1、 第11章 弯曲菌与螺杆菌弯曲菌属与螺杆菌属 弯曲菌目（弯曲菌目（CampylobacteraleCampylobacterale）弯曲菌科弯曲菌科 螺杆菌科螺杆菌科 （CampylobacteraceaeCampylobacteraceae）（HelicobacteraceaeHelicobacteraceae）弯曲菌属弯曲菌属 螺杆菌属螺杆菌属 （CampylobacterCampylobacter）（HelicobacterHelicobacter）弯曲菌属（Campylobacter）分类弯曲菌原归属于弧菌属，弯曲菌原归属于弧菌属，19731973年正式命名为弯曲菌属。年正式命名为弯曲
2、菌属。20052005年的伯杰手册中将其分为年的伯杰手册中将其分为3030个种个种(亚种亚种)临床意义分布：分布：广泛分布于温血动物广泛分布于温血动物自然界的任何水中都可能含有弯曲菌自然界的任何水中都可能含有弯曲菌 所致病：所致病：空肠弯曲菌主要引起肠道感染空肠弯曲菌主要引起肠道感染胎儿弯曲菌胎儿弯曲菌主要引起主要引起肠外感染肠外感染。空肠弯曲菌：空肠弯曲菌：感染来源：感染来源：感染动物的粪便、未经处理的感染动物的粪便、未经处理的 水和牛乳等。水和牛乳等。传播途径：传播途径：以食物和水的传播为多见。以食物和水的传播为多见。传播方式：传播方式：经口摄入。经口摄入。可能的致病物质：可能的致病物质：
3、细胞毒素细胞毒素，包括细胞致死性肿胀毒素，志贺样毒，包括细胞致死性肿胀毒素，志贺样毒素和溶血毒素等。素和溶血毒素等。内毒素和肠毒素内毒素和肠毒素致病部位及表现：致病部位及表现：感染部位通常在空肠、回肠，也可蔓延到结肠。感染部位通常在空肠、回肠，也可蔓延到结肠。腹泻大多为水样便，小部分为脓血黏液便。腹泻大多为水样便，小部分为脓血黏液便。生物学特性 形态染色形态染色革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、S S形、螺旋形形、螺旋形或典型的海鸥展翅形，陈旧培养物可呈球形或长丝或典型的海鸥展翅形，陈旧培养物可呈球形或长丝状。状。无芽胞、无荚膜、一端或两端有单鞭毛，运动非常无芽胞
4、、无荚膜、一端或两端有单鞭毛，运动非常活泼。活泼。空肠弯曲菌革兰染色空肠弯曲菌鞭毛（扫描电镜）生物学特性抗原：抗原：菌体菌体(O)(O)抗原：血清分型的基础抗原：血清分型的基础热不稳定抗原热不稳定抗原(heatlabile antigen)(heatlabile antigen)鞭毛鞭毛(H)(H)抗原抗原 生物学特性 培养特性：培养特性：微需氧菌微需氧菌，最佳气体环境为，最佳气体环境为5%O5%O2 2,10%CO,10%CO2 2和和85%N85%N2 2最适生长温度最适生长温度因菌种而异因菌种而异 -空肠空肠/大肠弯曲菌最适生长温度大肠弯曲菌最适生长温度4242 -胎儿弯曲菌于胎儿弯曲菌
5、于2525和和3737均可生长均可生长营养要求高营养要求高：常用布氏肉体增菌，布氏血平板培养：常用布氏肉体增菌，布氏血平板培养菌落特征：有两种菌落特征：有两种灰白色扁平湿润边缘不整齐蔓延生长的菌落灰白色扁平湿润边缘不整齐蔓延生长的菌落（迁徙生长迁徙生长）无色半透明圆形凸起有光泽的小菌落无色半透明圆形凸起有光泽的小菌落空肠弯曲菌在巧克力平板上的菌落生物学特性生化反应：生化反应：生化反应不活泼，不能利用糖类，以氨基酸为能量生化反应不活泼，不能利用糖类，以氨基酸为能量来源。来源。氧化酶和触酶阳性，硝酸盐还原（氧化酶和触酶阳性，硝酸盐还原（+）尿素（尿素（-）、硫化氢（）、硫化氢（-）。）。生物学特性
6、抵抗力：抵抗力：对外环境抵抗力不强；对外环境抵抗力不强；不耐干燥，对热和巴氏消毒敏感；不耐干燥，对热和巴氏消毒敏感；对酸性环境和消毒剂敏感对酸性环境和消毒剂敏感,对对氧氧也非常敏感。也非常敏感。微生物检验程序 血液、脑脊液血液、脑脊液 粪便、肛拭子粪便、肛拭子 直接检测直接检测 增菌增菌 （布氏肉汤布氏肉汤）动动力检查力检查 直接镜检直接镜检 7 7天不生长天不生长 生长生长 分离培养（分离培养（布氏平板布氏平板）（多块选择平板）（多块选择平板）弃去弃去 微需氧环境微需氧环境 2525、3737、4242 24 2472h72h 可疑菌落可疑菌落 涂片染色镜检涂片染色镜检 纯纯培养（布氏血琼脂
7、）培养（布氏血琼脂）鉴定鉴定微生物检验 标本采集标本采集 采取新鲜粪便与肛拭子、血液、脑脊液等立即送检。采取新鲜粪便与肛拭子、血液、脑脊液等立即送检。如不能及时送检应种入如不能及时送检应种入Cary-BlairCary-Blair运送培养基，放运送培养基，放44冰冰箱保存。箱保存。标本直接检查直接显微镜检查直接显微镜检查 粪便与肛拭子可直接镜检：特殊形态和运动。粪便与肛拭子可直接镜检：特殊形态和运动。核酸检测核酸检测 PCRPCR方法直接检测粪便标本中的弯曲菌，方法直接检测粪便标本中的弯曲菌，分离培养与鉴定 分离培养分离培养 粪便或肛拭标本：直接接种改良粪便或肛拭标本：直接接种改良Campy-
8、BAPCampy-BAP选择平板选择平板 血、脑脊液标本：布氏肉汤增菌后转种分离培养基血、脑脊液标本：布氏肉汤增菌后转种分离培养基 微氧环境培养微氧环境培养 不同细菌培养温度不同不同细菌培养温度不同 鉴定要点：鉴定要点：形态培养特征形态培养特征 革兰阴性，菌体弯曲或呈革兰阴性，菌体弯曲或呈S S形，动力形，动力(+)(+)氧化酶氧化酶(+)(+)生长温度生长温度 (25(25、3737、42)42)试验；试验；奈啶酸、头孢唑啉敏感试验奈啶酸、头孢唑啉敏感试验 空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢唑啉耐药；胎儿弯曲菌对奈啶酸耐药、对头孢唑啉敏感。空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢唑啉耐药；胎儿弯曲菌对奈啶
9、酸耐药、对头孢唑啉敏感。马尿酸盐水解试验马尿酸盐水解试验凡马尿酸盐水解试验阳性、凡马尿酸盐水解试验阳性、42生长、氧化酶生长、氧化酶阳性、与镜检形态相符者，即可报告阳性、与镜检形态相符者，即可报告空肠弯曲空肠弯曲菌空肠亚种菌空肠亚种 醋酸吲哚水解试验醋酸吲哚水解试验空肠弯曲菌阳性，胎儿弯曲菌阴性空肠弯曲菌阳性，胎儿弯曲菌阴性l 免疫学方法免疫学方法 胶乳凝集胶乳凝集 酶免疫方法测定粪便中弯曲菌抗原酶免疫方法测定粪便中弯曲菌抗原 血清中抗体测定用于流行病学调查血清中抗体测定用于流行病学调查l DNA DNA探针和探针和PCRPCR扩增扩增 Key Points革兰阴性逗点状或革兰阴性逗点状或S
10、S形的菌形的菌,运动活泼运动活泼 微需氧：最佳生长环境为含微需氧：最佳生长环境为含5%O5%O2 2、10%CO10%CO2 2、85%N85%N2 2 最适生长温度因菌种而异最适生长温度因菌种而异 营养要求高营养要求高 氧化酶、触酶阳性，不能利用、不发酵各种糖类，氧化酶、触酶阳性，不能利用、不发酵各种糖类，硝酸盐还原（硝酸盐还原（+），脲酶（），脲酶（-）主要通过食物和水经口传播。主要通过食物和水经口传播。CAMPYLOBACTERCampylobacterCampylobacter are are Gram-negative,Gram-negative,microaerophiles,wh
11、ich means that they can microaerophiles,which means that they can survive in a low oxygen environment.survive in a low oxygen environment.What is unusual about the organism,though,is What is unusual about the organism,though,is that it also prefers a relatively high that it also prefers a relatively
12、 high concentration of carbon dioxide in the concentration of carbon dioxide in the environment.You can imagine the difficulty of environment.You can imagine the difficulty of producing an environment suitable for culturing producing an environment suitable for culturing this organism.this organism.
13、The most commonly isolated The most commonly isolated species of species of CampylobacterCampylobacter is is C.C.jejunijejuni,an organism that causes,an organism that causes gastrointestinitis.Humans gastrointestinitis.Humans acquire the organisms by eating acquire the organisms by eating undercooke
14、d chicken or drinking undercooked chicken or drinking contaminated milk and water.contaminated milk and water.螺杆菌属（Helicobacter）诺贝尔生理学和医学奖19831983年年MarshallMarshall和和WarrenWarren首先用微需氧技术从慢性胃炎、首先用微需氧技术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃黏膜分离出弯曲状的细菌，并证明消化性溃疡患者的胃黏膜分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃
15、疡，由此获得了由此获得了20052005年诺贝尔生理学和医学奖。年诺贝尔生理学和医学奖。分类弯曲菌目（弯曲菌目（CampylobacteraleCampylobacterale）螺杆菌科（螺杆菌科（HelicobacteraceaeHelicobacteraceae）螺杆菌属（螺杆菌属（HelicobacterHelicobacter）幽门螺杆菌幽门螺杆菌(Helicobacter pyloriHelicobacter pylori,Hp),Hp)曾命名为曾命名为幽门弯曲菌幽门弯曲菌(campylobacter campylobacter pyloripylori)临床意义高度适应或只能生活于
16、胃黏膜的细菌高度适应或只能生活于胃黏膜的细菌,胃窦为其胃窦为其定植的最佳部位。定植的最佳部位。菌体周围微环境的菌体周围微环境的pHpH值为值为7.07.0。HPHP感染与感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎有关。有关。胃癌胃癌发病率在一些发病率在一些HpHp感染率高的人群中较高。感染率高的人群中较高。HP致病机制 尚不清楚，可能与下列因素有关：尚不清楚，可能与下列因素有关：特殊的特殊的螺旋状和端鞭毛螺旋状和端鞭毛有利于有利于HpHp穿透穿透 具有高活性胞外具有高活性胞外脲酶脲酶分解尿素，产生氨中和菌体周围胃酸，分解尿素，产生氨中和菌体周围胃酸，有助于细菌定植有助于细菌定植
17、 细胞毒素相关蛋白（细胞毒素相关蛋白（CagACagA）和空胞毒素（）和空胞毒素（VacAVacA）生物学特性 形态结构：形态结构：革兰染色阴性。革兰染色阴性。菌体细长弯曲呈螺形、菌体细长弯曲呈螺形、S S形或海鸥形。形或海鸥形。固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出现杆状或圆球状。现杆状或圆球状。菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。幽门螺杆菌革兰染色幽门螺杆菌端鞭毛（示意图）培养特征：培养特征：微需氧：微需氧：5%O 5%O2 2、10%CO10%CO2 2、85%N85%N2 2最适生长温度：最适
18、生长温度：353537 37 高湿度环境：湿度大于高湿度环境：湿度大于98%98%营养要求高：特殊血平板生长营养要求高：特殊血平板生长 菌落特征：无色半透明、圆形、“露滴样”小菌落，轻度溶血扁平、融合成片，沿穿刺线扩散生长 生化反应不活跃，不能利用糖类、马尿酸水解（-）脲酶强（+）、氧化酶和触酶（+）幽门螺杆菌在血平板上菌落微生物检验程序 胃、十二指肠活检标本胃、十二指肠活检标本 血清血清,胃液胃液 显微镜显微镜 PCR PCR 分离培分离培养养 血清检测血清检测 检查检查 快速脲快速脲 酶试验酶试验 微需氧微需氧,高湿度高湿度革革 病理病理 免疫免疫 25 25、35,42 IgG SIgA
19、35,42 IgG SIgA兰兰 切片切片 组化组化 3 37 7天天 染染 特殊特殊 色色 染色染色 2525 不生长不生长 3535生长生长 4242不生长不生长 初报初报 可疑菌落可疑菌落 革兰染色、氧化酶（革兰染色、氧化酶（+）触酶（触酶（+）动力（动力（+）生化反应生化反应 报告报告微生物检验微生物检验 标本采集标本采集经胃镜活检胃部病变组织经胃镜活检胃部病变组织床边接种或放入床边接种或放入Stuarts转运培养基内转运培养基内 ，44中保存不超过中保存不超过24h24h受检者术前应停服铋剂或抗菌药物一周受检者术前应停服铋剂或抗菌药物一周标本直接检查 1.1.直接显微镜检查直接显微镜
20、检查 涂片或悬滴观察涂片或悬滴观察 直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检 组织切片染色镜检组织切片染色镜检切片经切片经W-S银染色、姬姆萨染色、银染色、姬姆萨染色、HE染色和荧染色和荧光染色等，染色后镜检光染色等，染色后镜检Hp，以，以W-S银染效果最银染效果最好。好。免疫组化免疫组化 间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIFIIF）2.2.快速脲酶试验快速脲酶试验 尿素培养基检测尿素培养基检测 3.3.核酸检测核酸检测 4.4.粪便标本粪便标本HpHp抗原检测抗原检测分离培养与鉴定 分离培养分离培养 宜用新鲜配制的选择培养基。将标本的粘膜面在平板上反复涂擦，或将标本研碎后用研宜用新鲜配制的选择培养
21、基。将标本的粘膜面在平板上反复涂擦，或将标本研碎后用研磨棒蘸取适量匀浆接种磨棒蘸取适量匀浆接种 将接种后的平板放入微需氧和将接种后的平板放入微需氧和98%98%以上湿度的环境培养以上湿度的环境培养鉴定鉴定 形态和染色性形态和染色性 菌落特征，菌落特征，3535生长生长 氧化酶和触酶（氧化酶和触酶（+）、脲酶强（）、脲酶强（+）萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感）萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感 在在1%1%甘油和甘油和1%1%胆盐中均不生长胆盐中均不生长抗体检测用血清学方法检测患者体内的抗用血清学方法检测患者体内的抗HpHp抗体抗体（IgGIgG、IgMIgM和和IgAIgA）系最常用的无创伤性诊）系最常用的无
22、创伤性诊断断HpHp感染的方法感染的方法补体结合试验补体结合试验胶乳凝集试验胶乳凝集试验ELISA:ELISA:应用最为广泛应用最为广泛13C或14C标记尿素呼吸试验基本方法是患者禁食一夜，进食用基本方法是患者禁食一夜，进食用1313C C或或1414C C标标记的尿素，记的尿素，HpHp产生的脲酶分解尿素释放产生的脲酶分解尿素释放1313COCO2 2或或1414COCO2 2，因此可测定患者呼气中释放带有标因此可测定患者呼气中释放带有标记的记的COCO2 2量，如量，如COCO2 2含量超过标准，提示有含量超过标准，提示有HpHp存在。存在。Key Points革兰阴性弯曲菌，动力（革兰阴
23、性弯曲菌，动力（+）微氧高湿度培养环境，营养要求较高微氧高湿度培养环境，营养要求较高氧化酶和触酶（氧化酶和触酶（+）、脲酶强（）、脲酶强（+）HELICOBACTERThe The HelicobacterHelicobacter genus features genus features：Gram-negative,micraerophilic Gram-negative,micraerophilic organisms that are very similar organisms that are very similar to organisms of the to organisms
24、 of the CampylobacterCampylobacter genus.genus.Sufficient colony growth Sufficient colony growth can be seen in three days can be seen in three days when the organism is plated when the organism is plated onto onto BrucellaBrucella-sheep blood-sheep blood a g a r a n d p l a c e d i n a a g a r a n
25、d p l a c e d i n a microaerophilic environment.microaerophilic environment.A Gram-stain will reaveal weakly A Gram-stain will reaveal weakly stained rod with a unique curvature.stained rod with a unique curvature.Helicobacter pyloriHelicobacter pylori is also strongly is also strongly urease-positive,which may help in urease-positive,which may help in identification.identification.LABORATORY INDICATIONSLABORATORY INDICATIONS(H.pyloriH.pylori)Urease+Urease+Catalase+Catalase+Motile Motile Microaerophile Microaerophile
