1、Gao第章药物的鉴别试验二、鉴别试验的项目 性状性状-反映了药物特有的物理性质，包括:外观聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。溶解度在一定程度上反映了药品的纯度。物理常数（相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数）。鉴别性状(description)鉴别(identification)真伪真伪纯度纯度表示方法 使1g或1mL溶质溶解的溶剂体积极易溶解 1mL易溶 110mL 溶解 1030 mL略溶 30100 mL 微溶 1001000 mL 极微溶解 100010000 mL几乎不溶或不溶 10000 mL中不能完全溶解例 磺胺嘧啶 “在乙醇或
2、丙酮中微溶，在水中几乎不溶；在氢氧化钠试液中易溶，在稀盐酸中溶解”。熔点熔点由固体熔化成液体的温度由固体熔化成液体的温度熔融同时分解的温度熔融同时分解的温度熔化时自初熔至全熔的一段温度熔化时自初熔至全熔的一段温度物理常数物理常数初熔初熔全熔全熔 熔融同时分解熔融同时分解 样品受热达到一定温度时样品受热达到一定温度时 产生气泡、变色或浑浊产生气泡、变色或浑浊 初熔初熔 样品开始局部液化、出现明显液滴样品开始局部液化、出现明显液滴 全熔全熔 样品全部液化样品全部液化中国药典收载有三种测定方法第一法：测定易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品第三法：测定凡士林或其他类似物质要求报告初熔和终熔
3、例 甲基炔诺酮：“本品的熔点为204212”；溴化新斯的明：“本品的熔点为171176，熔融时同时分解”。比旋度-在一定波长（589.3nm）与温度（20C）下，偏振光透过长1dm1dm且每1mL中含有旋光性物质1g的溶液(1g/ml)时测得的旋光度 tD=100/CL例 维生素C的比旋度测定：“取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释使成每1mL中约含0.10g的溶液，依法测定，比旋度为20.5至21.5”。物理常数物理常数钠光谱钠光谱D线线（589.3nm）EclA 摩尔吸收系数摩尔吸收系数C=1mol/Ll=1cm百分吸收系数百分吸收系数%1cm1EC=1%(g/100ml)l=1cm物理常
4、数物理常数 吸收系数-在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。例 盐酸甲氧明：“取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含30g的溶液，照分光光度法，在290nm的波长处测定吸收度，吸收系数（E1%1cm）为133141”。一般鉴别试验一般鉴别试验 依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。无机药物-根据其组成的阴离子和阳离子的特殊反应。有机药物-采用典型的官能团反应。无机药物-阴、阳离子的特殊反应。包括：钠盐、钾盐、钙盐、钡盐、铵盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、氯化物等离子的鉴别 例 钠盐、钾盐、钙盐的焰色
5、反应 取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显各离子的特征颜色：钠离子显鲜黄色鲜黄色，钾离子显紫色紫色，钙离子显砖红色砖红色。测定原理 钠火焰光谱：589.0nm、589.6nm黄色钾火焰光谱：766.49nm、769.90nm 紫色 粉红色（蓝色钴玻璃）钙火焰光谱：622nm、554nm、442.67nm 与602 nm 显砖红色（622nm）铵盐鉴别方法 取供试品，加过量氢氧化钠试 液，加热，即分解，发生氨臭；遇湿润的红色石蕊试纸，能使之 变蓝，并能使硝酸亚汞试液湿润 的滤纸显黑色。测定原理为：NH4+OH-NH3H2ONH34Hg2(NO3)2H2OOHgHgNH2N
6、O32Hg3NH4NO32 氯化物 鉴别 供试液 硝酸 硝酸银 白色 白色 氨试液沉淀溶解 硝酸 白色 硫酸盐 鉴别 供试液 氯化钡 白色 白色 硝酸（盐酸）沉淀不溶有机药物典型的官能团反应 有机氟化物类、丙二酰脲类、芳香第一胺类、有机酸盐、托烷生物碱类等鉴别。例 有机氟化物鉴别有机破坏：样品经氧瓶燃烧法破坏，被碱性溶液吸收成为无机氟化物 鉴别反应：与茜素氟蓝、硝酸亚铈在pH4.3溶液中形成篮紫色络合物。反应原理如下：OOOHOHFCH NCH CH COOHCOOHCe3+pH4.3OOOHOCH NCH CH COOCOOCeFOH（蓝紫色）（茜素氟蓝）水杨酸三氯化铁反应三氯化铁反应 在在
7、中性或弱酸性中性或弱酸性条件下，水杨酸和试液生成条件下，水杨酸和试液生成配位化合物，在中性时呈红色，弱酸性时呈配位化合物，在中性时呈红色，弱酸性时呈紫色。紫色。反应原理如下：COOHOH64FeCl3+COO-O-2Fe3Fe12HCl酒石酸盐：银镜反应 取供试品的中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银即游离并附在试管内壁成银镜。反应原理：CHCHCOOHCOOHHOHO2 Ag(NH3)2OH2Ag +CCCOONH4COONH4HOHONH32H2O2注：一般鉴别试验只能证实是某一类某一类药物，不能证实是某一种某一种药物。专属鉴别试验（specific ident
8、ification test）是证实某一种药物的依据。根据每一种药物化学结构的差异及其所引起根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。的定性反应，来鉴别药物的真伪。例 巴比妥类药物含有共同母核，区别在于5，5-位取代基和2-位取代基的不同：苯巴比妥-苯环司可巴比妥-双键硫喷妥钠-硫原子又如甾体激素类药物含有环戊烷并多氢菲母核，主要差别在A环和D环的取代基不同，可利用这些结构特征进行鉴别确证。一般鉴别试验，以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别，以区别不同
9、类别的药物。专属鉴别试验，则是在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。3.生物学生物学法法2.物理化学法物理化学法1.化学法化学法颜色、颜色、衍生物、衍生物m.p.光谱法光谱法 UV、IR色谱法色谱法 TLC、HPLC微生物、动微生物、动物物常见鉴别反应收载在常见鉴别反应收载在中国药典中国药典附录附录常见金属离子、酸根、官能团常见金属离子、酸根、官能团“一般鉴别试验一般鉴别试验”三、鉴别方法化学鉴别法：操作简便、反应迅速、现象明操作简便、反应迅速、现象明显，实验成本低，应用广，但专属性比仪器
10、分显，实验成本低，应用广，但专属性比仪器分析法差析法差呈色反应呈色反应-指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应类型有：颜色、颜色、衍生物、衍生物m.p.三氯化铁呈色反应-含有酚羟基或水解后产生酚羟基；异羟肟酸铁反应-为芳酸及其酯类、酰胺类；茚三酮呈色反应-化学结构中含有脂肪氨基；重氮化-偶合显色反应-芳伯氨基或能产生芳伯氨基；氧化还原显色反应及其它颜色反应。沉淀反应 系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成不同颜色的沉淀，有的具有特殊的沉淀形状。与重金属离子的沉淀反应：在一定条件下，药物和重金属离子反应，
11、生成不同形式的沉淀；与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应：这类药物多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐；其它沉淀反应。荧光反应药物本身可在可见光下发射荧光；药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光；药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；药物和间苯二酚反应后，发射出荧光;药物经其它反应后，发射荧光。光谱鉴别法紫外光谱鉴别法（UV法）法）紫外光谱法操作简便、快速；但由于分紫外光谱法操作简便、快速；但由于分子中不是每个基团都有紫外吸收，波长范围子中不是每个基团都有紫外吸收，波长范围较窄，光谱较简单、平坦，曲线形状的变化较窄，光谱较简单、平坦，曲线形状的变化不大，用作鉴别的专属性远不如红外光谱法
12、不大，用作鉴别的专属性远不如红外光谱法紫外光谱相同的物质不一定是同一种物质紫外光谱相同的物质不一定是同一种物质对照品对照对照品对照 对照图谱对照图谱规定吸收波长规定吸收波长规定吸收波长和相应吸收度规定吸收波长和相应吸收度规定吸收波长和吸收系数规定吸收波长和吸收系数规定吸收波长和吸收度比值规定吸收波长和吸收度比值nm247max 6.0A247 312nmE247%1cm1 21A/A 测定方法测定方法例 维生素B2的鉴别试验：取含量测定项下的溶液，照分光光度法测定，在267、375与444nm的波长处有最大吸收；在375与267nm处的吸收度比值应为0.310.33；在444与267nm处的吸
13、收度比值应为0.360.39。对于一个药物多个吸收峰的峰值相差较大时，采用单一浓度不易观察到全部吸收峰，可采用两种浓度的供试液分别测定其最大吸收波长。例 氯贝丁酯的鉴别试验：取本品，加无水乙醇制成每1mL中含0.10mg的溶液（1）与每1mL中含10g的溶液（2），照分光光度法测定，溶液（2）在226nm的波长处有最大吸收；溶液（1）在280与288nm的波长处有最大吸收。USP（25）采用对照品法，将样品与对照品按同法处理，在200400nm波长范围内扫描两溶液，要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。例 阿替洛尔的鉴别试验：本品50g/mL甲醇溶液显
14、示的紫外光谱图与同样条件下测得的USP阿替洛尔参考标准品的紫外光谱图一致。BP（2000）规定一定波长范围内仅有一个最大吸收或一个最小吸收。例 盐酸吗啡的鉴别：（1）取本品10mg，加水溶解并稀释成100.0mL，于250nm350nm波长范围内扫描测定，溶液显示仅在285nm处有一吸收峰，其吸收系数约为41。（2）取本品10mg，加0.1mol/L氢氧化钠溶液使溶解，并稀释至100.0mL，在265nm350nm范围内测定，溶液显示仅在298nm处有一吸收峰，吸收系数约为70。红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 (IR)(IR)ChPChP要求按指定条件绘制供试品的红外光吸要求按指定条件绘制供试品
15、的红外光吸收图谱，与收图谱，与药品红外光谱集药品红外光谱集中的相应标准中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物（时，即为同一种药物（标准图谱对照法）红外光谱法是有机药物分子的振动红外光谱法是有机药物分子的振动转动转动光谱，分子中每个基团一般都有相应的吸收光谱，分子中每个基团一般都有相应的吸收峰，且特征性强，能反映药物分子的结构特峰，且特征性强，能反映药物分子的结构特点点特点特点:专属性强、准确度高专属性强、准确度高适用：组分单一、结构明确药物适用：组分单一、结构明确药物中国药典试样制备有下列四种方法：压片法用于固体糊法用于固
16、体膜法用于液体溶液法用于液体光谱图对照应注意的问题：（1）固体药品的晶型影响，使录制的光谱图与光谱集所收载的光谱图不一致，应按备注的方法进行预处理后，再行录制。（2）压片法时，应注意制备条件对图谱形状及吸收强度的影响。盐酸盐样品制片时一般采用氯化钾基质。（3）测定时应注意二氧化碳和水汽等的大气干扰，可采用干燥氮气吹扫。（4）仪器间分辨率的差异及不同的操作条件可能影响药品光谱图的判断（聚苯乙烯薄膜光谱图）（5）本法对于多组分药物或存在多晶现象而又无可重复转晶方法的药物不适用。色谱鉴别法 利用物质各自的特征色谱行为（利用物质各自的特征色谱行为（RfRf值或保值或保留时间留时间）进行鉴别试验。）进行
17、鉴别试验。方法：采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪。薄层色谱法薄层色谱法 TLC法（Thin-layer chromatograph）一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品斑点的Rf值应与对照品斑点一致。优点：简便、实验成本低，应用最广泛。高效液相色谱 HPLC（High-performance liquid chromato graph）气相色谱 GC（Gas chromatograph）一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。药物鉴别方法新动向仪器方法，尤其是IR法和HPLC法制剂
18、广泛采用IR法鉴别鉴别条目简练，选择专属方法，平均每个品种收载2条左右 四、鉴别试验条件 规定条件 影响鉴别反应的因素主要有：被测物浓度；试剂的用量；溶液的温度、pH；反应时间；共存的干扰物质。五、鉴别试验的灵敏度灵敏度愈高，药物用量就愈少。灵敏度（sensitivity）：在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度。表示方法：最低检出量（检出限量）（minimum detectable quantity）以m表示，单位通常用微克（g）表示 例 钠离子的焰色反应，最低检出量为0.1ng，即表示少于这个量就不能被检测出。最低检出量愈小，反应愈灵敏。最
19、低检出浓度（界限浓度）（minimum detectable concentration）在一定条件下，能检测出供试品的最低浓度，用1：G表示最低检出浓度 最低检出量 1：G=（m/106）：v m=v/G106 v为鉴别试验时，取m质量供试品鉴别时溶液的最小体积（ml）例 已知：m=5 ug，v=1ml，求最低检出浓度？根据换算公式 1：G=（m/106）：v 5/106 =2105 即1：200000空白试验（blank test）目的：消除试剂和器皿可能带来的影响定义：在与供试品鉴别试验完全相同条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入 而进行的试验。提高反应灵敏度的方法v富集：有机溶剂进行萃取，浓集有色生成物，易于观测。v采用更高灵敏度的检测方式：将目视观测溶液颜色，改为可见分光光度法 将观测生成沉淀，改为比浊度法
