1、1 1. .1 1 微生物的分离和培养微生物的分离和培养（） 了解有关培养基的基础知识了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的进行无菌技术的 操作操作，进行微生物的培养进行微生物的培养。 一、课题目标：一、课题目标： 掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板划线平板划线 法法等基本操作技术等基本操作技术，熟练熟练、规范地进行无菌操规范地进行无菌操 作作，成功地培养微生物成功地培养微生物。 无菌技术的操作。无菌技术的操作。 二、课题重点和难点：二、课题重点和难点： 三、技能目标：三、技能目标： 培养基培养基 培养基培养基（培养液培养液）是由人工方法配制而成的是由人工方法
2、配制而成的，专供微生物专供微生物 生长繁殖使用的混合营养液生长繁殖使用的混合营养液。 （1）按按物理状态物理状态来分：培养基可分为来分：培养基可分为固体培养基固体培养基、半固体培养半固体培养 基基和和液体培养基液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等鉴定菌落等， 而液体培养基一般用于工业生产而液体培养基一般用于工业生产。 （2）按按功能功能来分来分，可分为可分为选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。 （3）按按化学成分化学成分来分来分，可分为可分为天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。 1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途 液体培养基：液
3、体培养基： 表面生长表面生长 均匀混浊生长均匀混浊生长 沉淀生长沉淀生长 按按物理状态物理状态来分来分 固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔 按按物理状态物理状态来分来分 半固体培养基：半固体培养基： 无动力无动力 有动力有动力( (弥散弥散) ) 观察细菌的运动观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定厌氧菌的分离和菌种鉴定 按按物理状态物理状态来分来分 选择培养基 加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌分离酵母菌、霉菌等真菌霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌分
4、离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞 按按功能功能来分来分 鉴别培养基 伊红美蓝乳糖培养基伊红美蓝乳糖培养基 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再再 与美蓝结合形成紫黑色菌落与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有并带有绿色金属光泽绿色金属光泽。常用常用 的伊红美蓝乳糖培养基的伊红美蓝乳糖培养基，可可用来鉴别饮用水和乳制品中是用来鉴别饮用水和乳制品中是 否存在大肠杆菌等
5、细菌否存在大肠杆菌等细菌 按按功能功能来分来分 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸 液）。液）。 优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好 缺点：缺点：来源受限来源受限; ;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验 结果的分析结果的分析; ;易发生支原体污染易发生支原体污染; ; 天然培养基：天然培养基： 按按化学成分化学成分来分来分 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合 成的。成的。 合成培养基主要成
6、分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无 机盐和其它一些辅助物质。机盐和其它一些辅助物质。 优点：优点：标准化生产，组分和含量相对固定标准化生产，组分和含量相对固定; ;成本低成本低 缺点：缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 合成培养基合成培养基: : 按按化学成分化学成分来分来分 血清中含有：血清中含有： 多种蛋白质多种蛋白质（白蛋白白蛋白、球蛋白球蛋白、铁蛋白等铁蛋白等） 多种金属离子；多种金属离子； 激素；激素； 促贴附物质促贴附物质，如纤粘蛋白如纤粘蛋白、冷析球蛋白冷析球蛋白、胶原
7、等胶原等。 各种生长因子各种生长因子 转移蛋白转移蛋白 不明成分不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖要想使细胞生长和繁殖， 还需补充一定量的天然培养基还需补充一定量的天然培养基（如血清如血清）。 按按化学成分化学成分来分来分 3.培养基内所含的基本物质 一般营养物质一般营养物质(1)水水 (2)碳源碳源 (3)氮源氮源 (4)无机盐无机盐 其他物质其他物质 pH、特殊营养物质特殊营养物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必即细菌生长必 需需，而自身不能合成的化合物而自身不能合成的化合物,如维生素如维生素、某些氨基酸某些氨基酸、嘌呤嘌
8、呤、 嘧啶嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等的要求等的要求。 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 . (2)碳源 可作为碳源的物质有可作为碳源的物质有: : 含碳无机物含碳无机物: : 、 、 含碳有机物：含碳有机物： 蛋白质蛋白质 脂肪酸脂肪酸 碳酸盐碳酸盐 碳酸氢盐碳酸氢盐 糖类糖类（主要主要）葡萄糖葡萄糖 乳糖乳糖 二氧化碳二氧化碳 不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同 a.a.异养型微生物的碳源为异养型微生物的碳源为 b.b.自养型微生物的碳源为自养型微生物的碳源为 含碳有机物含碳有机物（有机碳有机
9、碳） 含碳无机物含碳无机物（无机碳无机碳） (3)氮源 可作为氮源的物质有可作为氮源的物质有: 含氮无机物：含氮无机物： 、 、 、 含氮有机物：含氮有机物： 蛋白胨蛋白胨 牛肉膏牛肉膏 尿素尿素 固氮微生物所利用的氮源是固氮微生物所利用的氮源是 氮气氮气 氨气氨气 硝酸盐硝酸盐 氨盐氨盐 氮气氮气 培养基配制原则： 营养要协调营养要协调 目的要明确目的要明确 PH要适宜要适宜 无菌技术无菌技术 1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中在培养微生物的操作中，所有防止杂菌所有防止杂菌 污染的方法污染的方法。 从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作
10、（1）对实验操作空间对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ； （2）将培养器皿将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌接种用具和培养基等器具进行灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；实验操作应在酒精灯火焰附近进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 （1）消毒定义：消毒定义： 利用化学或物理方法利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程杀死大部份致病微生物的过程。区分为区分为 高 程 度 消 毒高 程 度 消 毒 （ High- level
11、Disinfection ） 、 中 程 度 消 毒中 程 度 消 毒 （Intermediate- level Disinfection）、低程度消毒低程度消毒（Low- level Disinfection）三种方式三种方式。 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒消毒 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100煮沸煮沸5- 6min 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70- 75 下煮下煮30min或或 80 下煮下煮15min 如牛奶的消毒如牛奶的消毒 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%酒精酒精、新洁尔灭等进行皮肤消新洁尔灭等进行皮肤消 毒毒;氯气消毒水源氯气消毒水
12、源 4、紫外线消毒紫外线消毒 (2)消毒的方法：消毒的方法： 灭菌 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物， 包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子。 方法：方法：a 灼烧灭菌灼烧灭菌 b 干热灭菌干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 a.灼烧灭菌灼烧灭菌 微生物的接种工具微生物的接种工具 (接种环接种环、 接种针接种针)或其他金属用具直接或其他金属用具直接 在火焰的充分燃烧层灼烧在火焰的充分燃烧层灼烧 注意适用范围注意适用范围 b.干热灭菌干热灭菌 160170 ；12h 能耐高温的需要保持干燥能耐高温的需要保持干燥 的物品的物品( 玻璃器皿
13、玻璃器皿) c.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 100kPa 121 15- 30min 通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌 大肠杆菌的培养和分离 菌种保存菌种保存 培养基的培养基的 配制配制 灭菌灭菌 超净工件台超净工件台 倒平板倒平板 接种液体接种液体 培养培养 划线分离划线分离 培养培养 3.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌器具的灭菌 2、培养基的配制培养基的配制 3、培养基的灭菌培养基的灭菌 4、倒平板倒平板 5、微生物接种微生物接种 6、恒温箱中培养恒温箱中培养 7、菌种的保存菌种的保存 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生
14、物污无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污 染染 外外，还有什么目的还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要如果需要， 请选择合适的方法请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒玻棒、试管试管、烧瓶和吸管烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。）需要消毒。 实验操作 1.制备牛肉膏蛋
15、白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 2.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 3.将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入 37恒温箱中培养恒温箱中培养12h和和24h后后，观察并记录观察并记录 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌用于培养细菌） 1计算计算、称量称量 2溶化溶化 3调调pH： pH76 4过滤过滤：这一步可以省去：这一步可以省去。 5分装分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上， 以免沾污棉塞而引起污染以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角分装三角烧瓶
16、的量以不超过三角 烧瓶容积的一半为宜烧瓶容积的一半为宜。 6加塞加塞 7包扎包扎 操作步骤操作步骤 8灭菌灭菌: 将将50ml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞塞上棉花塞，包包 上牛皮纸上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为在压力为100kPa、温度温度 为为121，灭菌灭菌1530min。将将培养皿培养皿用旧报纸包裹用旧报纸包裹，放入干放入干 热灭菌箱内热灭菌箱内，在在160170 下灭菌下灭菌2h。 9倒平板倒平板: 待培养基冷却到待培养基冷却到50 左右时左右时，在酒精灯附近倒平板在酒精灯附近倒平板。2d 后观察平板后观察平板，无杂
17、菌污染才可用来接种无杂菌污染才可用来接种. 10无菌检查无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入37的温室中培养的温室中培养2448小时小时，以检以检 查灭菌是否彻底查灭菌是否彻底。 倒平板技术倒平板技术 1.培养基灭菌后培养基灭菌后，需要冷却到需要冷却到50 左右时左右时，才能用来倒平板才能用来倒平板。 你用什么办法来估计培养基的温度你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下感觉锥形瓶的温度下 降到刚刚不烫手时降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰为
18、什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后平板冷凝后，为什么要将平板倒置为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之 间的部位间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗这个平板还能用来培养微生物吗？为什么为什么？ 答：平板冷凝后答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的凝固后的培养基表面的 湿度也比较高湿度也比较高，将平板倒置将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好既可以使培养基表面的水分更好
19、 地挥发地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生， 因此最好不要用这个平板培养微生物因此最好不要用这个平板培养微生物。 2、纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 接种方法有：接种方法有： 划线分离法和涂布分离法划线分离法和涂布分离法 划线分离法划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续通过接种环在琼脂固体培养基表面连续 画线的操作画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的 表面表面. 在数次画线后在数次画线后
20、,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉 眼可见的子细胞群体眼可见的子细胞群体,这就是菌落这就是菌落. 微生物的接种技术微生物的接种技术 1.接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置但要在培养基不同位置连续划连续划 线多次线多次. 2.划线划线首尾不能相接首尾不能相接 3.划线后划线后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养 划线分离法注意事项划线分离法注意事项: 其他画线分离图：其他画线分离图： 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ 在划线操作结束时在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗仍
21、然需要灼烧接种环吗？为什么为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的 微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划 线结束后线结束后，接种环上残留的菌种接种环上残留的菌种，使下一次划线时使下一次划线时，接种环上接种环上 的菌种直接来源于上次划线的末端的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加从而通过划线次数的增加， 使每次划线时菌种的数目逐渐减少使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落以便得到菌落。划线结束划线结束 后灼烧接种环后灼烧接种环
22、，能及时杀死接种环上残留的菌种能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污避免细菌污 染环境和感染操作者染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高答：以免接种环温度太高，杀死菌种杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次为什么总是从上一次 划线的末端开始划线划线的末端开始划线？ 答：划线后答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从每次从 上一次划线的末端开始上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线
23、次数的增加能使细菌的数目随着划线次数的增加 而逐步减少而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 稀释涂布平板的操作方法稀释涂布平板的操作方法 答：答：应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如例如，酒精酒精 灯与培养皿的距离要合适灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他吸管头不要接触任何其他 物体物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等吸管要在酒精灯火焰周围等等。 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板结合平板 划线与系列稀释的无菌操作要求划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想想一想，第第2
24、2步应步应 如何进行无菌操作如何进行无菌操作？ 微生物的恒温培养微生物的恒温培养 微生物的恒温培养微生物的恒温培养 微生物的恒温培养微生物的恒温培养 伊红伊红美蓝培养基美蓝培养基是是 鉴别培养基，可以用来检鉴别培养基，可以用来检 测自来水中的大肠杆菌是测自来水中的大肠杆菌是 否超标，因为的否超标，因为的代谢产物代谢产物 与伊红与伊红美蓝结合美蓝结合，使菌，使菌 落呈落呈黑色并带有金属光泽黑色并带有金属光泽 ，使大肠杆菌的菌落显示，使大肠杆菌的菌落显示 出来，并没有促进大肠杆出来，并没有促进大肠杆 菌的生长和抑制其他微生菌的生长和抑制其他微生 物的生长。物的生长。 例如：例如：鉴别大肠杆菌培养基
25、鉴别大肠杆菌培养基 大肠杆菌呈黑色中心大肠杆菌呈黑色中心 , , 有或无金属光泽有或无金属光泽 菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏临时保藏：接种：接种 到固体斜面培养基到固体斜面培养基，菌菌 落长成后置于落长成后置于4 4冰箱冰箱 保存保存。 2 2、长期保存长期保存：甘油：甘油 冷冻管藏法冷冻管藏法 结果分析与评价结果分析与评价 （一一）培养基的制作是否合格培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生后无菌落生 长长，说明培养基的制备是成功的说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备否则需要重新制备。 （二二）接种操作是否符合无
26、菌要求接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色如果培养基上生长的菌落的颜色、形状形状、大小基本一致大小基本一致， 并符合大肠杆菌菌落的特点并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；则说明接种操作是符合要求的； 如果培养基上出现了其他菌落如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中则说明接种过程中，无菌操作无菌操作 还未达到要求还未达到要求，需要分析原因需要分析原因，再次练习再次练习。 （三三）是否进行了及时细致的观察与记录是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h与与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同， 及时观察记录的同
27、学会发现这一点及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微并能观察到其他一些细微 的变化的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 本课题知识小结本课题知识小结: : 【典例解析典例解析】 例例1有关微生物营养物质的叙述中有关微生物营养物质的叙述中，正确的是正确的是( ) A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物不同的微生物，所需营养物
28、质有较大差别所需营养物质有较大差别，要针对微要针对微 生物的具体情况分析生物的具体情况分析。对于对于A、B选项选项，它的表达是不完整的它的表达是不完整的。 有的碳源只能是碳源有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源， 如如NH4HCO3；有的碳源同时是能源；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时如葡萄糖；有的碳源同时 是氮源是氮源，也是能源也是能源，如蛋白胨如蛋白胨。对于对于C选项选项，除水以外的无机除水以外的无机 物种类繁多物种类繁多，功能也多样功能也多样。如二氧化碳如二氧化碳，可作为自养型微生物可作为自养型微生物 的碳源；的碳源；NaHCO3
29、，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而 NaCl则只能提供无机盐则只能提供无机盐。对于对于D选项选项，无机氮源提供能量的情无机氮源提供能量的情 况还是存在的况还是存在的，如如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源可为硝化细菌提供能量和氮源。 D 例例2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确的是的是( ) A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.消灭杂菌消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前 B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说
30、的是灭菌说的是灭菌 的目的的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过整个发酵过 程不能混入其他微生物程不能混入其他微生物（杂菌杂菌），所以是正确的；所以是正确的；B是错误的是错误的， 因为灭菌的目的是防止杂菌污染因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭但实际操作中不可能只消灭 杂菌杂菌，而是消灭全部微生物而是消灭全部微生物。C是正确的是正确的，因为与发酵有关的因为与发酵有关的 所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接 种的种的，灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前，如果接
31、种后再灭菌就会把所接菌种如果接种后再灭菌就会把所接菌种 也杀死也杀死。 编号编号 成分成分 含量含量 粉状硫粉状硫 10g10g （NHNH4 4） 2 2SO SO4 4 0.4g0.4g K K2 2HPOHPO4 4 4.0g4.0g MgSOMgSO4 4 9.25g9.25g FeSOFeSO4 4 0.5g0.5g CaClCaCl2 2 0.5g0.5g H H2 2O O 100ml100ml 例例3右表是某微生物培养基成分右表是某微生物培养基成分，请据此回答：请据此回答： （1）右表培养基可培养的微生物类型是右表培养基可培养的微生物类型是 。 （2）若不慎将过量若不慎将过量N
32、aCl加入培养基中加入培养基中。 如不想浪费此培养基如不想浪费此培养基， 可再加入可再加入 . 自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 解释解释：过量食盐可用于培养金黄色：过量食盐可用于培养金黄色 葡萄球菌葡萄球菌，金黄色葡萄球菌是异养金黄色葡萄球菌是异养 型的型的。 （3）若除去成分若除去成分，加入加入（CH2O），该培养基可用于培养该培养基可用于培养 _。 （4）表中营养成分共有表中营养成分共有_类类。 （5）不论何种培养基不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前在各种成分都溶化后分装前，要进行的要进行的 是是_。 固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH （6）右表中各成分重量
33、确定的原则是右表中各成分重量确定的原则是_。 （7）若右表培养基用于菌种鉴定若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是应该增加的成分是 _ 。 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂琼脂（或凝固剂或凝固剂） 1 1. .2 2 分离特定的微生物并测定其数量分离特定的微生物并测定其数量 一、涂抹平板法或混合平板法分离细菌一、涂抹平板法或混合平板法分离细菌 1.平板分离法平板分离法 将单个微生物分离和固定在固体培养基将单个微生物分离和固定在固体培养基 ， 每个孤立的活微生物经过生长、繁殖均可形成单个每个孤立的活微生物经过生长、繁殖均可形成单个 。 2分离、培养微生物最常用的是分离、培养
34、微生物最常用的是 培养基。培养基。 3实验室中最常用的两种平板分离法是实验室中最常用的两种平板分离法是 法法 和和 法。法。 表面或里面表面或里面 菌落菌落 琼脂固体琼脂固体 涂抹平板涂抹平板 混合平板混合平板 二、选择培养分离二、选择培养分离 1.原理原理 (1)不同的微生物有特殊的不同的微生物有特殊的 需求或对某种化学物质需求或对某种化学物质 有不同的有不同的 。 (2)针对某种微生物的特性，设计一个特定的环境，使之针对某种微生物的特性，设计一个特定的环境，使之 特别特别 这种微生物的生长，而这种微生物的生长，而 其他微生物的生长。其他微生物的生长。 2目的目的 采用选择培养分离的方法，经
35、过一定时间的培养后，使采用选择培养分离的方法，经过一定时间的培养后，使 这种微生物在群落中的这种微生物在群落中的 不断增加，再通过不断增加，再通过 等进行纯培养分离。等进行纯培养分离。 营养营养 敏感性敏感性 适合适合 抑制抑制 数量数量 平板稀释法平板稀释法 1在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种 细菌吗细菌吗？ 【提示提示】 标准的单个菌落中只含有一种细菌标准的单个菌落中只含有一种细菌。 2如果要分离厌氧菌，应在什么条件下培养？如果要分离厌氧菌，应在什么条件下培养？ 【提示提示】 在无氧条件下培养。在无氧条件下培养。 三、观察各种微生物形成的菌落
36、三、观察各种微生物形成的菌落 1.菌落的概念菌落的概念 单个微生物在适宜的单个微生物在适宜的 培养基表面或内部生长、繁培养基表面或内部生长、繁 殖到一定程度，形成殖到一定程度，形成 可见的、有一定形态结构的子细可见的、有一定形态结构的子细 胞生长群体。胞生长群体。 2菌落的特征菌落的特征 不同微生物在不同微生物在 培养基上生长形成的菌落一般都具培养基上生长形成的菌落一般都具 有有 的特征。的特征。 3观察菌落的意义观察菌落的意义 可以成为对微生物进行可以成为对微生物进行 的重要依据。的重要依据。 固体固体 肉眼肉眼 特定特定 稳定稳定 分类、鉴定分类、鉴定 四、仅以尿素为氮源的土壤微生物的分离
37、、培养与数量测定四、仅以尿素为氮源的土壤微生物的分离、培养与数量测定 1准备实验器材准备实验器材 2采集土壤，制备悬液采集土壤，制备悬液 (1)制备悬液制备悬液 称取称取 0.5 g 土壤样品，倒入盛有土壤样品，倒入盛有 50 mL 无菌水的锥形瓶，无菌水的锥形瓶， 20 min， 使土样充分打散， 即为， 使土样充分打散， 即为 10 2g/mL 的土壤悬液。 的土壤悬液。 振荡振荡 (2)等比稀释等比稀释 用用 移液管吸取移液管吸取 0.5 mL 土壤悬液注入盛有土壤悬液注入盛有 4.5 mL 的的 1 号试管，配成号试管，配成 g/mL 的土壤悬液。取另一支的土壤悬液。取另一支 无菌移液
38、管吹吸无菌移液管吹吸 1 号试管号试管 次，使悬液次，使悬液 ，再吸取，再吸取 0.5 mL 注入盛有注入盛有 4.5 mL 无菌水的无菌水的 2 号试管，配成号试管，配成 10 4g/mL 的土壤悬液。以此类推，依次配制成的土壤悬液。以此类推，依次配制成 10 5g/mL、 、10 6g/mL、 、 10 7g/mL、 、10 8g/mL 的土壤悬液。 的土壤悬液。 3培养基的选择培养基的选择 选择适于分离特定微生物的培养基：利用不同微生物代选择适于分离特定微生物的培养基：利用不同微生物代 谢特性的不同，通过选择培养基选出所需要的特定微生物。谢特性的不同，通过选择培养基选出所需要的特定微生物
39、。 无菌无菌 无菌水无菌水 10 3 3 均匀均匀 4接种接种 采用采用 3 支无菌移液管分别吸取支无菌移液管分别吸取 10 8 g/mL、 、10 7 g/mL、 、 10 6 g/mL 的土壤悬液各 的土壤悬液各 1 mL 加入培养皿中， 每个浓度设置加入培养皿中， 每个浓度设置 重复，并充分振荡混合均匀，用重复，并充分振荡混合均匀，用 平板法进行分离。平板法进行分离。 5培养与观察培养与观察 将培养皿倒置于将培养皿倒置于 恒温箱中培养恒温箱中培养 12d，观察细，观察细 菌菌落。菌菌落。 3个个 涂抹涂抹 37 6计数菌落计数菌落 培养培养 2448 h 后取出平板，计数，选取菌落数为后
40、取出平板，计数，选取菌落数为 的一组为样本进行统计。每克土壤样品的细菌数某一稀释的一组为样本进行统计。每克土壤样品的细菌数某一稀释 度几次重复培养后的度几次重复培养后的 (假假 定涂抹所用稀释液为定涂抹所用稀释液为 1 mL)。 30300 菌落平均数菌落平均数 稀释倍数稀释倍数 五、分离土壤中能分解纤维素的微生物五、分离土壤中能分解纤维素的微生物 1.研究目标研究目标 (1)研究培养基对微生物的研究培养基对微生物的 作用。作用。 (2)探讨能分解纤维素的微生物的探讨能分解纤维素的微生物的 价值。价值。 2研究指导步骤研究指导步骤 问题与假设问题与假设 交流与合作交流与合作 。 选择选择 应用
41、应用 设计与实验设计与实验 结论与反思结论与反思 1每种培养基都只适合一种微生物的特殊营养需每种培养基都只适合一种微生物的特殊营养需 求求。() 【提示提示】 常常能适合一些微生物生长常常能适合一些微生物生长，而另一些而另一些 微生物的生长会被抑制微生物的生长会被抑制。 2要选择培养分离能固氮的微生物应选用含氮的要选择培养分离能固氮的微生物应选用含氮的 培养基培养基。() 【提示提示】 要选用无氮的培养基要选用无氮的培养基。 正误判断正误判断 3在固体培养基上形成的单个菌落即为纯培养物在固体培养基上形成的单个菌落即为纯培养物。 () 4经过选择培养分离平板上出现经过选择培养分离平板上出现30个
42、菌落最好个菌落最好。() 【提示提示】 在平板上出现了在平板上出现了30300个单个细菌菌个单个细菌菌 落为宜落为宜。 1 1过程如图过程如图 探究一探究一 涂抹平板法和混合平板法的异同涂抹平板法和混合平板法的异同 2结果不同结果不同 (1)涂抹平板法：细菌菌落通常仅在平板表面生长涂抹平板法：细菌菌落通常仅在平板表面生长。 (2)混合平板法：细菌菌落出现在平板表面及内部混合平板法：细菌菌落出现在平板表面及内部。 3目的相同：分离和计数各种目的微生物目的相同：分离和计数各种目的微生物。 探究二、选择培养基的作用探究二、选择培养基的作用 1选择培养基筛选微生物的原理：人为提供有利于目的选择培养基筛
43、选微生物的原理：人为提供有利于目的 菌株生长的条件菌株生长的条件(包括营养包括营养、温度温度、pH等等)，同时抑制或阻同时抑制或阻 止其他微生物生长止其他微生物生长。 2选择培养基筛选微生物的方法选择培养基筛选微生物的方法 (1)在培养基中加入某种化学物质在培养基中加入某种化学物质。例如例如，加入青霉加入青霉 素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可 以得到金黄色葡萄球菌以得到金黄色葡萄球菌。 (2)改变培养基中的营养成分改变培养基中的营养成分。例如例如，缺乏氮源时可缺乏氮源时可 以分离固氮微生物；石油作为唯一碳源时以分离固氮微生物；石油作为唯一
44、碳源时，可以分可以分 离出能消除石油污染的微生物离出能消除石油污染的微生物。 (3)改变微生物的培养条件改变微生物的培养条件。例如例如，将培养基放在高将培养基放在高 温环境中培养可以得到耐高温的微生物温环境中培养可以得到耐高温的微生物。 植物组织培养的概念。植物组织培养的概念。 概念：概念： 植物组织培养就是在无菌和人工控制植物组织培养就是在无菌和人工控制 条件下条件下，将将离体的植物器官离体的植物器官、组织组织、细胞细胞，培养在培养在 人工配制的培养基上人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件给予适宜的培养条件，诱导诱导 其产生愈伤组织其产生愈伤组织, ,进而生根发芽进而生根发芽，最终形成完整
45、的最终形成完整的 植株植株。 为什么植物的一个为什么植物的一个细胞细胞就可以就可以 培育出完整的植株呢？培育出完整的植株呢？ 1、含义：、含义： 每个生活的细胞每个生活的细胞都具有遗传上的全能性，因而具有都具有遗传上的全能性，因而具有 发育为完整植株的潜能。发育为完整植株的潜能。 2、原因：、原因： 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套全套 遗传物质遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基，都有发育成为完整个体所必需的全部基 因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具 有全能性。有全能性。 3、差
46、异：、差异： （1） 受精卵的全能性最高受精卵的全能性最高 一般受精卵一般受精卵生殖细胞生殖细胞体细胞体细胞 细胞的全能性细胞的全能性 （3）植物细胞）植物细胞动物细胞动物细胞 （2）分化程度低的细胞）分化程度低的细胞分化程度高的细胞分化程度高的细胞 几乎所有的组织几乎所有的组织 为什么植物的花瓣在植物体内没有能发育成完整的植为什么植物的花瓣在植物体内没有能发育成完整的植 株呢株呢？ 细胞失去了全能性细胞失去了全能性 细胞中的基因部分丢失细胞中的基因部分丢失 细胞中的基因进行选择性表达细胞中的基因进行选择性表达 细胞中的基因变异不同细胞中的基因变异不同 怎样才能由一个细胞或组织通怎样才能由一个细胞或组织通 过
