1、植物组织培养植物体细胞杂交1.动物细胞培养2.细胞核移植3.动物细胞融合4.制备单克隆抗体v动物细胞工程常用的技术手段：v植物细胞工程常用的技术手段有哪些？回顾：在治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源又不足，而且会产生免疫排斥反应。请同学们想一想怎样获得大量的自体健康皮肤呢？从社会中来 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植。新课程标准核心素养 阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和繁殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。1.科学思维构建
2、动物细胞培养的流程图，认同动物细胞培养是动物细胞工程的基础。2.社会责任认同生活离不开生物技术的发展。第2节 动物细胞工程1、概念：指动物机体中取出相关的组织,将它分散成 ，然后，放在 ,让这些细胞 的技术。单个细胞适宜的培养基中生长和繁殖2、原理：细胞增殖(有丝分裂)3、目的：获得细胞或者细胞产物4、地位：动物细胞工程的基础环节一 说出动物细胞培养的概念1、根据动物细胞培养的概念，初步构建动物细胞培养的流程图。环节二 构建动物细胞培养的流程图动物组织 分散成单个细胞 培养 2、阅读教材，小组合作讨论，思考问题，完善动物细胞培养的流程图。培养前，为什么要将组织分散成单个细胞?怎样将组织分散成单
3、个细胞?细胞培养一段时间，分裂会受阻，这是为什么?怎样解决这一问题?用机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理，去掉组织间蛋白，将组织分散成单个细胞，用培养液将细胞制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养皿或培养瓶。动物组织处理后的初次培养取动物组织制成细胞悬液放入CO2培养箱中培养转入培养瓶进行 一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，原因：细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。二、动物细胞培养的过程原代培养u 体外培养的动物细胞可以分为两大类：这些细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁。悬浮培养瓶悬浮培养瓶l 细胞能够悬浮在培养液中生长增殖l 细胞需要贴附于某些基质(如培养瓶壁)表面才能
4、增殖(主要类型)二、动物细胞培养的过程二、动物细胞培养的过程 接触抑制细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。u 培养瓶或培养皿要求：内表面光滑、无毒、易于贴附。思考：癌细胞会出现接触抑制现象吗？是否接触抑制可作为区别正常细胞与癌细胞的标志之一。取动物组织制成细胞悬液放入CO2培养箱中培养转入培养液进行原代培养传代培养分瓶培养放入CO2培养箱中培养二、动物细胞培养的过程u 不同培养类型的细胞进行传代培养时，如何处理？直接用离心法收集 重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集 原代培养分裂受阻离
5、心法收集制成细胞悬液传代培养p 原代培养分裂受阻先胰蛋白酶处理再离心法收集制成细胞悬液传代培养可以通过胰蛋白酶处理的对象来区分两种“培养”第一次：用胰蛋白酶对剪碎的动物组织进行处理，使其分散成单个细胞后进行培养，为原代培养。第二次：细胞培养过程中出现接触抑制，用胰蛋白酶使其从瓶壁上脱离下来，然后，将其分散到多个培养瓶中继续培养，为传代培养。二、动物细胞培养的过程u如图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。据图分析：(1)原代培养和传代培养的分界点是哪个？(2)AB段和DE段繁殖速度缓慢的原因是什么？(3)E点后的细胞大多数具有异倍体核型，这样的细
6、 胞有什么特点？B点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养。AB段发生了接触抑制；DE段细胞大部分衰老失去分裂能力。E点后的细胞能无限增殖。二、动物细胞培养的过程取动物组织用机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理分散成单个细胞解决悬浮生长贴壁生长(大多数）细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等接触抑制传代培养细胞悬液原代培养分瓶培养原代培养：指动物组织经处理后的初次培养。细胞贴壁：某些细胞需要贴附于某些基质表面才能增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。传代培养：分瓶后的细胞培养。加培养液在培养皿或培养瓶内悬浮培
7、养的细胞:直接用离心法收集贴壁细胞:用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，用离心法收集细胞分裂受阻制成细胞悬液，分瓶培养收集细胞二、动物细胞培养的过程原代培养 培养分瓶制成细胞悬液传代培养制成细胞悬液 CO2培养箱 培养分散成单个细胞 取动物组织(幼龄动物)（用机械法 或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理）二、动物细胞培养的过程u可以用胃蛋白酶处理吗？为什么？不可以；胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2-7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。1）机械法、胰蛋白酶、胶原蛋白酶的作用？将动物组织细胞间的蛋白质成分酶解，使细胞分散开，获得单个细胞。说
8、明细胞间的物质主要是蛋白质。2）培养前为什么分散成单个细胞？分散不会限制彼此的生长与增殖。分散有利于与培养液充分接触，有利于细胞吸收O2与营养和排出代谢废物。原代培养 培养分瓶制成细胞悬液传代培养制成细胞悬液 CO2培养箱 培养分散成单个细胞 取动物组织(幼龄动物)（用机械法 或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理）二、动物细胞培养的过程3)在用胰蛋白酶处理组织时应注意什么？细胞膜含有蛋白质，长时间处理会损伤细胞，要控制好时间。4）需分瓶进行传代培养的原因 营养物质缺乏有害代谢物积累细胞密度过大接触抑制导致细胞分裂受阻原代培养 培养分瓶制成细胞悬液传代培养制成细胞悬液 CO2培养箱 培养分散成单个细胞
9、 取动物组织(幼龄动物)（用机械法 或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理）二、动物细胞培养的过程5）动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。6）目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为几代以内？为什么？通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。思考：1.机体给体内的细胞提供了哪些适宜的条件使其能够维持正常的生命活动?2.动物细胞培养实际上是在体外模拟体内的生理条件进行的培养，你认为体外培养动物细胞需要满足哪些条件?环节三 动物细胞培养的条件营养条件环境条件动物细胞培养的条件营养条件环境条件无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和
10、渗透压适宜的气体环境糖类、氨基酸、无机盐、维生素等三、动物细胞培养的条件：u 将细胞所需的上述营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基，一般为液体培养基。注意：这里的糖类不包括淀粉、蔗糖等三、动物细胞培养的条件-营养条件合成培养基将细胞所需的营养物质按_严格配制而成。种类和所需量成分：、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、微量元素等。天然成分：血清等三、动物细胞培养的条件-营养条件1、血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。2、氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物 细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。3、血清激素有胰岛素、生长激
11、素等及多种生长因子；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。4、因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%20%的血清。补充资料：为什么培养液需要定期更换？以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害在细胞培养液中添加一定量的抗生素脉动真空灭菌器脉动真空灭菌器A.无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境对_和_进行_处理在_下进行操作还需要_三、动物细胞培养的条件-其他条件培养液所有培养用具灭菌无菌环境定期更换培养液和添加一定量的抗生素 如何防止培养过程中的微生物污染？维持适宜渗透压的目的_维持细胞正常的形态和功能B.温
12、度、温度、pH和渗透压和渗透压哺乳动物细胞培养的温度多以_为宜适宜的温度多数动物细胞生存的适宜pH为_适宜的pH适宜的渗透压三、动物细胞培养的条件-其他条件36.50.57.2-7.4三、动物细胞培养的条件-其他条件C.气体环境气体环境组成动物细胞培养所需气体主要有_和_O2：_CO2：_O2CO2O2是细胞代谢所必需的CO2的主要作用维持培养液的pH培养容器通常采用_或_培养皿松盖培养瓶培养仪器含有_和_的混合气体的_95%空气5%CO2CO2培养箱四.动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等；（4）用于检测有毒物质；（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮
13、；（3）作为基因工程的受体细胞;（5）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据。比较项目植物组织培养动物细胞培养取材培养前处理培养基的成分特殊环境条件结果离体植物器官、组织、细胞五、植物组织培养和动物细胞培养的比较动物胚胎或幼龄动物的组织、器官需离体用机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶将组织细胞分散开有机营养成分无机营养成分植物激素糖类、氨基酸、无机盐、维生素等营养物质及一些天然成分如血清再分化需光气体环境新的植株许多细胞比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基的物理性质培养基特有成分过程相同点固体培养基葡萄糖、动物血清液体培养基(又称培养液又称培养液)细胞增殖植物细胞的全能
14、性蔗糖、植物激素都进行有丝分裂，不涉及减数分裂均需无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件外植体 脱分化愈伤组织 再分化芽、根或胚状体 生长发育植物体动物的组织 机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理细胞悬液原代培养细胞悬液传代培养五、植物组织培养和动物细胞培养的比较无菌、无毒营养温度、pH和渗透压气体环境制备细胞悬液原代培养传代培养动物细胞培养动物细胞培养的条件动物细胞培养的过程动物细胞培养的概念u 课堂小结1.判断下列有关动物细胞培养的表述是否正确。（1）培养环境中需要O2，不需要CO2。（）（2）细胞要经过脱分化形成愈伤组织。（）（3）培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清（）（4）培养瓶中的细胞需定期用胰蛋白酶处理,分瓶后才能继续增殖（）练习：
