1、实验二实验二芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.概概 述述v黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物。其不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这类合物。其不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这类含有氧杂环的化合物多存在于高等植物及羊齿类植物中。含有氧杂环的化合物多存在于高等植物及羊齿类植物中。v黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以苷的形式存在，而黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以苷的形式存在，而在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在。在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在。v黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难
2、溶于酸性水，易黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再将碱水提取液调成酸性，溶于碱性水，故可用碱性水提取，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便易行，芦丁、橙皮苷、黄黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便易行，芦丁、橙皮苷、黄芩苷提取都应用此法。芩苷提取都应用此法。芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.一一 实验目的实验目的v实验目的：实验目的：通过芦丁的提取与精制掌握碱通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的酸法提取黄酮类化合物的原理及操作原理及操作通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和通过芦丁结构的检识，了解苷类结
3、构研究的一般程序和方法方法了解了解UVUV及及NMRNMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用在黄酮类化合物结构鉴定中的应用v实验要求实验要求获得三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰物获得三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰物能根据化学实验及能根据化学实验及UVUV、NMRNMR数据初步推断出芦丁的结构。数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.v芦丁广泛存在于植物中，现已发现含芦丁的植物达70种以上，本实验以槐花米为原料提取芦丁。v由槐米提取芦丁的方法有水或醇浸提法，热、冷碱浸提酸沉法，每
4、法各有优缺点。前者所需时间长，后者有一定水解产物存在。为克服这些缺点，已多采用超声提取，利用强力超声波发生“空化”现象的瞬间所产生的强大冲击力，使药材组织中的分子在不被破坏结构的情况下，更快的与组织剥离，继而分散溶解在溶剂中，从而提高溶出的速度和溶出率.v（1）利用芦丁可溶于热水，难溶于冷水的性质进行提取；再利用芦丁在热乙醇和冷乙醇中溶解度差异较大的性质进行精制。v（2）利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过纸色谱和薄层色谱进行检识.OHOOHOOOHOHOOHOHOHCH2OOOHOHOHOAcOOAcOOOAcOAcOOAcOAcOAcCH2OOOAcOAcOAc槲皮素芦丁芦丁十乙酰化物
5、OHOOHOOHOHOH57334芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.v三、实验试剂与器材三、实验试剂与器材v实验材料：槐米、槲皮素和芦丁标准品v试剂：蒸馏水、碳酸钙、浓盐酸、镁粉、pH试纸、1%氢氧化钠、浓硫酸、萘酚试剂、50%乙醇、1%三氯化铝甲醇试剂、1%醋酸镁甲醇试剂、1%槲皮素标准品；1%芸香甙标准品、正丁醇、冰醋酸、水、苯胺邻苯二甲酸试剂、石灰乳、硼砂。v仪器：500ml烧杯、研磨、脱脂棉、滤纸、布氏漏斗、吸滤瓶、广口瓶、试管、玻璃棒、200mL烧杯、100mL烧杯、滴管、硅胶薄层板、量筒、层析缸、硅胶薄层板、循环水多用真空泵电子天平、电热套 等。.四、实验流程四、实验流程搅
6、拌下加搅拌下加入石灰乳入石灰乳加水加水300ml300ml槐花米槐花米（15g15g）调节调节PH8-9PH8-9直火加直火加热热保持微保持微沸沸30min30min双层滤纸趁双层滤纸趁热抽滤热抽滤滤液滤液残渣残渣在在60-7060-70度下，用度下，用浓盐酸调浓盐酸调PH3-4PH3-4静置静置提提取取芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.定定性性反反应应盐酸盐酸-镁粉反应镁粉反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴乙醇，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，加几滴浓盐酸，1-2min1-2min内，观察颜色变化。内，观察颜色变化。MolishMolish反应反应 将
7、样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入等体积乙醇，加入等体积10%-10%-萘酚萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。意观察两界面产生的变化。黄酮母核黄酮母核苷类苷类芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.黄黄酮酮苷苷的的水水解解第一次实验所得滤液第一次实验所得滤液滤液滤液沉淀（粗品芦丁）沉淀（粗品芦丁）均分均分2 2份份重结晶重结晶水解水解抽滤抽滤按按1 1：6060量加入蒸馏水，沉量加入蒸馏水，沉淀悬浮于蒸馏水中，加热淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸煮沸1515分钟后，趁热抽滤分钟后，趁热抽滤残渣残渣滤液滤液冷却，静置
8、冷却，静置精制芦丁（备用）精制芦丁（备用）按按1 1：7070量加入量加入2%2%硫硫酸，加热酸，加热40min40min，放，放冷静置，抽滤冷静置，抽滤沉淀沉淀滤液滤液干燥干燥槲皮素（备用）槲皮素（备用）糖鉴定糖鉴定芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.糖糖的的鉴鉴定定水解所得滤液水解所得滤液用用Ba(OH)Ba(OH)2 2乳调乳调PHPH值至中性，值至中性，折叠滤纸过滤折叠滤纸过滤1.5g Ba(OH)1.5g Ba(OH)2 2加加10ml10ml水水残渣残渣滤液滤液蒸干，放冷蒸干，放冷加加1ml95%1ml95%乙醇溶解乙醇溶解样品溶液样品溶液纸色谱纸色谱芦丁的提取与定性反应芦丁
9、的提取与定性反应.糖糖的的纸纸色色谱谱鉴鉴定定标准品：葡萄糖、鼠李糖标准品：葡萄糖、鼠李糖展开剂：展开剂：BAWBAW（4 4：1 1：5 5）显色剂：邻苯二甲酸苯胺显色剂：邻苯二甲酸苯胺点样点样层析层析芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.芦芦丁丁的的全全乙乙酰酰化化芦丁芦丁 0.1g0.1g加入加入2ml2ml无水吡啶无水吡啶加入加入8ml8ml醋酐醋酐反应液反应液直火，水浴上回流直火，水浴上回流30min30min，放冷，搅拌，放冷，搅拌下将反应液倒入下将反应液倒入70ml70ml水中，一直搅拌水中，一直搅拌到油滴消失，白色沉淀析出为止到油滴消失，白色沉淀析出为止反应液反应液抽滤，干
10、燥抽滤，干燥反应物反应物防防 水水芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.聚聚酰酰胺胺薄薄层层色色谱谱样品：分别取少量芦丁、槲皮素、芦丁的十乙酰样品：分别取少量芦丁、槲皮素、芦丁的十乙酰 化物用化物用1ml95%1ml95%乙醇溶解乙醇溶解展开剂：展开剂：75%75%乙醇乙醇 10ml10ml显色剂：氨水，显色剂：氨水，2%AlCl2%AlCl3 3/EtOH/EtOH颜色颜色氨水熏氨水熏AlClAlCl3 3 喷雾喷雾R Rf f值值日光日光UVUV日光日光UVUV日光日光UVUV标标准准品品芦丁芦丁槲皮素槲皮素样样品品芦丁芦丁槲皮素槲皮素芦丁酰化物芦丁酰化物观察记录观察记录芦丁的提取与定
11、性反应芦丁的提取与定性反应.定定性性反反应应盐酸盐酸-镁粉反应镁粉反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴乙醇，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，加几滴浓盐酸，1-2min1-2min内，观察颜色变化。内，观察颜色变化。MolishMolish反应反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入等体积乙醇，加入等体积10%-10%-萘酚萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。意观察两界面产生的变化。黄酮母核黄酮母核苷类苷类样品：少量芦丁、槲皮素样品：少量芦丁、槲皮素芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定
12、性反应.2%2%二氯氧锆二氯氧锆-柠檬酸反应柠檬酸反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入乙醇，加入2%二氯氧锆二氯氧锆-柠檬柠檬酸溶液，摇匀，观察颜色变化。将反应液均分成酸溶液，摇匀，观察颜色变化。将反应液均分成两份，向其中一份滴加柠檬酸甲醇溶液，另一部两份，向其中一份滴加柠檬酸甲醇溶液，另一部分加等量醇溶液作对照。比较颜色变化。分加等量醇溶液作对照。比较颜色变化。3-OH，5-OH定定性性反反应应OHOOHOOHOHOH57334ZrOClH2O稳定性：稳定性：3-OH3-OH络合物络合物5-OH5-OH络合物络合物芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.实验注意事项实验注意事项
13、v芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢v加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但pH值不能过高，值不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出vpH值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（最佳值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（最佳pH值为值为5）芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.思考题思考题v1黄酮类化合物有哪些提取方法？本实验黄酮类化合物有哪些提取方法？本实验为什么用沸水煮提？为什么用沸水煮提？v2分析在芦丁水解过程中观察到的现象。分析在芦丁水解过程中观察到的现象。v3本实验中各色谱的原理是什麽？分析化本实验中各色谱的原理是什麽？分析化合物结构与合物结构与Rf值的关系。值的关系。v4.如何利用芦丁制备生产槲皮素和鼠李糖。如何利用芦丁制备生产槲皮素和鼠李糖。芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应.
