1、第五章第五章 黄酮类化合物黄酮类化合物 Flavonoids大豆卵磷脂软胶囊v神奇的大豆中国人吃了几千年的大豆，过去用作饮料、豆制品和榨油，今天却成了热点。v大豆及其制品中含丰富异黄酮，大豆异黄酮对女性体内雌激素具有双向调节作用，具有抗衰老、防癌抗癌，防止骨质疏松等功能问题：v黄酮类化合物的结构是怎样的？黄酮类化合物的结构是怎样的？v黄酮类化合物具有什么样的理化性质？黄酮类化合物具有什么样的理化性质？v我们如何将其提取和分离出来，又如何进我们如何将其提取和分离出来，又如何进行结构鉴定？行结构鉴定？分布广泛分布广泛v广泛存在于蔬菜、水果、牧草和药用植物中，是植物在长期自然选择过程中产生的一些次级
2、代谢产物v对植物的生长、发育、开花和结果以及抵御异物的侵袭起着重要作用v在植物中已发现10000种结构独特的黄酮类化合物实例一 银杏银杏诞生在古生代, 距今已有二亿三千万年以上,银杏为裸子植物门银杏银杏为裸子植物门银杏纲银杏植物纲银杏植物(GinKgo bilba L.)，为为一科一属一种一科一属一种的特殊植物，又称白的特殊植物，又称白果、公孙树，素有果、公孙树，素有“活化石活化石”之称，之称，是国家二级保护植物。在我国广泛种是国家二级保护植物。在我国广泛种植，产量占全世界的植，产量占全世界的70%，是一种，是一种多用途的经济树种。多用途的经济树种。 银杏o 宋代初年，白果被列为贡品上进宫廷。
3、皇帝宋代初年，白果被列为贡品上进宫廷。皇帝认为认为“白白”为不祥之兆，因看其外壳身白如为不祥之兆，因看其外壳身白如银，果实似杏，便改其名为银，果实似杏，便改其名为“银杏银杏”银杏o 宋代诗人欧阳修诗云：宋代诗人欧阳修诗云：“绛囊初入贡，银杏绛囊初入贡，银杏贵中州。贵中州。”o 杨万里在杨万里在银杏银杏诗中将其描绘得出神入化：诗中将其描绘得出神入化：“深灰残火略相遭，小苦微甜韵最高。未必深灰残火略相遭，小苦微甜韵最高。未必鸡头如鸭脚，不妨银杏伴金桃。鸡头如鸭脚，不妨银杏伴金桃。”白果o 白果的药用价值早在元代吴瑞著的白果的药用价值早在元代吴瑞著的日用日用本草本草中即有记载，以后的许多医学著作中即
4、有记载，以后的许多医学著作也都有记载，主要是也都有记载，主要是三元延寿书三元延寿书、滇南本草滇南本草、本草纲目本草纲目、本草再本草再新新等。等。白果 记载的主要药用功效为白果能敛肺气、定喘嗽、记载的主要药用功效为白果能敛肺气、定喘嗽、止带浊、缩小便，有治疗哮喘、痰嗽、白带、白止带浊、缩小便，有治疗哮喘、痰嗽、白带、白浊、遗精、淋病、便频等作用。明代江苏、山东、浊、遗精、淋病、便频等作用。明代江苏、山东、四川等地曾出现了用白果炮制的中成药用于临床。四川等地曾出现了用白果炮制的中成药用于临床。 掌握掌握:1.结构与分类结构与分类、中药中常见的各类代表、中药中常见的各类代表化合物。化合物。2.理化性
5、质理化性质：溶解性溶解性、酸性酸性的强弱在提的强弱在提取和分离中的应用，取和分离中的应用，显色反应显色反应在各类在各类检识中的应用。检识中的应用。3.提取分离方法原理提取分离方法原理及应用：及应用：PH梯度梯度萃取法、柱色谱法萃取法、柱色谱法（聚酰胺聚酰胺、硅胶、硅胶、葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶）。）。熟悉：熟悉： 1 黄酮黄酮(醇醇)类类的的氢氢谱谱、质谱、质谱特征特征； 2 常见含黄酮类中药（槐花、葛根、常见含黄酮类中药（槐花、葛根、黄芩、银杏等）黄芩、银杏等）。掌握掌握:4 各类黄酮化合物的各类黄酮化合物的UV光谱光谱特征；特征；OO12364578色原酮色原酮 2-苯基色原酮苯基色原酮OO1
6、2364578123456第一节第一节 概述概述一、黄酮一、黄酮(黄碱素类黄碱素类 )一、黄酮母核一、黄酮母核（1）、黄色带有酮基化合物）、黄色带有酮基化合物 （A B C 环）环）（2）、）、具有具有C6 C3 C6通式（通式（3）OABCC6-C3-C6 生物合成途径是复合型的生物合成途径是复合型的生物合成途径生物合成途径糖糖醋酸-丙二酸途径莽草酸途径RCH2COCoACoAOOCOHx 3OHOOH查耳酮OOOHOO桂皮酸桂皮酸 生物活性生物活性 n对心血管系统的作用对心血管系统的作用 芦丁芦丁 橙皮苷橙皮苷n抗肝脏毒性作用抗肝脏毒性作用n抗炎作用抗炎作用n雌性激素样作用雌性激素样作用n
7、抗菌抗病毒作用抗菌抗病毒作用n泻下作用泻下作用 n解痉作用解痉作用文本文本文本文本文本文本文本文本文本生物活性生物活性葛根总黄酮葛根总黄酮及葛根素、及葛根素、银杏叶总黄酮银杏叶总黄酮：具：具有扩张冠状血管作用，临床可用于治疗冠有扩张冠状血管作用，临床可用于治疗冠心病；心病；芦丁芦丁、橙皮苷、橙皮苷、d-儿茶素：具有降低毛细血儿茶素：具有降低毛细血管脆性和异常通透性作用，可用作毛细血管脆性和异常通透性作用，可用作毛细血管性出血的止血药及治疗高血压、动脉硬管性出血的止血药及治疗高血压、动脉硬化的辅助药；化的辅助药；生理活性生理活性水飞蓟素、异水飞蓟素、次水飞蓟素：水飞蓟素、异水飞蓟素、次水飞蓟素：
8、肝保护作用肝保护作用 ，临床上用于治疗急、慢性，临床上用于治疗急、慢性肝炎，肝硬化及多种中毒性肝损伤等疾肝炎，肝硬化及多种中毒性肝损伤等疾病均取得了较好的效果；病均取得了较好的效果；异甘草素、大豆素异甘草素、大豆素：具有类似罂粟碱的：具有类似罂粟碱的作用，解除平滑肌痉挛。作用，解除平滑肌痉挛。 1 黄酮类黄酮类2 黄酮醇类黄酮醇类3 二氢黄酮类二氢黄酮类4 二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类5 异黄酮类异黄酮类6 二氢异黄酮类二氢异黄酮类7 查耳酮类查耳酮类8二氢查耳酮类二氢查耳酮类9橙酮类橙酮类10花色素类花色素类11黄烷醇类黄烷醇类12双黄酮类双黄酮类13其他黄酮类其他黄酮类 结构与分类结构与分类依
9、据依据C环的变化环的变化1、黄酮、黄酮 flavones ：占总数：占总数 1/4OOOHOHHO芹菜素芹菜素黄酮黄酮黄芩苷黄芩苷OOOOHOHOOHOHOHCOOH黄芩黄芩为清热解毒类为清热解毒类中药，抗菌成分主中药，抗菌成分主要有黄芩苷要有黄芩苷(baicalin)、次黄芩、次黄芩素素(wogonin)等。等。OOOOOHO黄芩素(黄色)OOOHHOHO黄芩酶黄芩苷COOHHOOHOHOOOOHHOO flavonol ：占总数：占总数 1/3 C环环(C3 - OH)OOOROHOHOHHO槲皮素槲皮素 R=H芦丁芦丁 R=芸香糖基芸香糖基黄酮醇黄酮醇OOOHOHOHOH山柰酚山柰酚 n
10、 槲皮素槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。具有抗炎、止咳祛痰等作用。槲皮素片用于治疗支气管炎。槲皮素片用于治疗支气管炎。n 芦丁芦丁(rutin)是槲皮素的是槲皮素的O芸香糖苷。用于治芸香糖苷。用于治疗毛细管脆弱引起的出血病，并用作高血压的辅疗毛细管脆弱引起的出血病，并用作高血压的辅助治疗剂。助治疗剂。 RUTINOOOHHOOHOHOrutinoseOOOHHOOHOHOHQUERCETINflavanones ：C环环(C2 - C3)无双键无双键OOOHOHOHRO橙皮素橙皮素 R=H橙皮苷橙皮苷R=芸香糖基芸香糖基二氢黄酮二氢黄酮OOOHOR甘草素甘草素 R=H甘草
11、苷甘草苷 R=glc柚皮素（柚皮素（Naringenin）：来源于芸香科植）：来源于芸香科植物柚的果实；物柚的果实；n结构式：结构式： flavanonols ： C环无双键环无双键 C3-OH OOOHOHOHOHHO二氢槲皮素二氢槲皮素二氢黄酮醇二氢黄酮醇n 水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的成的黄酮木脂素类黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损治疗急、慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。伤。 OOHOOHOHOOCH2OHOHOCH3水飞蓟素(SILYBIN)异黄酮异黄酮isofl
12、avones ：B环取代在环取代在C环环 C3 上上 雌激素雌激素 豆科植物葛。豆科植物葛。葛根总黄酮葛根总黄酮具有具有扩冠、增加冠扩冠、增加冠脉流量及降低脉流量及降低心肌耗氧量等心肌耗氧量等作用。作用。二氢异黄酮二氢异黄酮chalcones ： C环是开裂状态环是开裂状态2-羟基查耳酮羟基查耳酮二氢黄酮二氢黄酮查耳酮查耳酮OOHOHOHO+2345623456n菊科植物菊科植物 n红花。红花。n 红花所含的色素红花苷是第一个发现红花所含的色素红花苷是第一个发现的查耳酮类植物成分。的查耳酮类植物成分。 n 红花在开花初期，花冠呈红花在开花初期，花冠呈淡黄色淡黄色；开；开花中期，花冠呈花中期，花
13、冠呈深黄色深黄色；开花后期或采；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作用，氧化成收干燥过程中由于酶的作用，氧化成红红色。色。SO2氧化酶异构化醌式红花苷(红色)红花苷(carthamone)(黄色)新红花苷(neo-carthamin)(无色)OHOOOOglcOHOHOHOHOOglcOHOOHOHOOglcOH二氢查耳酮类二氢查耳酮类，位双键氢化位双键氢化 aurones ： C环是含氧五元环环是含氧五元环 硫磺菊素硫磺菊素橙酮橙酮HHOCHOHOOHOH1234567123456花色素花色素 C环上无羰基，但环上无羰基，但C环环O原子是阳离子状态原子是阳离子状态n 是使花、叶、果、茎等呈现蓝
14、、紫、红等是使花、叶、果、茎等呈现蓝、紫、红等颜色的色素。以苷的形式存在于细胞液中，颜色的色素。以苷的形式存在于细胞液中，经水解可生成苷元经水解可生成苷元花色素及糖。花色素及糖。 矢车菊苷元(兰色)花青素母核OHOOHOHOHOflavan3ols ： C环上无羰基环上无羰基儿茶素儿茶素黄烷醇黄烷醇OHOHOOHOHOHHH黄烷黄烷-3-醇醇(flavan-3-ols)(+)儿茶素(-)表儿茶素OHOOHOHHOHHOHHOHOOHOHOHOHH(+)儿茶素(-)表儿茶素OHOOHOHHOHHOHHOHOOHOHOHOHHOOHOHOHOHOHR1R2无色矢车菊素无色矢车菊素 R1=OH R2
15、=H 无色飞燕草素无色飞燕草素 R1=R2=OH 无色天竺葵素无色天竺葵素 R1=R2=H黄烷黄烷-3，4-二醇二醇(flavan-3,4-diols)类类双黄酮（醇）双黄酮（醇）OOHOCH3OOHOOHOR2OR1OR银杏素银杏素 R1=CH3 R2=H异银杏素异银杏素 R1=H R2= CH3白果素白果素 R1=H R2=H8，8-双芹菜素型双芹菜素型 OO HH OOOH OO HO HOO H H柏黄酮柏黄酮双苯醚型双苯醚型 例如扁柏黄酮（例如扁柏黄酮（hinokiflavone），是），是由二分子芹菜素通过由二分子芹菜素通过C4-O-C6醚键连醚键连接而成。接而成。OOHOOHOO
16、OHOHOOHC环与环与B环骈合环骈合 苯骈色酮苯骈色酮 (山酮类山酮类)其他黄酮类其他黄酮类87654321异芒果素(isomengiferin)OOHOHOOHOHglc石苇中的异芒果素石苇中的异芒果素具有止咳祛痰的功效。具有止咳祛痰的功效。 取代基取代基 常见：常见： -OH ： 取代位置取代位置 A环环 5- 7- ; B环环 4 -OCH3： 异戊烯基：异戊烯基：A环环6- ； B环环4 成苷位置成苷位置 ： A环环 7- B环环 4 C环环 3-（一）单糖类（一）单糖类(表表5-2) 1、D-glucose ( D-glc) D-glucaronic acid (D-gluA) 2
17、、鼠李糖、鼠李糖 L-Rhamnose (L-Rha) 3、半乳糖、半乳糖 D-galactose (D-Gal) 4、甘露糖、甘露糖 D-mannoe (D-Man) 5、阿拉伯糖、阿拉伯糖 L-Arabinose (L-Ara) 6、木糖、木糖 D-xylose (D-Xyl)成苷的糖成苷的糖P189（二）双糖类（二）双糖类(表表5-3) 槐糖槐糖 sophorose （glc 12 glc） 芸香糖芸香糖 rutinose （rha 1 6 glc） 龙胆二糖龙胆二糖 （glc 1 6 glc）成苷的糖成苷的糖OO1、性状：结晶或非结晶粉末、性状：结晶或非结晶粉末 二氢黄酮不易结晶二氢黄
18、酮不易结晶2、颜色：、颜色： （1）、颜色与分子中是否存在交叉共）、颜色与分子中是否存在交叉共轭体系有关轭体系有关第二节第二节 理化性质和显色反应理化性质和显色反应 (1) 黄酮、黄酮醇多显灰黄黄色黄酮、黄酮醇多显灰黄黄色; 查耳酮为黄橙黄色；查耳酮为黄橙黄色； 二氢黄酮、二氢黄酮醇及黄烷醇二氢黄酮、二氢黄酮醇及黄烷醇 几乎为无色；几乎为无色； 异黄酮异黄酮 缺少完整的交叉共轭体系，仅显微黄色。缺少完整的交叉共轭体系，仅显微黄色。OO-+OOOO-+2、颜色：、颜色： （2）在黄酮（醇）在黄酮（醇）7 、4引入引入OH 、OCH3 等助色团，促进电子移位、重排，化等助色团，促进电子移位、重排，
19、化合物的颜色加深合物的颜色加深 （3）花色素随）花色素随PH变化，颜色不同变化，颜色不同pH7时显红色，时显红色，pH为为8.5时显紫色，时显紫色，pH8.5时显蓝色。时显蓝色。例如矢车菊苷例如矢车菊苷OOHOOHOH C6H11O5+HOH-OHOOOHO红 色 紫 色HOH-OHOOOO-蓝色 C6H11O5 C6H11O5 C6H11O5O C6H11O5OO C6H11O5 OHpH7时显红色时显红色pH为为8.5时显时显紫色紫色pH8.5时显时显蓝色蓝色3 旋光性旋光性二氢黄酮二氢黄酮二氢黄酮醇二氢黄酮醇黄烷醇黄烷醇二氢异黄酮二氢异黄酮黄酮苷类由于结构中含有糖黄酮苷类由于结构中含有糖
20、部分，有旋光性，左旋。部分，有旋光性，左旋。 有旋光有旋光4 溶解度溶解度取决于存在状态取决于存在状态v苷：亲水性苷：亲水性 易溶热水、甲醇、乙醇易溶热水、甲醇、乙醇; 难溶难溶CHCl3v苷元：亲脂性苷元：亲脂性 易溶易溶MeOH 、 EtOH 、 Et2O；难溶于水；难溶于水苷元苷元平面型分子平面型分子 难溶于水：难溶于水： 黄酮（醇）、查耳酮黄酮（醇）、查耳酮 非平面型分子非平面型分子 溶解度稍大：溶解度稍大： 二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇）离子型分子离子型分子 具有盐的通性，水溶性大具有盐的通性，水溶性大 ：花青素：花青素溶解度溶解度黄酮成苷后黄酮成苷后 ：水溶性：水溶性 ，脂溶性，脂溶
21、性 苷分子中糖基的数目、结合的位置，对溶解苷分子中糖基的数目、结合的位置，对溶解度亦有一定影响。度亦有一定影响。多糖苷比单糖苷水溶性大多糖苷比单糖苷水溶性大3-羟基苷比相应的羟基苷比相应的7-羟基苷水溶性大羟基苷水溶性大 OOOHHOP-共轭共轭7 、4OH 酸性强酸性强（一）、酸性：（一）、酸性： 7 、4 二二OH 7 或或4OH 一般一般ph-OH 3或或5-OH 5%NaHCO3 5%Na2CO3 0.5% NaOH 5% NaOH5 酸碱性酸碱性 （二）、碱性（二）、碱性 1、碱性很弱，只与强酸成盐、碱性很弱，只与强酸成盐 2、生成盐极不稳定，加水分解、生成盐极不稳定，加水分解 3、
22、与浓、与浓H2SO4 , HCl 反应呈特殊颜色反应呈特殊颜色OOHMg + HCl O+O-粉红粉红 1、还原反应、还原反应 1）、）、盐酸镁粉反应盐酸镁粉反应6 显色反应显色反应 表表5-4 操作和结果检查：样品检查：样品 /甲醇甲醇 + Mg粉粉 +3d 浓浓 HCl12分钟分钟显色显色黄酮（醇）黄酮（醇）二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇）查耳酮、橙酮、儿茶素：阴性查耳酮、橙酮、儿茶素：阴性显橙红紫红色显橙红紫红色 供试液中供试液中不加镁粉不加镁粉，加入浓盐酸进行，加入浓盐酸进行观察，产生红色，则表明供试液中含观察，产生红色，则表明供试液中含有花色素类或某些橙酮或查耳酮类。有花色素类或某些橙酮
23、或查耳酮类。 盐酸镁粉反应盐酸镁粉反应检查花色素2）、四氢硼钠反应（）、四氢硼钠反应（NaBH4）样品甲醇液加NaBH4滴加1%盐酸样品甲醇液喷2%NaBH4滤纸滤纸熏浓盐酸蒸气观察观察选择性还原二氢黄酮（醇）类选择性还原二氢黄酮（醇）类红红紫红色紫红色OOOHOHOHOOH 黄酮类化合物具有结构单元：黄酮类化合物具有结构单元：2、金属离子络合反应、金属离子络合反应 P196均可与重金属生成络合物均可与重金属生成络合物 Al 3+ ，Pb 2+ ，Zr 3+ ，Mg 2+ ，Sr2+，Fe 3+（1）1% AlCl3 / MeOH Al(NO3)3 黄色荧光络合物（黄色荧光络合物（ max =
24、 4.5 nm）（2）1% PbAc2 1%Pb (OH)Ac 黄黄红色红色 （3）2%ZrOCl2 / MeOH + 枸橼酸盐枸橼酸盐 区别区别 3-OH 与与 5-OH黄酮黄酮+ 2%ZrOCl2 / MeOH3-OH黄酮黄酮5-OH黄酮黄酮黄色黄色锆络合物锆络合物 黄色黄色锆络合物锆络合物+ 枸橼酸枸橼酸鲜黄色鲜黄色黄色退去黄色退去原因：原因： 3-OH黄酮锆盐络合物比黄酮锆盐络合物比5-OH黄酮黄酮锆盐络合物稳定锆盐络合物稳定OOOOHOZr / 44+稳定稳定Zr / 44+OOO不稳定不稳定（4）、）、MgAc2 /MeOHPCUV黄酮（醇）黄酮（醇）异黄酮异黄酮黄橙黄褐色黄橙黄褐
25、色二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇） 天蓝色天蓝色荧光荧光OOOHOHOHOHHO+ Sr2+ + 2OH-Sr2+OOO+ 2H2O（6）、）、FeCl3试剂试剂 Ph-OH + Fe3+ 呈色呈色（5）、氨性氯化锶反应（邻二酚羟基）、氨性氯化锶反应（邻二酚羟基 ） 绿棕色黑色绿棕色黑色 3. 硼酸显色反应硼酸显色反应 5-羟基黄酮羟基黄酮 6-羟基查耳酮类羟基查耳酮类在无机酸或有机酸存在条件下，可与硼酸反应，产生在无机酸或有机酸存在条件下，可与硼酸反应，产生亮黄色。草酸亮黄色。草酸显黄色并具有绿色荧光，显黄色并具有绿色荧光，枸橼酸丙酮枸橼酸丙酮-显黄色而无荧光。显黄色而无荧光。与其他类型的黄酮类
26、化合物相区别。与其他类型的黄酮类化合物相区别。3、碱性试剂显色反应、碱性试剂显色反应 （1）碱性试剂：）碱性试剂： NH3气：颜色可逆气：颜色可逆 NaHCO3水溶液：颜色不可逆水溶液：颜色不可逆 （2）碱性试剂反应可以帮助鉴别分子中某些结）碱性试剂反应可以帮助鉴别分子中某些结构构 特征特征 二氢黄酮二氢黄酮OH-查耳酮查耳酮（橙黄色）（橙黄色）黄酮黄酮OH-黄色橙黄色橙深红紫红色深红紫红色放置放置练习：n区别黄酮类和黄酮醇类的化学反应是( )A、HCl/Mg B、Mg(Ac)2 C、二氯氧锆枸橼酸 D、二氯化锶Cn某化合物的醇溶液，滴加某化合物的醇溶液，滴加NaOH呈黄色，呈黄色，醇溶液荧光
27、灯下呈黄色荧光，异羟肟酸铁醇溶液荧光灯下呈黄色荧光，异羟肟酸铁反应阴性，反应阴性，Mg-HCl阳性反应，该化合物阳性反应，该化合物可能是（可能是（ ）C第三节第三节 提取与分离提取与分离分三个阶段：分三个阶段：提取提取纯化纯化分离分离 成分成分-苷或苷元苷或苷元 原材料原材料-叶，茎或根叶，茎或根溶剂溶剂-水或醇水或醇去除杂质去除杂质将总黄酮将总黄酮单体黄酮单体黄酮1、热水提取法：、热水提取法：药材药材10倍量水煎煮倍量水煎煮1h3次次滤液滤液注意：注意： 提取苷类，先破坏酶活性提取苷类，先破坏酶活性 破坏酶活性的方法：沸水提取破坏酶活性的方法：沸水提取 高浓度醇高浓度醇一、提取方法：一、提取
28、方法：苷类苷类药材药材10倍量水煎煮倍量水煎煮1h3次次滤液滤液药材药材10倍量水煎煮倍量水煎煮1h3次次渣渣滤液滤液药材药材10倍量水煎煮倍量水煎煮1h3次次系统溶剂萃取系统溶剂萃取浓缩浓缩浸膏浸膏 例如：例如：槐米粗粉槐米粗粉20倍沸水1h / 1次2水煎液水煎液 芦丁溶解度：芦丁溶解度： 热水热水 冷水冷水 热乙醇热乙醇 冷乙醇冷乙醇 1:200 1:104 1:60 1:650放置放置, 过滤过滤粗品芦丁粗品芦丁苷类苷类重结晶重结晶芦丁芦丁 热乙醇热乙醇芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又可析出，如何易溶于碱液中，酸化后又可析出
29、，如何利用此性质提取芦丁？利用此性质提取芦丁？RUTINOOOHHOOHOHOrutinoseOOOHHOOHOHOHQUERCETIN碱提取酸沉淀法碱提取酸沉淀法 芦丁的工业生产提取方法如下：芦丁的工业生产提取方法如下：P199 槐米粗粉槐米粗粉加约加约6倍量水及硼砂适量，煮沸，在搅拌下缓缓加入倍量水及硼砂适量，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至石灰乳至pH89。在保持该。在保持该pH条件下，条件下，微沸微沸2030分钟，随时补充失去的水份，趁热抽分钟，随时补充失去的水份，趁热抽滤，药渣加滤，药渣加4倍量水，同法再提倍量水，同法再提2次。次。热水或乙醇重结晶热水或乙醇重结晶 芦芦 丁丁在在607
30、0下用浓盐酸调下用浓盐酸调pH5，搅匀，静，搅匀，静置，抽滤，水洗至洗液呈中性，置，抽滤，水洗至洗液呈中性，60干燥。干燥。 芦丁粗品芦丁粗品合并提取液合并提取液注意：注意：（1）碱浓度不宜过高，强碱加热易破坏母核）碱浓度不宜过高，强碱加热易破坏母核（2）花、果类药材，含杂质果胶、粘液质，）花、果类药材，含杂质果胶、粘液质，宜用石灰乳（水），可使含宜用石灰乳（水），可使含COOH的杂的杂质生成钙盐质生成钙盐 ，有利于纯化，有利于纯化（3）酸化时，浓度不宜过强，否则生成盐，）酸化时，浓度不宜过强，否则生成盐，使析出的黄酮又重新溶解，降低产率使析出的黄酮又重新溶解，降低产率2、碱提取酸沉淀法、碱提
31、取酸沉淀法 3、乙醇或甲醇提取法、乙醇或甲醇提取法v高浓度的醇（如高浓度的醇（如90%95%）：）： 适用于提取游离黄酮适用于提取游离黄酮v60%醇：适用于提取黄酮苷类。醇：适用于提取黄酮苷类。 药材药材10倍量水 + H+ + CHCl3回流药渣药渣CHCl3液液 总黄酮苷元总黄酮苷元4、有机溶剂提取法（极性小的苷元）、有机溶剂提取法（极性小的苷元）5、超临界萃取法、超临界萃取法v适合于提取热敏性和易氧化的物质（脂溶性）适合于提取热敏性和易氧化的物质（脂溶性）v实例实例-银杏黄酮和内酯银杏黄酮和内酯分离依据分离依据 A：酸性不同：酸性不同 pH梯度萃取梯度萃取 B：酚：酚OH 数目数目,位置
32、不同位置不同-聚酰胺柱色谱聚酰胺柱色谱 C: 分子量大小分子量大小Sephadex LH-20 D：分子极性：分子极性-硅胶柱色谱硅胶柱色谱分离方法分离方法1.溶剂萃取法溶剂萃取法 水或不同浓度的醇提取水或不同浓度的醇提取 浓缩浓缩 有机溶剂萃取：有机溶剂萃取：游离黄酮与苷游离黄酮与苷 极性大与极性小的黄酮极性大与极性小的黄酮水提取溶液，浓缩后加入多倍量浓醇水提取溶液，浓缩后加入多倍量浓醇 -沉淀水溶性杂质。沉淀水溶性杂质。2.梯度梯度PH萃取法萃取法 适用范围：分离酸性强弱不同的黄酮苷元适用范围：分离酸性强弱不同的黄酮苷元 依次用弱碱依次用弱碱强碱，自有机溶剂中将黄酮强碱，自有机溶剂中将黄酮
33、苷元由强酸苷元由强酸弱酸顺序萃取出来，流程图弱酸顺序萃取出来，流程图如下：如下：混合苷元CHCl35% NaHCO3 5%碱水层CHCl3层5% Na2CO3 碱水层CHCl3层0.2% NaOHCHCl3层碱水层4% NaOH碱水层(7,4二二OH)(7或或4-OH)(一般一般ph-OH)(5-OH黄酮黄酮)柱色谱法柱色谱法OOHOOHHOOH1、硅胶柱色谱：极性差异、硅胶柱色谱：极性差异 OOHOOHHOOglc A B极性大小？洗脱先后？极性大小？洗脱先后？AOOHOOHOCH3H大豆素大豆素 卡来可新卡来可新 分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附力分子内芳香化程度越高，共轭双键越
34、多，则吸附力越强，越强，查耳酮要比相应的二氢黄酮吸附力强。查耳酮要比相应的二氢黄酮吸附力强。例如对橙皮查耳酮的吸附力强于橙皮素：例如对橙皮查耳酮的吸附力强于橙皮素：OHOHOOHOHOCH3OOHOOHOHOCH3H 橙皮查耳酮橙皮查耳酮 橙皮素橙皮素不同类型黄酮化合物，被吸附强弱顺序不同类型黄酮化合物，被吸附强弱顺序 黄酮醇黄酮醇 黄酮黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 异黄酮异黄酮 以以含水移动相含水移动相（如（如甲醇甲醇-水水）作洗脱剂，）作洗脱剂， 黄酮苷比游离黄酮先洗脱下来黄酮苷比游离黄酮先洗脱下来 洗脱的先后顺序一般是：洗脱的先后顺序一般是： 叁糖苷双糖苷单糖苷游离黄酮；叁糖苷双糖苷单糖苷
35、游离黄酮；洗脱剂的影响洗脱剂的影响若以若以有机溶剂有机溶剂（如（如氯仿氯仿-甲醇甲醇）作洗脱剂，）作洗脱剂，结果则结果则相反相反 洗脱剂洗脱能力：洗脱剂洗脱能力： 聚酰胺与各类化合物在水中形成氢键的能力最强，聚酰胺与各类化合物在水中形成氢键的能力最强，在有机溶剂中较弱，在碱性溶剂中最弱。在有机溶剂中较弱，在碱性溶剂中最弱。 洗脱能力由弱至强洗脱能力由弱至强:水甲醇或乙醇（浓度由低到高）丙酮水甲醇或乙醇（浓度由低到高）丙酮稀氢氧化钠水溶液或氨水甲酰胺稀氢氧化钠水溶液或氨水甲酰胺二甲基甲酰胺（二甲基甲酰胺（DMF）尿素水溶液）尿素水溶液 下列化合物进行聚酰胺柱色谱分离，以含水乙下列化合物进行聚酰胺
36、柱色谱分离，以含水乙醇梯度洗脱，判断其洗脱顺序。醇梯度洗脱，判断其洗脱顺序。 EDACB。OOOHOHHOOHAB COOHOOHHOOHOOHOOHHOOHOOHOOHHOO glcOOHOOHHOOglcrha D E （1）常用型号：）常用型号：Sephadex-G型型 Sephadex- LH-20型型（2）分离原理：）分离原理： 游离黄酮：吸附作用（极性大，吸附力强）游离黄酮：吸附作用（极性大，吸附力强） 黄酮苷：黄酮苷： 分子筛作用（分子量大先洗脱）分子筛作用（分子量大先洗脱） 3、葡聚糖凝胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析（3）洗脱剂：）洗脱剂： A：碱水溶液、盐水溶液：碱水溶液、盐水溶
37、液 B：醇性溶剂：醇性溶剂 C：其他，含水丙酮、甲醇：其他，含水丙酮、甲醇 / 氯仿氯仿 例：例： P200 表表 5-5 Ve / Vo小，先被洗下来小，先被洗下来4、大孔吸附树脂法、大孔吸附树脂法v葛根总黄酮v降香总黄酮-AB-8大孔吸附树脂纯化降香总黄酮的工艺研究（广东药学院学报2006）超临界流体色谱法（SFC）v综合了HPLC和GC的优点v以CO2为流动相，适合于非极性化合物的分离v例子：银杏叶黄酮的分离高效液相色谱法高效液相色谱法黄酮、黄酮苷、花色素类为离子型化合物黄酮、黄酮苷、花色素类为离子型化合物 -采用反相柱色谱采用反相柱色谱;多甲氧基黄酮或黄酮类化合物的乙酰物多甲氧基黄酮或
38、黄酮类化合物的乙酰物-正相色谱正相色谱; Thermostatted C18 色谱柱色谱柱流动相：甲醇流动相：甲醇水水磷酸（磷酸（47：53：0.2）流速：流速：1.0ml/min, 检测波长：检测波长：280nmMv0.0050.00100.00分钟1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0012.867黄芩苷对照品黄芩苷对照品色谱图色谱图 Mv0.0020.00分钟1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00 19.00 20.0012.306黄芩供试品色谱黄芩供试品色谱图图
