1、新一代肝癌标志物 - 甲胎蛋白异质体（AFP-L3）北京热景生物2目 录u原发性肝癌及现行诊断u甲胎蛋白异质体AFP-L331、原发性肝癌及现行诊断4原发性肝癌（Primary carcinoma of the liver）肝癌肝癌肝肉瘤肝肉瘤上皮组织上皮组织间叶组织间叶组织肝恶性肿瘤来源于肝脏上皮的肝部恶性肿瘤，分为肝细胞癌来源于肝脏上皮的肝部恶性肿瘤，分为肝细胞癌（HCC，90%）、胆管细胞癌）、胆管细胞癌(5%)、混合细胞癌、混合细胞癌(5%)。病因包括：病毒性肝炎和肝硬化；黄曲霉素；其他病因包括：病毒性肝炎和肝硬化；黄曲霉素；其他化学致癌物；饮水污染等。化学致癌物；饮水污染等。被称为被
2、称为“癌中之王癌中之王”5临床表现u 原发性肝癌早期多无典型症状，临床就诊者多为中晚期病人右上腹疼痛 right upper quadrant pain消化道症状 digestive tract symptom出血倾向 hemorrhagic tendency黄疸、发热 jaundice and febrile肝脏肿大 liver tumefaction转移与旁癌综合征 metastasis and paracarcinoma Syndrome6早期中间阶段进展期终末期单结节/3个结节= 3cm；无卫星灶；无肝外转移Child-Pugh A多结节；无肝外转移门脉受累；肝外转移Child-Pug
3、h C标准治疗方案根治性治疗：切除及/或肝移植化疗Sorafenib对症治疗预期生存时间 60个月 20 个月 11 个月 3 个月肝癌所处肝癌所处阶段与预后之间的关系阶段与预后之间的关系强调肝癌的早期发现，早诊早治78现行诊断1：定位诊断u A、超声检查 u B、放射性核素肝扫描u C、CT检查u D、选择性腹腔动脉或肝动脉造影检查 u E、X线检查 u F、磁共振成像（MRI） u G、肝穿刺行针吸细胞学检查u H、剖腹探查ACBDE1.0 的病灶发现困难良、恶性结节鉴别困难影像学动态监测的高成本，患者难以承受 肝癌发展至一定阶段时, 影像学检查可有相应表现,但往往已发展至疾病中晚期, 且
4、对疾病早期诊断概率低9现行诊断2：实验室辅助诊断u 实验室辅助诊断：包括肝癌标志物、肝功能检测、病毒性肝炎（乙型与丙型）有关指标、免疫指标、其他细胞因子等。u 肝癌标志物：甲胎蛋白（AFP）测定 血清酶等其他肿瘤标记物检查由于缺乏特异性，只作辅助诊断，如碱性磷酸酶、-谷胺酰转肽酶、乳酸脱氢酶的某些同工异构酶谷氨酰转肽酶（GGT）及其同工酶、-L-岩藻苷酶(AFU)、异常凝血酶原（DCP）、高尔基体蛋白 73(GP73)，5核苷酸磷酸二酯酶(5NPD)同工酶、醛缩酶同工酶 A（ALD-A）和胎盘型谷胱甘肽S-转移酶（GST）等，还有异常凝血酶原（DCP）、铁蛋白(FT)和酸性铁蛋白(AIF)等。
5、部分 HCC 患者，可有癌胚抗原（CEA）和糖类抗原CA19-9等异常增高。10甲胎蛋白（AFP）u AFP: 一种糖蛋白。正常情况下，来自胚胎的肝细胞和卵黄囊，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失。正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20ug/L。u 1956年发现，60年代末应用于临床，70年代用于自然人群与肝癌高危人群普查。至今被公认为优秀的肝癌诊断标记物而广泛使用。u 一般认为，AFP是HCC相对特异的肿瘤标志物，AFP持续升高是发生HCC的危险因素。u AFP临床价值：a、目前较好的早期诊断方法，可在症状出现前6个月以上作出诊断，可与影像相互补充。b、为反映病情动态变化和评估疗效的敏感指
6、标。c、可检查出根治切除术后亚临床期复发与转移11通过AFP诊断HCC的临床标准u原发性肝癌诊疗规范（2011版）：对于AFP400g/L超过1个月，或200g/L持续2个月，排除妊娠、生殖腺胚胎癌和活动性肝病，应该高度怀疑肝癌u中国抗癌协会肝癌专委会：2001 年提出了原发性肝癌的临床与分期标准，AFP 对原发性肝癌的诊断值定为400g/ L。12AFP的不足u 近年来有报道指出,以上述标准诊断原发性肝癌,敏感性为39-64%, 特异性为76-91%, 对早期肝癌具有9-32%阳性预测值u 有近1/3的HCC患者AFP为阴性（敏感性不足），同时20-50%的慢性肝炎、肝硬化也合成AFP（特异
7、性不足）, 这给HCC的诊断带来了困难。特异性不足20-50%的慢性肝炎、肝硬化也合成AFP2010 版美国肝病研究学会(AASLD)指南已不再将AFP作为筛查指标但我国的HCC大多与HBV感染相关，与西方国家HCC致病因素不同（多为HCV、酒精和代谢性因素），结合国内随机研究(RCT) 结果和实际情况，目前对HCC的常规监测筛查指标中继续保留AFP。 132、甲胎蛋白异质体AFP-L314甲胎蛋白异质体：AFP-L3AFP-L3uAFP是糖蛋白，其蛋白上含有不同糖链u依据不同糖链与小扁豆凝集素小扁豆凝集素LCALCA亲和力，可将总AFP分为 AFP-L1AFP-L1、AFP-L2AFP-L2
8、、AFP-L3AFP-L3，其中： AFP-L1来源于良性肝病细胞（LCA非结合型） AFP-L2来源于孕妇（LCA弱结合型） AFP-L3来源于癌变肝细胞（LCA强结合型）15如何使用这一指标？a.分别测定样本中总总AFPAFP浓度浓度及其异质体异质体AFP-L3AFP-L3的浓度b.计算AFP-L3AFP-L3占总占总AFPAFP比率比率（AFP-L3/AFPAFP-L3/AFP） 以下简写成以下简写成简称简称)c.以 10% 10% 为Cutoff确认结果阳性： AFP-L3%10% 阴性： AFP-L3%10%16美国：AFP-L3已获得FDA批准特异性不同的各类HCC诊断标志物文献:
9、Recent Developments in the First Detection of Hepatocellular CarcinomaJoseph B. Lopez Clin Biochem Rev Vol 26, August 2005 I 6517中国:AFP-L3:AFP-L3列入肝癌诊断标准 AFP-L3已在1999年第四届全国肝癌学术会议第四届全国肝癌学术会议上获得通过，确定为原发性肝癌临床诊断标准的肝癌标记物之一。 认为是比单纯的AFP更为特异的原发性肝癌指标。18中国：AFP-L3进入原发性肝癌诊疗规范（2011版）u血清血清AFP AFP 及其及其异质体异质体是诊断肝癌的
10、重要指标和特异性最强的肿瘤标记物，国内常用于肝癌的普查普查、早期诊断早期诊断、术后监测和随访。19AFP-L3的临床意义u鉴别良恶性肝病u更好的肝癌早期预警指标u肝癌预后的评价指标u肿瘤恶性程度指标20一、鉴别良恶性肝病国内外研究结果都一致表明：慢性肝病血清慢性肝病血清 AFP-L3百百分比很低分比很低, 而原发性肝癌很高而原发性肝癌很高, 表明表明AFP-L3测定非常有测定非常有助于良、恶性肝病的鉴别诊断助于良、恶性肝病的鉴别诊断。应用应用AFP-L3鉴别良、恶性肝病应注意以下题鉴别良、恶性肝病应注意以下题:(1) AFP-L3上升与血清 AFP 值无关, 只要AFP 阳性, AFP-L3就
11、可能高；(2) 大量研究表明血清 AFP 为 2050ng/ml , 而AFP-L3呈阳性，从而使肝癌得到及早诊断。因此, AFP-L3也非常适用于AFP低浓度阳性良、恶性肝病的鉴别诊断；(3) 约有35% 45% 小肝癌 (直径 2 cm ) 病人已显示AFP-L3显著升高。因此, AFP-L3对肝癌早期诊断很有价值。21 鉴别良恶性肝病AFP-L3%对对HCC检检测的特异性高达测的特异性高达95%以上。以上。日本医师会雄志2004年第131卷第5期研究一：HCC与良性肝病22AFP-L3%，AFP 对肝病鉴别诊断的对比 （检验科常规应用数据统计）AUC=0.6850255075100125
12、0255075100125Sensitivity%100% - Specificity%Sensitivity%AUC=0.86702550751001250255075100125Sensitivity%100% - Specificity%Sensitivity%AFPROC曲线AFP-L3%ROC曲线数据来源：福建省福州传染病医院数据来源：福建省福州传染病医院研究三：综合性能对比23二、AFP-L3：更优秀的早期预警指标u AFP-L3随肝细胞癌变在血中升高。随肝细胞癌变在血中升高。研究发现研究发现AFP-L3升高较影像学检查阳性早出现升高较影像学检查阳性早出现 328个月个月, AFP
13、-L3阳性预测肝癌发生的正确率为阳性预测肝癌发生的正确率为 94%1 1。uAFP-L3升高的肝硬化病人大多数在升高的肝硬化病人大多数在 3 18 个月内个月内被诊断为肝癌被诊断为肝癌2 2；u另外，在影像学检查尚未发现肝癌特征性占位性病另外，在影像学检查尚未发现肝癌特征性占位性病变时变时, 对对 AFP 低浓度阳性病例进行低浓度阳性病例进行AFP-L3检测可检测可以早期预警肝癌发生以早期预警肝癌发生3 3。1Chin Med SciJ , 1992, 7 ( 4) : 191- 1952N Engl J Med, 1993, 328( 25) : 1802-18063Hepatology,1
14、995, 22 ( 3 ) :802- 807.24AFP400ng/mlAFP-L3%10CT阴性AFP400ng/mlAFP-L3%10CT阴性AFP400ng/mlAFP-L3%10CT阳性阳性AFP400ng/mlAFP-L3%10CT阳性阳性研究一：半年及三年随访各1例哈尔滨铁路中心医院25解放军第302302医院临床主诊断AFP阳性、AFP-L3% 阳性AFP阳性、AFP-L3% 阴性初次诊断非肝癌21626个月后肝癌123肝癌发生率57.1%4.8%危险率增加倍数12倍该研究揭示AFP-L3与AFP值无相关性，可以作为一个独立肝细胞癌诊断因素。AFP-L3%对于AFP阳性时良、恶
15、性肝病的鉴别及肝癌的早期预警诊断具有重要意义研究三：临床随访实例26三、AFP-L3：肝癌预后评价指标u肝癌术后AFP-L3阳性组平均生存期显著低于阴性组,术后 AFP-L3仍很高的患者其肝癌多灶性复发或门静脉瘤栓发生率明显高于AFP-L3正常者；uAFP-L3正常的患者存活率高于AFP-L3升高的患者；u大量的研究报道认为AFP-L3是恶性生物学的良好指标, 可作为一个独立的肝癌预后标志物指标。27总生存率比较图术后术后AFP-L3%阴性阴性32例HCC患者术后术后AFP-L3%阳性阳性23例HCC患者P=0.000628上海东方肝胆医院Ann Surg Oncol (2011) AFP-L
16、3/总总AFP高比值，是病理侵犯性的一个指标。高比值，是病理侵犯性的一个指标。 与那些术与那些术前阴性患者相比，术前前阴性患者相比，术前AFP-L3阳性患者复发时间显著较早阳性患者复发时间显著较早复发时间中位数为复发时间中位数为22.02.4个月个月vs 45.06.9个月个月 29手术后，与手术后，与AFP-L3持续阴性结果的患者相比，持续阴性结果的患者相比，AFP-L3持续阳持续阳性或阴性转阳性结果患者中，复发人数显著较多，尤其是远处性或阴性转阳性结果患者中，复发人数显著较多，尤其是远处转移。转移。 如果术前AFP-L3阳性和术后AFP-L3持续阳性或阴性转阳性，那么我们可以预测肿瘤行为更
17、加具有侵犯性的，肿瘤复发率较高，以及临床结果较差。HCC患者的AFP-L3/总AFP比值越高，就越需要积极的治疗及密切随访。31四、AFP-L3 是肿瘤的恶性程度指标影像学研究发现AFP-L3%阳性的HCC通常有丰富的肝动脉血液供给，肿瘤的倍增时间较短。32AFP-L3%的检测决定于AFP-L3的分离水平u 传统异质体测定方法对于技术的要求较高、操作繁琐、试剂昂贵。主要采用亲合电泳显影技术u 热景生物在科技部资金的支持下，独家研发出捕获AFP-L3的专利技术对比项目凝集素亲和电泳法热景生物产品操作繁琐繁琐简单、半自动简单、半自动时间4848小时小时4040分钟分钟回收率-92%92%灵敏度5n
18、g5ng1ng1ng价格高高低廉低廉实验模式自行检测自行检测开放，配套用开放，配套用33检 测 原 理34亲和层析吸附离心法分离AFP-L3原理示意图35u 2012：卫生部“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”专项，“传染病现场快速诊断试剂的研制”课题u 2010：“科技部“863”计划重大项目“体外诊断技术产品开发”课题u 2007,2013：科技部科技型中小企业创新基金（含北京市配套课题）u 2012：北京科委“首都十大危险疾病-肝癌早期诊断标志物研究”课题产品研发及产业化进程中来自国家的大力支持36AFP-L3%已在全国范围内快速推广应用：解放军302医院、解放军307医院、地坛医院、佑安医院、武警总医院、上海东方肝胆医院、上海曙光医院、上海仁济医院、天津第一中心医院、山东省立医院、南京军区福州总院、盛京医院、陆军总医院、福州传染病医院。
