制全面质量控制 2 2新药报批新药报批 3 3为设计新药提供信息为设计
4、新药提供信息 从代谢产物中开发新药从代谢产物中开发新药 保泰松保泰松羟基保泰松（作用强、副作用小）羟基保泰松（作用强、副作用小）非那西丁非那西丁扑热息痛扑热息痛 前药设计前药设计 新剂型的研究，缓控释、经皮制剂等新剂型的研究，缓控释、经皮制剂等 以上内容必须通过测定体内药物浓度得以解决以上内容必须通过测定体内药物浓度得以解决8ppt课件（二）临床合理用药中的意义（二）临床合理用药中的意义 1 1血药浓度与药理作用血药浓度与药理作用2.2.影响血药浓度的因素影响血药浓度的因素（1 1）机体因素）机体因素 a a生理因素生理因素 年龄、性别、生理状况年龄、性别、生理状况 b b病理因素病理因素 c
5、 c遗传因素遗传因素（2 2）药物因素）药物因素 a a剂型因素（生物利用度问题）剂型因素（生物利用度问题）b b药物合并使用（酶抑、酶促）药物合并使用（酶抑、酶促）c c时间因素时间因素9ppt课件（三）药物中毒解救的意义（三）药物中毒解救的意义 药物中毒的诊断和治疗方案的确立药物中毒的诊断和治疗方案的确立（四）兴奋剂检测的意义（四）兴奋剂检测的意义 包括麻醉药精神药品滥用，吸毒及运动员违禁药品包括麻醉药精神药品滥用，吸毒及运动员违禁药品检测检测10ppt课件3 3从样品的来源分从样品的来源分1 1从分析物分从分析物分母体药物母体药物代谢物代谢物内源性物质内源性物质2 2从生物样品种类分从生
6、物样品种类分均匀样品均匀样品 非均匀样品非均匀样品人体人体实验动物实验动物三 体内药物分析的对象 11ppt课件体内药物分析的对象 研究对象研究对象 评价药物的安全性（临床前研究）评价药物的安全性（临床前研究）动物动物 评价药物的有效性（临床研究）评价药物的有效性（临床研究）人体人体（健康志愿者或患者）（健康志愿者或患者）用药的安全、有效与合理用药的安全、有效与合理人体（患者人体（患者TDM TDM）具体检材具体检材 生物体的各种器官、组织和生物体的各种器官、组织和体液体液等等12ppt课件四 体内药物分析的任务 1.分析方法学的研究和完善分析方法学的研究和完善 提供灵敏、专属、准确可靠的分析
7、提供灵敏、专属、准确可靠的分析方法与最佳的分析条件（首要任务）方法与最佳的分析条件（首要任务）13ppt课件2.治疗药物监测治疗药物监测 TDM，therapeutical Drug Monitoring 只有具有明确治疗范围，血药浓度和药效关系只有具有明确治疗范围，血药浓度和药效关系密切，且具有下列情况者，要求进行药浓检测：密切，且具有下列情况者，要求进行药浓检测：l 有效血药浓度范围窄，剂量小，毒性大的药物；有效血药浓度范围窄，剂量小，毒性大的药物；l 药代动力学个体差异大、药理作用强、不易估计药代动力学个体差异大、药理作用强、不易估计给药后的血药浓度药物；给药后的血药浓度药物；14ppt
8、课件药物的毒性反应与该药治疗的疾病症状相似，难药物的毒性反应与该药治疗的疾病症状相似，难以判断是剂量不足还是药物毒性所致；以判断是剂量不足还是药物毒性所致；联合用药时，由于药物相互作用产生不良反应，联合用药时，由于药物相互作用产生不良反应，需要调整药物剂量者；需要调整药物剂量者；在短期内难于判断疗效的药物，预测药物能否在短期内难于判断疗效的药物，预测药物能否达到预防效果；达到预防效果；判断患者用药的依从性等要求进行药物浓度检判断患者用药的依从性等要求进行药物浓度检测。测。TDM15ppt课件3.3.药代动力学的研究药代动力学的研究 药物动力学参数、生物利用度及血浆蛋白结药物动力学参数、生物利用
9、度及血浆蛋白结合率等基本数据合率等基本数据 为新药研究、老药再评价、为新药研究、老药再评价、TDMTDM、药物滥用、司法鉴定等提供准确的体内药、药物滥用、司法鉴定等提供准确的体内药物浓度数据和合理解释物浓度数据和合理解释4.4.代谢分型的应用代谢分型的应用5.5.内源性物质测定内源性物质测定 为某些疾病的诊断及治疗为某些疾病的诊断及治疗提供重要信息提供重要信息 16ppt课件五 体内药物分析的特点 由分析对象的特点所决定由分析对象的特点所决定 1干扰物质多，样品一般均需经过分离、净化后干扰物质多，样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析才能进行分析 生物样品中含有大量的内源性物质，如蛋生物样品
10、中含有大量的内源性物质，如蛋白质、白质、脂肪等，以及代谢物、脂肪等，以及代谢物、结合物等干扰分析结合物等干扰分析2样品量少、不能重复取样样品量少、不能重复取样 生物样品多数在特定条件下采集，无法再生物样品多数在特定条件下采集，无法再次取样，且浓度低、变化幅度大次取样，且浓度低、变化幅度大 测定前需浓缩、富集以适应分析方法要求测定前需浓缩、富集以适应分析方法要求 17ppt课件3被测被测药物和代谢物的浓度或活性极低药物和代谢物的浓度或活性极低 对方法的灵敏度及专属性要求较高对方法的灵敏度及专属性要求较高 4要求分析方法简便、快速要求分析方法简便、快速 药物浓度监测和药物滥用及毒物分析中药物浓度监
11、测和药物滥用及毒物分析中5.工作量较大，随着工作的深入开展，会成倍工作量较大，随着工作的深入开展，会成倍地甚或按指数级数地甚或按指数级数6.6.测定数据的处理和阐明有时不太容易测定数据的处理和阐明有时不太容易 18ppt课件六 体内药物分析的一般步骤F 分析方法建立分析方法建立 F 分析方法的验证分析方法的验证 F 体内药物分析的实际应用体内药物分析的实际应用19ppt课件（一）对分析方法的新要求 药物服用的剂量越来越小、体液中药物浓度越药物服用的剂量越来越小、体液中药物浓度越来越低，对体内药物分析方法提出了来越低，对体内药物分析方法提出了新的要求新的要求：1.1.最低检测量最低检测量1010
12、-9-9 1010-7-7g g 或或1010-15-15 1010-12-12g g 2.2.20ppt课件 1.色谱法色谱法 GC、HPLC、HPCE 2.免疫分析法免疫分析法 RIA、EIA 3.联用技术联用技术 GC-MS、LC-MS21ppt课件（二）体内药物分析的常用分析方法22ppt课件23ppt课件3.3.免疫化学法免疫化学法 主要有主要有放射免疫法放射免疫法(RIA)(RIA)、荧光免疫法、荧光免疫法(FIA)(FIA)和酶免疫法和酶免疫法(EIA)(EIA)根据抗原根据抗原-抗体反应的特异性，应用免疫化学抗体反应的特异性，应用免疫化学法检测法检测半抗原或抗原性药物半抗原或抗
13、原性药物，TDMTDM应用的免疫化应用的免疫化学法一般都采用竞争性免疫分析学法一般都采用竞争性免疫分析 只有具备只有具备完全或半抗原性完全或半抗原性的药物，并能制备的药物，并能制备特异性抗体，才可用免疫化学法进行特异性抗体，才可用免疫化学法进行TDM TDM 24ppt课件 特点：特点：免疫化学法灵敏度极高，大多可达免疫化学法灵敏度极高，大多可达ngng甚至甚至pgpg检测水平，可满足所有药物检测水平，可满足所有药物TDMTDM的要求；的要求；所需标本量少，预处理及测定操作简便，并可制所需标本量少，预处理及测定操作简便，并可制成商品化试剂盒；可利用一般生化、荧光自动分成商品化试剂盒；可利用一般
14、生化、荧光自动分析仪进行自动化操作析仪进行自动化操作 在体内几乎不发生代谢转化而以原型排泄的在体内几乎不发生代谢转化而以原型排泄的药物，较少代谢物干扰，尤其适用于免疫法检测，药物，较少代谢物干扰，尤其适用于免疫法检测，如如 庆大霉素庆大霉素等氨基甙类抗生素等氨基甙类抗生素25ppt课件在体药物分析示意图 微透析系统微透析系统活体实验动物活体实验动物微透析探针微透析探针管子管子灌注液灌注液微注射泵微注射泵检测系统检测系统分析分析仪器仪器26ppt课件（therapeutic drug monitoring，TDM）是自本世纪）是自本世纪60年代起，年代起，在临床药理学、药代动力学和临床化学基础在
15、临床药理学、药代动力学和临床化学基础上，结合现代分析检测技术，形成和发展的上，结合现代分析检测技术，形成和发展的一门应用性边缘学科一门应用性边缘学科 27ppt课件 对临床药物治疗的指导，主要是指设对临床药物治疗的指导，主要是指设计或调整合理的给药方案，同时为药物过量中毒计或调整合理的给药方案，同时为药物过量中毒的诊断和处理提供有价值的实验依据的诊断和处理提供有价值的实验依据 近年来国外又将其统称为临床药代动力学监近年来国外又将其统称为临床药代动力学监测（测（Clinical Pharmacokinetic Mornitoring,）28ppt课件 通过灵敏可靠的方法，检测病人血液或体通过灵敏
16、可靠的方法，检测病人血液或体液中的药物浓度，获取有关药动学参数，应用液中的药物浓度，获取有关药动学参数，应用药代动力学理论，指导临床合理用药方案的制药代动力学理论，指导临床合理用药方案的制定和调整，以及药物中毒的诊断和治疗，以保定和调整，以及药物中毒的诊断和治疗，以保证药物治疗的有效性和安全性，证药物治疗的有效性和安全性，实现合理的实现合理的一 治疗药物监测的主要任务29ppt课件 治疗药物监测的核心目的是实现合理的治疗药物监测的核心目的是实现合理的给药方案个体化给药方案个体化 协助诊断和处理药物过量中毒，及进行协助诊断和处理药物过量中毒，及进行其临床药理学研究其临床药理学研究 了解患者是否遵
17、医嘱用药，提高用药依了解患者是否遵医嘱用药，提高用药依从性从性30ppt课件 血药浓度结果用于调整剂量，设计个体化血药浓度结果用于调整剂量，设计个体化给药方案给药方案 一般只监测一次血药浓度，不测药物经时一般只监测一次血药浓度，不测药物经时变化浓度变化浓度 监测方法要求快速、简便、准确，以适应监测方法要求快速、简便、准确，以适应临床需求临床需求治疗药物监测与临床药代动力学研究的区别31ppt课件 治疗药物监测治疗药物监测（TDM）利用各种分析技术利用各种分析技术测定血浆或组织中药物的浓度，并根据药代动测定血浆或组织中药物的浓度，并根据药代动力学的原理和公式来指导个体化给药方案，力学的原理和公式
18、来指导个体化给药方案，以以提高疗效，避免或减少毒副作用的发生；为药提高疗效，避免或减少毒副作用的发生；为药物过量中毒的诊断和处理提供实验室依据物过量中毒的诊断和处理提供实验室依据三 治疗药物监测的意义32ppt课件 据世界卫生组织（据世界卫生组织（WHO）及我国卫生部药）及我国卫生部药物不良反应监测中心的统计资料均显示，因用物不良反应监测中心的统计资料均显示，因用药不当而致死者远远高于同期死于各种传染病药不当而致死者远远高于同期死于各种传染病的人数。而用药不当死亡者中，大多是剂量不的人数。而用药不当死亡者中，大多是剂量不当所致。当所致。随着医疗技术整体水平的提高，在随着医疗技术整体水平的提高，
19、在TDM 指导下制定和调整个体化的合理用药方案，是指导下制定和调整个体化的合理用药方案，是药物治疗学发展的必然趋势药物治疗学发展的必然趋势 33ppt课件四 何时需要进行治疗药物监测 34ppt课件35ppt课件q 某些药物的毒副作用表现与某些疾病本某些药物的毒副作用表现与某些疾病本身的症状相似，不能明确辩别时（如地高辛、身的症状相似，不能明确辩别时（如地高辛、速尿等）速尿等）q 长期用药的患者，依从性差；或产生耐长期用药的患者，依从性差；或产生耐药性；药性；以及原因不明的药效变化时以及原因不明的药效变化时q 出现特殊的症状和反应，怀疑是药物中出现特殊的症状和反应，怀疑是药物中毒时毒时 36p
20、pt课件以下情况下无需TDM监测37ppt课件 患者接受监测品种的药物治疗时，是否需患者接受监测品种的药物治疗时，是否需要监测血药浓度，应根据临床具体情况判断。要监测血药浓度，应根据临床具体情况判断。药师应协助临床严格把握药师应协助临床严格把握TDM适应症，避免适应症，避免不必要的不必要的TDM申请申请 五 进行治疗药物监测应注意的问题 1 严格把握严格把握TDM适应症，避免不必要的血适应症，避免不必要的血药浓度测定药浓度测定38ppt课件 2快速提供准确的血药浓度测定结果快速提供准确的血药浓度测定结果 3直接面对临床开展直接面对临床开展TDM工作工作 药师往往同时承担实验室技术人员、临床药药
21、师往往同时承担实验室技术人员、临床药师的双重任务，在做好实验室工作的同时，应深师的双重任务，在做好实验室工作的同时，应深入临床，开展血药浓度的解释、利用工作入临床，开展血药浓度的解释、利用工作 4 具体工作中熟练运用专业技能具体工作中熟练运用专业技能39ppt课件六 监测的药物种类 1 1）强心苷类）强心苷类2 2）抗心律失常药）抗心律失常药3 3）抗癫痫药）抗癫痫药4 4）三环类抗抑郁药、抗狂躁药）三环类抗抑郁药、抗狂躁药5 5）抗哮喘药）抗哮喘药6 6）氨基糖苷类及其他抗生素、抗肿瘤药）氨基糖苷类及其他抗生素、抗肿瘤药7 7）免疫抑制剂及抗风湿药等）免疫抑制剂及抗风湿药等 需要指出的是，滥
22、用需要指出的是，滥用TDM TDM 将造成不必要的浪费，应根据将造成不必要的浪费，应根据监测的原则和临床指征，确定有无必要进行常规化监测监测的原则和临床指征，确定有无必要进行常规化监测40ppt课件需进行需进行TDMTDM的主要药物的主要药物分分 类类 药药 品品强心甙强心甙 地高辛、洋地黄毒苷地高辛、洋地黄毒苷抗心律失常药抗心律失常药 利多卡因、普鲁卡因胺、奎尼丁、乙胺碘呋酮、因卡胺、异丙吡胺等利多卡因、普鲁卡因胺、奎尼丁、乙胺碘呋酮、因卡胺、异丙吡胺等抗癫痫药抗癫痫药 苯妥英铵、苯巴比妥、乙琥胺、卡马西平、丙戊酸钠苯妥英铵、苯巴比妥、乙琥胺、卡马西平、丙戊酸钠 受体阻断剂受体阻断剂 普萘洛
23、尔、美托洛尔、阿替洛尔普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔平喘药平喘药 氨茶碱氨茶碱抗抑郁药抗抑郁药 丙咪嗪、阿米替林、去甲替林等丙咪嗪、阿米替林、去甲替林等抗躁狂症药抗躁狂症药 碳酸锂碳酸锂解热镇痛药解热镇痛药 阿司匹林、对乙酰氨基酚阿司匹林、对乙酰氨基酚抗生素抗生素 庆大霉素、链霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、氯霉素等庆大霉素、链霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、氯霉素等抗恶性肿瘤药抗恶性肿瘤药 甲氯蝶呤等甲氯蝶呤等免疫抑制剂免疫抑制剂 环孢素环孢素利尿药利尿药 呋塞米（速尿）呋塞米（速尿）41ppt课件七 治疗药物监测与体内药物分析的关系l 治疗药物监测的要求促进了体内药物分析治疗药物监测的要求促进了
24、体内药物分析学科的发展学科的发展l 体内药物分析学为治疗药物监测提供分析体内药物分析学为治疗药物监测提供分析方法和技术支持方法和技术支持l 体内药物分析的发展和技术进步反过来促体内药物分析的发展和技术进步反过来促进了治疗药物监测的发展和完善进了治疗药物监测的发展和完善42ppt课件一、生物样品的种类、采集和制备 血液血液(血浆、血清血浆、血清)体现药物浓度和治疗作用之体现药物浓度和治疗作用之间的关系间的关系 最 常 用 的 生 物 样 本最 常 用 的 生 物 样 本生生物物样样品品脏器组织脏器组织体液体液血液血液、尿液、唾液、毛发、乳汁、尿液、唾液、毛发、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、精液
25、、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便等胃液、胰液、淋巴液、粪便等第三节 生物样品的预处理43ppt课件（一）样品的采集1 1血样血样 血样浓度与作用点的浓度密切相关，可以反映靶血样浓度与作用点的浓度密切相关，可以反映靶器官的浓度。器官的浓度。血细胞血细胞血浆（血浆（plasmaplasma）血小板血小板血清（血清（serumserum）血细胞血细胞测定血样中平均分布于细胞内和细胞测定血样中平均分布于细胞内和细胞外的药浓外的药浓抗凝抗凝自然自然全血全血血液血液44ppt课件血样主要应用于：血样主要应用于：u 药物动力学药物动力学u 生物利用度生物利用度u 临床治疗药物浓度监测临床治疗药
26、物浓度监测第三章 生物样品与样品制备第一节 生物样品的种类采集 血样的应用血样的应用45ppt课件2 2尿样尿样 目的目的：药物剂量回收，药物清除：药物剂量回收，药物清除率率，生物利用，生物利用度和，预测药物代谢过程、类型度和，预测药物代谢过程、类型 体内药物清除主要是通过尿液排出，药物以体内药物清除主要是通过尿液排出，药物以原原型、型、相及相及相代谢物相代谢物等多种形式排出等多种形式排出 特点：特点：浓度高，易于收集，体内代谢研究，应浓度高，易于收集，体内代谢研究，应水解分离水解分离46ppt课件3 3唾液唾液 一些药物的唾液药浓一些药物的唾液药浓(S)(S)与血浆游离药浓与血浆游离药浓(P
27、)(P)密切密切相关，因此：相关，因此：TDMTDM中利用对中利用对S S的测定代替对的测定代替对P P的监测的监测药代动力学的研究药代动力学的研究 收集方法收集方法 离心离心 收集收集47ppt课件（二）样品的贮藏1 1血样（血浆、血清）及时分离血样（血浆、血清）及时分离冷藏，冷藏，-7070加入稳定剂加入稳定剂NaFNaF2 2尿样尿样 尿中水、无机盐、尿素等细菌的生长，尿中水、无机盐、尿素等细菌的生长，44保存保存 加入防腐剂加入防腐剂 a a1%1%甲苯甲苯 b b饱和氯仿饱和氯仿 c cpHpH改变改变3 3唾液：同血样唾液：同血样48ppt课件二、生物样品的预处理 存在形式的多样性
28、存在形式的多样性 游离游离 结合结合 代谢物代谢物 浓度低，杂质多（分离浓缩）浓度低，杂质多（分离浓缩）出现浑浊和沉淀出现浑浊和沉淀 与试剂起反应与试剂起反应 影响色谱柱寿命影响色谱柱寿命49ppt课件（二）处理方法选择的一般原则1 1药物理化性质药物理化性质 pKa pKa 亲脂性亲脂性 挥发性挥发性 溶解度溶解度 光谱特光谱特征征 稳定性稳定性2 2浓度范围浓度范围 灵敏的方法灵敏的方法3 3测定的目的测定的目的 定性定性 定量定量 母体母体 代谢代谢4 4生物样品的种类生物样品的种类5 5样品处理与分析方法的选择样品处理与分析方法的选择 专一性专一性 灵敏性灵敏性50ppt课件（三）生物
29、样品去蛋白处理1 1加入与水能混溶的有机溶剂及中性盐加入与水能混溶的有机溶剂及中性盐 甲醇甲醇 乙腈乙腈 甲醇甲醇1:2 1:2 乙腈乙腈1:1.51:1.5 （NHNH4 4）2 2SOSO4 4 NaCl NaCl2 2加入酸性沉淀剂加入酸性沉淀剂 三氯醋酸三氯醋酸 高氯酸高氯酸 苦味酸等苦味酸等 使蛋白使蛋白质分子的阳离子形成不溶性盐而质分子的阳离子形成不溶性盐而，pHpH低于低于等电点等电点51ppt课件3 3组织酶消化法组织酶消化法加入酶使蛋白质水解加入酶使蛋白质水解优点优点：平衡条件下进行，可避免反应和降解平衡条件下进行，可避免反应和降解 可改善对蛋白结合率强的药物的回收率可改善对
30、蛋白结合率强的药物的回收率 不产生乳化不产生乳化4 4其他其他 加热加热 超滤超滤 52ppt课件（四）生物样品中缀合物水解1 1酸水解酸水解 2 2酶水解酶水解 -葡萄糖醛酸苷酶葡萄糖醛酸苷酶 芳基硫酸酯酶芳基硫酸酯酶 混合酶混合酶 pH4.5-7.0 37pH4.5-7.0 373 3溶剂解溶剂解 某些药物的硫酸酯，往往加入率取溶剂时发生某些药物的硫酸酯，往往加入率取溶剂时发生分解，同时提取有机溶剂中分解，同时提取有机溶剂中53ppt课件（五）生物样品的萃取1 1液液-液萃取液萃取（1 1）优点：）优点：与杂质分离与杂质分离 简便简便 浓集浓集 提取率高提取率高（2 2）提取率：在有机相与
31、水相中的溶解度的比）提取率：在有机相与水相中的溶解度的比值分配系数，一般少量多次，对生物样品一般一值分配系数，一般少量多次，对生物样品一般一次萃取，次萃取，70%70%重现性重现性54ppt课件（3 3）影响提取率的因素）影响提取率的因素 pH pH 碱性药物在碱性碱性药物在碱性pH pH 酸性酸性 酸性酸性pHpH 提取溶剂提取溶剂 相似相溶原理相似相溶原理 沸点低，不影沸点低，不影响检测响检测,性质稳定，不起化学反应性质稳定，不起化学反应 离子强度离子强度 加入中性盐加入中性盐 增加离子强度，增加离子强度，与水结合强，便于有机溶剂提取与水结合强，便于有机溶剂提取 55ppt课件（4）离子对
32、提取 对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采用离子对提取用离子对提取原理原理应用应用阴离子：阴离子：COOHCOOH+SO SO3 3H H-反离子反离子 四丁基铵四丁基铵阳离子：阳离子：NHNH2+2+反离子烷基或芳基磺酸盐反离子烷基或芳基磺酸盐（5 5）提取技术）提取技术 一般在试管中进行一般在试管中进行,有机相与水相比有机相与水相比1:11:1或或2:12:156ppt课件（6 6）乳化问题）乳化问题措施措施 轻缓振摇轻缓振摇 含有分散度大或不溶物应过滤掉含有分散度大或不溶物应过滤掉 避免在高避免在高pHpH条件下，从水中提取药物条件下，从水中提取药
33、物 避免使用易发生乳化的溶剂避免使用易发生乳化的溶剂 萃取剂水中加入少量萃取剂水中加入少量NaClNaCl57ppt课件破乳方法破乳方法 机械法机械法 加入少量高级脂肪醇加入少量高级脂肪醇 改变表面张力改变表面张力 改善混合溶剂比例，增加分散相分数改善混合溶剂比例，增加分散相分数（7 7）药物的吸附）药物的吸附 玻璃容器吸附玻璃容器吸附 1%1%三甲一氯硅烷三甲一氯硅烷 10%10%二二甲二氯硅烷甲二氯硅烷 血浆血浆 58ppt课件2液固萃取固相萃取固相萃取solid phase extraction SPEsolid phase extraction SPE针管式针管式 抽空减压抽空减压 加
34、压加压 过滤过滤59ppt课件（1）固相萃取步骤固相选择固相选择 样品样品1ml 1ml规格固相规格固相 125ml 3ml规格固相规格固相固相处理固相处理 反相反相C18 固定相的固定相的610倍体积甲醇洗柱，使溶倍体积甲醇洗柱，使溶剂化；剂化；610倍水缓冲服液冲洗达分离状态倍水缓冲服液冲洗达分离状态上样上样分离分离 用适当的弱溶剂洗涤用适当的弱溶剂洗涤 洗去杂质，通洗去杂质，通N2干干燥固相燥固相洗脱待测物洗脱待测物 改变改变pH或极性或极性 60ppt课件（2）影响固相萃取的因素 流速流速 流速快，按触不充分，样品流失流速快，按触不充分，样品流失 回收率回收率低低 柱处理柱处理 510
35、mlmin-1 洗脱洗脱 0.21mlmin-1（300mg 25mlmin-1（300mg）装样装样 过载过载 突破性试验突破性试验 已知浓度样品液已知浓度样品液 小体积上柱小体积上柱洗脱回收百分率洗脱回收百分率 加大体积加大体积洗脱回收百分率洗脱回收百分率 绘图绘图 当回收率下降时为过载当回收率下降时为过载 61ppt课件（七）（七）衍生化处理衍生化处理 GCGC衍生化衍生化 HPLCHPLC衍生化衍生化62ppt课件第四节 体内药物分析方法的建立与评价一、分析方法一、分析方法 根据药物理化性质，结构特征，药物浓度，根据药物理化性质，结构特征，药物浓度，干扰成分大小，实验目的干扰成分大小，
36、实验目的63ppt课件二、分析方法的设计依据方法的建立方法的建立原始方法改进原始方法改进创新创新创立方法创立方法64ppt课件1 1做好文献总结做好文献总结2 2充分了解药物特征及体内状况充分了解药物特征及体内状况 pHpH、亲脂性、溶解度、极性、光谱特征、药、亲脂性、溶解度、极性、光谱特征、药动学参数、体内代谢情况动学参数、体内代谢情况3 3明确测定目的、要求明确测定目的、要求目的目的药浓监测药浓监测药代动力学研究药代动力学研究母体药物和代谢物母体药物和代谢物4 4结合实验室条件结合实验室条件 设备条件设备条件 预处理方法预处理方法65ppt课件三、分析方法的建立1 1纯品进行测定纯品进行测
37、定 确定线性范围、灵敏度、反应条件（确定线性范围、灵敏度、反应条件（pHpH、t t、T T）2 2空白样品测定空白样品测定 确定空白样品是否有干扰确定空白样品是否有干扰3 3以水代替空白样品，加标准液后测定以水代替空白样品，加标准液后测定 了解提取率、检测浓度了解提取率、检测浓度 确定萃取条件、确定萃取条件、pHpH、挥发浓缩等、挥发浓缩等4 4空白样品加入标准液测定空白样品加入标准液测定 标准曲线建立标准曲线建立 回归方程回归方程 回收率回收率5 5实验样品测定实验样品测定 66ppt课件四、分析方法的评价可行性和可靠性可行性和可靠性 1 1准确度准确度 accuracyaccuracy
38、测定结果与真实性的差异测定结果与真实性的差异 用回收率表示用回收率表示 接近接近100%100%相对恒定相对恒定67ppt课件绝对回收率绝对回收率 也称萃取回收率、提取回收率也称萃取回收率、提取回收率 测定血浆样品中药物浓度测定血浆样品中药物浓度/相同浓度的标准液相同浓度的标准液=绝对回收率绝对回收率 考虑考虑3 3个浓度（高、中、低）个浓度（高、中、低）分布在标准曲线分布在标准曲线成上、中、下成上、中、下一般要求绝对回收率在一般要求绝对回收率在70%70%一般方法一般方法 HPLCHPLC内标内标 内标法时注意：药物与内标用各自外标法测定回内标法时注意：药物与内标用各自外标法测定回收率应相近
39、，差值收率应相近，差值10%10%68ppt课件 相对回收率相对回收率方法回收率方法回收率药物系列浓度药物系列浓度+血样血样标准曲线标准曲线 取高、中、低三浓度加入到空白血浆中，取高、中、低三浓度加入到空白血浆中，处理后测定，与加入标准量相比，得方法回收处理后测定，与加入标准量相比，得方法回收率，测定值率，测定值15%15%，定量限，定量限20%20%注意问题：注意问题：a a加入药量与实际测定值相近加入药量与实际测定值相近 b b加入物与实际存在状态相近加入物与实际存在状态相近 c c空白试验空白试验 与已确定方法进行比较与已确定方法进行比较69ppt课件2精密度precision标准差标准
40、差SDSD相对标准性偏差相对标准性偏差 RSDRSD不大于不大于15%15%，定量限不大于，定量限不大于20%20%日间精密度日间精密度日内精密度日内精密度70ppt课件3灵敏度（sensitivity）检测的最小量（1 1）检测限（）检测限（LODLOD）从背景中检测到的最小药物浓度：从背景中检测到的最小药物浓度：S/N3S/N3的绝的绝对量对量 LOD=3N/S LOD=3N/S （N N噪间噪间 S S被测物信号被测物信号/单位重量）单位重量）N=1mm N=1mm 取取2gml2gml样品，样品，20l20l进样进样 峰高度峰高度30mm30mm LOD=4ng LOD=4ng71pp
41、t课件（2）定量限）定量限(LOQ)在一定精密度和准确度前提下求得最低检测在一定精密度和准确度前提下求得最低检测量，通常以标准曲线最低点作为一定量限，也量，通常以标准曲线最低点作为一定量限，也可可S/N=10作为定量限，实际测定时，满足作为定量限，实际测定时，满足35个半衰期浓度，或个半衰期浓度，或Cmax1/101/2072ppt课件（3 3）最低检测浓度）最低检测浓度 可以进行定量测定的某一药物的最低浓度，可以进行定量测定的某一药物的最低浓度，它与样品体积大小等因素有关它与样品体积大小等因素有关最低检测浓度最低检测浓度=LOQ/=LOQ/进样体积进样体积体内浓度检测限体内浓度检测限=仪器浓
42、度检测限仪器浓度检测限稀释度稀释度 1ml0.1ml 1ml0.1ml 体内检测限体内检测限=仪仪0.10.1 1ml10ml 1ml10ml 体内检测限体内检测限=仪仪101073ppt课件20世纪世纪60年代年代 临床药理学与生物药剂学临床药理学与生物药剂学的建立的建立70年代初年代初 体内药物分析在国外开始建立体内药物分析在国外开始建立70年代末年代末 血药浓度监测广泛用于临床血药浓度监测广泛用于临床 80年代年代 体内药物分析学科雏形基本形成体内药物分析学科雏形基本形成体内药物分析的发展概况74ppt课件国内发展概况国内发展概况：在在70年代末受到关注年代末受到关注 1979年有年有“
43、体内药物分析刍议体内药物分析刍议”一文的提出一文的提出 1981年在年在“中国药学会药物分析第一次学术中国药学会药物分析第一次学术会议会议”大会学术报告，引起了广泛的关注和兴趣大会学术报告，引起了广泛的关注和兴趣 80年代中期，一些高等医药院校开始为本科年代中期，一些高等医药院校开始为本科生、硕士研究生开设生、硕士研究生开设体内药物分析体内药物分析课程课程75ppt课件学科热点问题&游离型血药浓度测定方法研究游离型血药浓度测定方法研究&血中游离型药物浓度（血中游离型药物浓度（F）与总浓度（）与总浓度（T）的）的比率（比率（F/T）及唾液与血液游离浓度的比率（）及唾液与血液游离浓度的比率（S/P）以及它们之间的相关性的研究以及它们之间的相关性的研究&代谢物的监测与研究代谢物的监测与研究76ppt课件&对映体的监测与研究对映体的监测与研究&体内微量元素的测定与研究体内微量元素的测定与研究&方便、快捷的样品制备方法与样品直接进样方便、快捷的样品制备方法与样品直接进样分析的研究分析的研究&分析新方法、新技术的联用研究分析新方法、新技术的联用研究&体内药物分析方法的质量控制研究体内药物分析方法的质量控制研究77ppt课件78ppt课件
